·論著·

院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床病理學(xué)研究。

Ki-67在癌前病變及胃腺癌中的表達(dá)及意義

賈振軍1，李其海2，曲勇2，周平3，韓紅梅4，周祖平5

(1.山東鋁業(yè)公司醫(yī)院病理科，山東 淄博 255069；2.山東鋁業(yè)公司醫(yī)院內(nèi)科，山東 淄博 255069；3.山東省淄博市第一醫(yī)院病理科，山東 淄博 255200；4.山東省淄博市中心醫(yī)院病理科，山東 淄博 255000；5.淄博礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院病理科，山東 淄博 255120)

[摘要]目的分析Ki-67在胃癌前病變及胃腺癌中的表達(dá)，探討Ki-67與胃腺癌發(fā)生、胃腺癌分化程度和浸潤(rùn)深度的關(guān)系。方法采用SP免疫組織化學(xué)方法,對(duì)102例慢性胃炎、158例胃黏膜異型增生和130例胃腺癌患者進(jìn)行Ki-67檢測(cè)，分析其相關(guān)關(guān)系和臨床病理意義。結(jié)果Ki-67在胃炎、低級(jí)別異型增生、高級(jí)別異型增生及胃腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率明顯遞增，且隨著病變加重，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)顯著增多(P<0.05)。130例胃腺癌組織高中分化腺癌Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率低于低分化腺癌(P<0.01)。未侵及全層者Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率低于侵及全層或突破漿膜者(P<0.01)。結(jié)論Ki-67在胃腺癌的發(fā)生中發(fā)揮重要作用，胃腺癌Ki-67表達(dá)與腫瘤分化程度和浸潤(rùn)深度有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]胃腫瘤；胃炎；Ki-67抗原；免疫組織化學(xué)doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.08.014

[收稿日期]2015-02-06；[修回日期]2015-03-06

[基金項(xiàng)目]山東鋁業(yè)公司2014年科技計(jì)劃項(xiàng)目(SLYF 2014-3)

[作者簡(jiǎn)介]賈振軍(1967-)，男，山東淄博人，山東鋁業(yè)公司醫(yī)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R735.2[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

Expression and significance of Ki-67 in precancerous lesion and gastric adenocarcinoma

JIA Zhen-jun1，LI Qi-hai2，QU Yong2,ZHOU Ping3,HAN Hong-mei4,ZHOU Zu-ping5

(1.Department of Pathology，the Hospital of Shandong Aluminum Industry Company,Zibo 255069,China;

2.Department of Internal Medicine,the Hospital of Shandong Aluminum Industry Company,Zibo

255069,China;3.Department of Pathology,the First Hospital of Zibo City，Shandong Province,

Zibo 255200,China;4.Department of Pathology,Central Hospital of Zibo City，

Shandong Province,Zibo 255000,China; 5.Department of Pathology,

Central Hospital of Zibo Mining Group,Zibo 255120,China)

Abstract[] ObjectiveTo analyze the expression of Ki-67 in precancerous lesion and gastric adenocarcinoma and to investigate the relationship between Ki-67 expression and gastric adenocarcinoma,tumor differentiation and invasion depth.MethodsSP immunohistochemical method was applied to detect the expression of Ki-67 in chronic gastritis(102 cases),gastric dysplasia(158 cases) and gastric adenocarcinoma(130 cases) and to analyze its relationship and clinical pathological significance.ResultsImmunohistochemical results showed that the rates of positive expression of Ki-67 in chronic gastritis,gastric low grade dysplasia,high grade dysplasia and gastric adenocarcinomas showed obviously progressive increase with lesion degree(P<0.05).In 130 cases with gastric adenocarcinoma,the positive expression rate of well-differentiated adenocarcinoma of Ki-67 was lower than that of poor-differentiated adenocarcinoma(P<0.01).The positive rate of Ki-67 in not invaded full-thickness was lower than that in invaded full-thickness or breakthrough of serous membrane(P<0.01).ConclusionKi-67 plays important roles in gastric carcinogenesis.The positive expression of Ki-67 in gastric adenocarcinoma related with the tumor differentiation and invasion.

[Key words]stomach neoplasms；gastritis；Ki-67 antigen；immunohistochemistry

胃腺癌是最常見(jiàn)的消化道腫瘤之一，主要與遺傳、自身免疫、幽門(mén)螺桿菌感染、生活環(huán)境和飲食等多種因素有關(guān)，其確切病因還不完全清楚。胃腺癌的發(fā)生是一個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程，胃黏膜細(xì)胞癌變通常認(rèn)為經(jīng)歷淺表性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→低級(jí)別異型增生→高級(jí)別異型增生→腺癌等衍變階段。在腫瘤的形成過(guò)程中，異型增生是顯微鏡下第1個(gè)可以發(fā)現(xiàn)的解剖學(xué)改變[1]。低級(jí)別異型增生，多發(fā)生在黏膜表面,細(xì)胞核緊密排列在基底，染色質(zhì)密集深染，核增大,分裂象較少，細(xì)胞核常位于細(xì)胞的一半或2/3以下，保持一定的極性，腺體結(jié)構(gòu)稍不規(guī)則，很少出現(xiàn)背靠背及共壁。高級(jí)別異型增生，含有腫瘤細(xì)胞，通常是立方形，核漿比高，核仁明顯雙嗜性，結(jié)構(gòu)紊亂更明顯，大量核分裂(其中很多呈異型性)，重要的是胞核經(jīng)常延伸至細(xì)胞的胞腔，核極性通常消失。低級(jí)別異型增生和高級(jí)別異型增生是主要的胃癌前病變，是正常胃黏膜癌變的必經(jīng)過(guò)程，同時(shí)伴隨基因的改變。對(duì)胃腺癌的有效防治一直是醫(yī)學(xué)界相關(guān)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)，對(duì)胃腺癌實(shí)施針對(duì)病因的一級(jí)預(yù)防比較困難，因此，對(duì)胃癌前病變的研究就成了胃腺癌二級(jí)預(yù)防的重要內(nèi)容之一。對(duì)胃癌變過(guò)程不同階段Ki-67基因表達(dá)及量異常的研究可能為病變的進(jìn)展提供預(yù)測(cè)指標(biāo)。Ki-67為目前較為肯定的核增殖標(biāo)志基因，多用于判斷腫瘤的良、惡性及惡性程度，也用于探討細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞周期與腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等，在胃腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用，分化程度、浸潤(rùn)深度都是影響胃癌患者預(yù)后的主要因素，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)不同分化程度胃腺癌組織中Ki-67的表達(dá)情況，分析其在胃腺癌的發(fā)生和胃腺癌分化程度、浸潤(rùn)深度中的意義至關(guān)重要。報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料2009年1月—2014年1月共收集慢性胃炎102例，男性57例，女性45例，年齡28～79歲，平均(47.50±3.42)歲；胃黏膜異型增生158例，男性91例，女性67例，年齡31～79歲，平均(49.52±2.85)歲；胃腺癌根治標(biāo)本130例(其中山東鋁業(yè)公司醫(yī)院病理科收集胃腺癌組織標(biāo)本60例、淄博市中心醫(yī)院病理科收集胃腺癌組織標(biāo)本29例、淄博市第一醫(yī)院病理科收集胃腺癌組織標(biāo)本20例、中國(guó)人民解放軍第一四八醫(yī)院病理科收集胃腺癌組織標(biāo)本11例、淄礦集團(tuán)中心醫(yī)院病理科收集胃腺癌組織標(biāo)本10例)，男性78例，女性52例，年齡35～65歲，平均(51.50±1.41)歲，腺癌腫物直徑1.00～13.50 cm,平均(4.50±2.53) cm。選擇胃腺癌標(biāo)本均為分化型腺癌，所有患者均未經(jīng)化療。胃腺癌組織未侵及漿膜42例，侵及或突破漿膜88例；高中分化腺癌43例，低分化腺癌87例。上述標(biāo)本均經(jīng)原單位取材后，收集到山東鋁業(yè)公司醫(yī)院病理科，統(tǒng)一取材進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，由課題組2名副主任醫(yī)師閱片，確定診斷。3組性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2免疫組織化學(xué)方法所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，3 μm連續(xù)切片。常規(guī)HE染色，觀察胃癌組織的的病理形態(tài)。單克隆抗體Ki-67及PV6000 檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，免疫組織化學(xué)染色采用SP二步法。陽(yáng)性對(duì)照為已知的陽(yáng)性組織切片，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷方法取3個(gè)400倍高倍鏡視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占細(xì)胞百分比的平均值，Ki-67陽(yáng)性為細(xì)胞核著色，呈棕黃色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性(-),陽(yáng)性細(xì)胞占10%～25%為陽(yáng)性(+),陽(yáng)性細(xì)胞占>25%～75%為陽(yáng)性(++),陽(yáng)性細(xì)胞>75%為陽(yáng)性(+++)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料比較采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Ki-67在胃炎、低級(jí)別異型增生、高級(jí)別異型增生及胃腺癌中的表達(dá)Ki-67在胃炎、低級(jí)別異型增生、高級(jí)別異型增生及胃腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率明顯遞增，且隨著病變加重，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)顯著增多(P<0.05)，見(jiàn)表1。Ki-67表達(dá)分級(jí)情況見(jiàn)圖1～4。

2.2Ki-67在不同胃腺癌分化程度和浸潤(rùn)深度中的表達(dá)130例胃腺癌組織高中分化腺癌Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率低于低分化腺癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。未侵及全層者Ki-67陽(yáng)性表達(dá)率低于侵及全層或突破漿膜者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表1　Ki-67在胃癌衍變過(guò)程中的表達(dá)

* P<0.05與胃炎比較　# P<0.05與低級(jí)別異型增生　△ P<0.05與高級(jí)別異型增生(χ 2檢驗(yàn))

3討論

Ki-67是目前公認(rèn)的重要核增殖標(biāo)志基因，可以作為一種評(píng)估惡性腫瘤治療與預(yù)后的分子靶標(biāo)[2],其表達(dá)量的高低對(duì)胃腺癌的分化程度及浸潤(rùn)深度有著重要的臨床意義,其定位于10號(hào)染色體,是從霍奇金淋巴瘤細(xì)胞系L428的粗核成分免疫鼠中制備分離出的抗體[3]，在增殖細(xì)胞的G1、S、G2和M期表達(dá)，G0期不表達(dá)。Ki-67的表達(dá)與細(xì)胞增殖狀態(tài)密切相關(guān)，是反映細(xì)胞增殖的主要生物學(xué)指標(biāo)，很多關(guān)于胃腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、腫瘤大小、年齡、性別等生物學(xué)行為以及判斷其危害性具有重要意義的研究，結(jié)論并不完全一致。

本研究結(jié)果顯示，Ki-67在胃炎、低級(jí)別異型增生、高級(jí)別異型增生和胃腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯遞增(P<0.05)。這與苗龍等[4]和陳昊等[5]的研究結(jié)果相符合。王彩霞等[6]研究表明胃腺癌細(xì)胞的增殖活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于非腫瘤性胃黏膜。目前的研究已發(fā)現(xiàn)在多種實(shí)體惡性腫瘤中Ki-67的表達(dá)遠(yuǎn)高于正常組織[7]及良性病變組織，顯示Ki-67有可能成為確定癌前人群高危個(gè)體的生物標(biāo)志物[8]。

有研究顯示Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，但與臨床分期和浸潤(rùn)深度有關(guān)[9]。也有資料顯示Ki-67陽(yáng)性表達(dá)與胃腺癌是否轉(zhuǎn)移之間有顯著相關(guān)性，Ki-67 在低分化組的陽(yáng)性表達(dá)率高于中高分化組[10]。本研究結(jié)果顯示，Ki-67在胃高中分化腺癌的陽(yáng)性表達(dá)率低于低分化腺癌，在未侵及全層者的陽(yáng)性表達(dá)率低于侵及全層或突破漿膜者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Ki-67為敏感的細(xì)胞核增殖標(biāo)記物，常用于判斷腫瘤的增殖活性。Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率隨著腫瘤分化程度的下降而升高，隨腫瘤浸潤(rùn)深度的增加而逐漸升高[11]。有研究指出，癌細(xì)胞分化程度越低，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ki-67表達(dá)越強(qiáng)[12]。國(guó)外資料顯示,在胃鏡活組織檢查標(biāo)本與胃癌切除標(biāo)本中進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[13]，胃鏡活組織檢查標(biāo)本可以進(jìn)行Ki-67檢測(cè)。

綜上所述，Ki-67在胃腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，且在胃腺癌分化程度和浸潤(rùn)深度中具有重要意義。因此，檢測(cè)胃鏡活組織檢查組織中Ki-67在胃低級(jí)別異型增生組織、高級(jí)別異型增生組織中的表達(dá),對(duì)鑒別癌變的發(fā)展趨勢(shì)具有重要意義，有利于對(duì)胃腺癌活組織檢查標(biāo)本患者的浸潤(rùn)深度進(jìn)行評(píng)估，可幫助胃腺癌患者選擇治療方案，Ki-67高表達(dá)提示更易出現(xiàn)胃腺癌浸潤(rùn)深度增加，更表現(xiàn)為低分化，惡性程度更高，其表達(dá)水平高低對(duì)判斷和估計(jì)患者的預(yù)后將具有重要的參考作用。(本文圖見(jiàn)封三)

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(本文編輯：趙麗潔)