（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

一例豬流行性腹瀉的診治

代振江1，劉 釗1，曾智勇1*，湯德元1，梁海英1，王偉丞1

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea， PED)是由豬流行性病毒(PEDV)引起的接觸性腸道傳染病，其特征為初生仔豬嘔吐、腹瀉、脫水。近幾年來(lái)，國(guó)內(nèi)PED呈高發(fā)趨勢(shì)，特別是哺乳仔豬病死率高達(dá)100%，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。貴陽(yáng)市某豬場(chǎng)有母豬600余頭，母豬于產(chǎn)前60 d、25 d先后對(duì)PEDV和TGEV進(jìn)行了2次免疫，2015年1月初母豬首發(fā)腹瀉，而后3～7日齡仔豬相繼發(fā)病死亡，1月份死亡300余頭哺乳仔豬；經(jīng)過(guò)再次免疫及返飼后，2月份母豬生產(chǎn)基本正常，3月初又零星發(fā)病，中下旬大量發(fā)病，截至目前已死亡10日齡以內(nèi)的哺乳仔豬1 000余頭。為確診本次發(fā)病的病原，該豬場(chǎng)送檢了2頭正在發(fā)病的6日齡哺乳仔豬，患豬主要表現(xiàn)為消瘦、嘔吐和腹瀉，剖檢可見(jiàn)小腸膨脹，充滿黃色液體，腸壁變薄，腸系膜淋巴結(jié)腫大呈土黃色，腹股溝淋巴結(jié)腫大呈黃褐色，胃內(nèi)充滿大量凝乳團(tuán)塊，其他器官未見(jiàn)明顯病理變化。據(jù)臨床發(fā)病特點(diǎn)及解剖特征，初步診斷疑似“冬痢”。為進(jìn)一步確診病原，對(duì)送檢病豬腸內(nèi)容物分別提取核酸后，分別進(jìn)行了TGEV和PEDV的實(shí)驗(yàn)室核酸檢測(cè)，其結(jié)果顯示PEDV為陽(yáng)性，TGEV系陰性，現(xiàn)將檢測(cè)過(guò)程報(bào)道如下。

1??材料

1.1 病料

系分別采自2頭發(fā)病仔豬的小腸內(nèi)容物（含腸黏膜）。

1.2 主要試劑

TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0、 PrimeScript One Step PT-PCR Kit VER.2.0、DL2000皆購(gòu)自大連寶生物公司；其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2??方法

2.1 病料的處理及核酸的提取

分別取適量腸內(nèi)容物反復(fù)凍融3次后，用十字勻漿器再次進(jìn)行勻漿，而后12 000 r/min離心10 min，取上清，用TaKaRa MiniBEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver.4.0試劑盒進(jìn)行核酸的提取。

2.2 病原核酸檢測(cè)

分別用PEDV和TGEV的特異性引物，以提取的核酸為模板，參照一步法RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)，對(duì)PEDV和TGEV進(jìn)行核酸檢測(cè)，其反應(yīng)總體系為50μL：2×1 StepBuffer 25μL，模板7.0μL，上下游引物各1.0μL，PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2μL，RNase Free H2O 14μL；反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35個(gè) 循 環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

3??結(jié)果

分別取RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5μL，于0.8%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳檢測(cè)，電泳結(jié)果如圖1所示。病原核酸檢測(cè)結(jié)果表明，送檢的2頭6日齡仔豬均存在PEDV的感染，未見(jiàn)TGEV感染。

4??討論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)室診斷可知，該豬場(chǎng)存在PEDV的感染，另?yè)?jù)主訴臨床表現(xiàn)及流行病學(xué)特征，可基本認(rèn)為此豬群發(fā)病與PEDV的感染密切相關(guān)。據(jù)了解，該豬場(chǎng)在母豬產(chǎn)前60 d、25 d先后對(duì)PEDV和TGEV進(jìn)行了2次免疫，但此后仍相繼發(fā)病，并死亡10日齡以內(nèi)的哺乳仔豬1 000余頭。先后2次免疫仍然發(fā)病，其原因：一方面可能存在免疫失敗，由于目前對(duì)PEDV及TGEV疫苗免疫后是否產(chǎn)生有效免疫尚缺乏有效的檢測(cè)手段，因此對(duì)于是否免疫失敗無(wú)法判斷；另一方面也可能是目前的PEDV流行毒株發(fā)生了較大的變異，導(dǎo)致疫苗免疫效果不理想，致使感染豬場(chǎng)長(zhǎng)期存在散毒，反復(fù)感染壓力較大。

圖1 患豬腸內(nèi)容物病原核酸檢測(cè)結(jié)果

鑒于此，對(duì)于該病應(yīng)采取綜合的防治措施予以應(yīng)對(duì)。其總體原則是全進(jìn)全出，加強(qiáng)生物安全，對(duì)產(chǎn)房進(jìn)行徹底清潔和消毒。母豬進(jìn)入產(chǎn)房前，除做好產(chǎn)房的徹底消毒外，還應(yīng)做好母豬的清潔和帶豬消毒；產(chǎn)房工作人員應(yīng)相對(duì)固定，且禁止相互走動(dòng)；同時(shí)，加強(qiáng)仔豬保溫和保持產(chǎn)房的清潔干燥，嚴(yán)防PEDV的傳入。此外，還應(yīng)徹底搞好產(chǎn)房外豬場(chǎng)的環(huán)境衛(wèi)生和消毒。

2015-04-12）

省校合作計(jì)劃項(xiàng)目，黔科合LH字[2014]7670號(hào)。

代振江（1991-），男，在讀碩士，研究方向：動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。

曾智勇（1978-），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究。