大腸癌患者垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因、堿性成纖維細(xì)胞生長因子及血管內(nèi)皮生長因子-C水平檢測意義

呂颯美張健吳友偉 周健史麗萍

(陜西省人民醫(yī)院消化內(nèi)二科，陜西西安710068)

摘要〔〕目的通過檢測大腸癌患者體內(nèi)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C的表達水平，探討其在大腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相互間關(guān)系。方法接受手術(shù)治療的大腸癌(腫瘤組)患者78例的大腸腺癌組織標(biāo)本。另外收集經(jīng)病理證實是正常黏膜的組織標(biāo)本18例作為正常組。比較兩組PTTG、bFGF以及VEGF-C的陽性表達率以及上述三種因子各自與大腸癌臨床病理分期的關(guān)系。結(jié)果腫瘤組PTTG、bFGF以及VEGF-C陽性細(xì)胞表達率均明顯比正常組高(P<0.01)。PTTG、bFGF以及VEGF-C表達在不同的分化程度、性別以及年齡的組別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及Dukes分期比較均有統(tǒng)計學(xué)差異P<0.05)。結(jié)論PTTG、bFGF和VEGF-C在老年大腸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用，其中促淋巴管以及血管生成的作用在大腸癌發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移、侵襲中均起了重要的作用，已是治療腫瘤的一個新靶點。

關(guān)鍵詞〔〕大腸癌；垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)；堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C

中圖分類號〔〕R735.34〔文獻標(biāo)識碼〕A〔

基金項目：陜西省科技計劃項目(2008K14-G2)

第一作者：呂颯美(1973-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事消化系統(tǒng)腫瘤研究。

大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率、死亡率逐年增加，而其中老年患者發(fā)病率也呈上升趨勢〔1〕。垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因(PTTG)是在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中起誘導(dǎo)作用的一種細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因，堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)對腫瘤血管生成具有促進作用、在腫瘤的浸潤和發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-C的特異性最強〔2〕。本研究旨在通過檢測大腸癌患者體內(nèi)PTTG、bFGF以及VEGF-C的表達水平，探討其在大腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用及相互間關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料2012年10月至2014年3月在我院接受手術(shù)治療的78例大腸癌患者的大腸腺癌組織標(biāo)本為腫瘤組。術(shù)前均未接受放射以及藥物的相關(guān)治療。其中女35例，男43例；年齡(73.1±5.2)歲。另外收集18例經(jīng)病理證實是正常黏膜的組織標(biāo)本為正常組，男10例，女8例，年齡(71.7±4.9)歲。兩組年齡、性別構(gòu)成差異不顯著(P>0.05)。

1.2研究方法快速剪取100 mg離體后的組織封存于液氮內(nèi)，常規(guī)石蠟包埋其余組織。主要儀器為英國Shandon Thrmo公司生產(chǎn)的自動脫水機；英國Shandon S325旋轉(zhuǎn)式切片機；山東立鶴G2X-DH-40X45電熱恒溫箱；日本Olympus BX40F4顯微鏡等。主要試劑為北京中杉金橋ZA-0230兔抗人PTTG多克隆抗體PTTG1、ZA-0266兔抗人VEGF-C多克隆抗體；Santa Cruz Biotechnology.Inc 147兔抗人bFGF多克隆抗體；福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司KIT-5010即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒羊抗鼠/兔。

1.3PTTG、bFGF和VEGF-C的水平檢測免疫組化法。將石蠟切成5 μm厚度的薄片，于80℃的恒溫箱內(nèi)烘烤50 min，用二甲苯脫蠟；3% H2O2孵育10 min，將內(nèi)源性過氧化物的酶活性消除；蒸餾水洗滌后浸泡于PBS液中5 min，于微波爐內(nèi)將pH為6.0的枸櫞酸鈉緩沖液(0.01 mol/L)加熱至沸騰后，放入上述組織切片，15 min抗原熱修復(fù)，于室溫下靜置40 min，反復(fù)3次PBS液(5 min/次)沖洗；滴加一抗，于4℃的冰箱內(nèi)過夜；反復(fù)3次PBS液(5 min/次)沖洗；滴加二抗，室溫下孵育15 min；反復(fù)3次PBS液(5 min/次)沖洗；DAB顯色劑顯示反應(yīng)5 min，終止后用蒸餾水洗滌；蘇木素復(fù)染后透明，封片以及鏡檢。

1.4結(jié)果判定PTTG、bFGF主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達，少量在細(xì)胞核中定位。用PBS替代一抗作陰性對照，用已知胃癌的陽性組織切片作陽性對照。陽性反應(yīng)為細(xì)胞質(zhì)有棕黃色顆粒出現(xiàn)，判定使用Volm雙評分法，在腫瘤染色均勻的區(qū)域，選取400倍的高倍鏡視野5個：依據(jù)染色強度評分：無著色是0分，淺棕黃色是1分，棕黃色是2分，棕褐色是3分；依據(jù)陽性細(xì)胞的百分率評分：<25%1分，25%～50%2分，>50%3分。綜合上述兩項值判定結(jié)果：陰性(-)為0分，弱陽性(+)為1～2分，中度陽性()為3～4分，強陽性()5～6分。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件行t和χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1兩組的PTTG表達比較腫瘤組PTTG陽性細(xì)胞的表達率明顯比正常組高(χ2=84.62，P<0.01)。見表1。

2.2兩組bFGF表達比較腫瘤組bFGF陽性細(xì)胞的表達率明顯比正常組高(χ2=84.51，P<0.01)。見表2。

2.3兩組VEGF-C表達比較腫瘤組VEGF-C陽性細(xì)胞的表達率明顯比正常組高(χ2=79.23，P<0.01)。見表3。

2.4大腸癌臨床病理特征與PTTG、bFGF、VEGF-C表達的關(guān)系PTTG、bFGF、VEGF-C表達在不同的分化程度、性別以及年齡無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；而在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及Dukes分期有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。見表4。

表1　腫瘤組與正常組PTTG表達比較〔 n(%)〕

與正常組比較：1)P<0.01;表2、表3同

表2　腫瘤組與正常組bFGF表達比較〔 n(%)〕

表3　腫瘤組與正常組VEGF-C表達比較〔 n(%)〕

表4　大腸癌臨床病理特征與PTTG、bFGF、VEGF-C表達的關(guān)系〔 n(%)〕

3討論

正常的成人組織(如結(jié)腸、腎臟等)中PTTG僅為弱表達，有時甚至無法檢測到〔3〕，但是在高增殖活性的胸腺中卻有高表達，在腫瘤細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞系中均有高表達，說明PTTG在腫瘤的發(fā)生過程中扮演了重要的角色。PTTG不僅具有致使細(xì)胞凋亡的作用，還可以形成細(xì)胞的非整倍體，雙重角色可能是其對腫瘤形成進行誘導(dǎo)的機制之一〔4〕。

有資料顯示，在黑色素瘤、白血病、肝癌及肺癌等大量腫瘤細(xì)胞內(nèi)bFGF均有較高的表達〔5〕。bFGF在腫瘤細(xì)胞內(nèi)可以起到抑制腫瘤細(xì)胞凋亡以及促進增殖的作用，可以對細(xì)胞的DNA合成起到調(diào)節(jié)作用，刺激血管的生長以及促進細(xì)胞分裂的作用〔6〕。癌變發(fā)生時，由于致癌因子的作用，腫瘤細(xì)胞內(nèi)bFGF的基因活性隨之增強，通過旁分泌以及自分泌高表達bFGF及其受體，對腫瘤血管新生起促進作用，使腫瘤組織血供上升，給腫瘤細(xì)胞增殖提供營養(yǎng)物質(zhì)和氧，促進腫瘤生長〔7〕。

VEGF-C對淋巴結(jié)增生的誘導(dǎo)具有選擇性，在實體腫瘤轉(zhuǎn)移以及生長過程中起著非常重要的作用〔8〕。在人類的大量腫瘤中均存在VEGF-C的表達，且其表達量與腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移及淋巴管生成存在正相關(guān)的關(guān)系。VEGF-C可能通過對淋巴管形成的促進使淋巴管數(shù)量增加，淋巴管和腫瘤細(xì)胞接觸面積增加而促進轉(zhuǎn)移〔9〕。此外，其還可以增加腫瘤的間質(zhì)壓力和淋巴管的滲透性，有助于腫瘤細(xì)胞進入靜脈和淋巴管內(nèi)。

本研究結(jié)果說明PTTG、bFGF和VEGF-C陽性表達率的上升提示了大腸癌癌變前存在的潛在惡變風(fēng)險〔10〕。PTTG、bFGF以及VEGF-C參與了大腸癌的發(fā)展、遠(yuǎn)處播散以及浸潤的過程，且大腸癌的侵襲性隨著PTTG、bFGF以及VEGF-C表達的增高而增強〔11〕。綜上，PTTG、bFGF和VEGF-C參與了大腸癌的發(fā)生過程；對大腸癌的遠(yuǎn)處播散以及浸潤生長均具有一定的作用，且可以作為大腸癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移判斷的預(yù)測因子。

4參考文獻

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〔2014-05-19修回〕

(編輯范云杰)