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        蘋果青霉病菌在蘋果組織中的分布檢測

        2015-12-22 19:20:28張悅麗張博田淑慧戴爭齊軍山馬立國李長松任鳳山
        山東農業(yè)科學 2015年4期
        關鍵詞:食品安全

        張悅麗+張博+田淑慧+戴爭+齊軍山+馬立國+李長松+任鳳山

        摘要:為評估蘋果感染青霉病后的食用安全性,本試驗檢測了蘋果青霉病菌(Pnicilliumsp.)在蘋果組織中的分布。結果表明:病斑處青霉菌菌落數(shù)最高,為2800cfu/g;病斑外延1.Ocm處,青霉菌菌落數(shù)為120cfu/g;病斑外延1.5cm處,青霉菌菌落數(shù)為18cfu/g;病斑外延2.0cm處,未檢測到蘋果青霉病菌。

        關鍵詞:蘋果青霉病菌;分布檢測;展青霉素;食品安全

        中圖分類號:S436.611.1+9+TS201.6文獻標識號:A文章編號:1001-4942(2015)04-0103-03

        蘋果青霉病又稱水爛病,危害蘋果、梨、葡萄等成熟及近成熟果實,多發(fā)生在貯藏中后期,從機械損傷和病蟲害傷口入侵發(fā)病,造成大量爛果,是蘋果貯運中最嚴重的爛果病,塑料袋裝蘋果發(fā)病尤為嚴重。該病的發(fā)生與貯藏環(huán)境有密切聯(lián)系,溫度高、溫度大發(fā)病較重,反之則輕。國外報道蘋果青霉病多由展青霉(P.expansum)[1]引起,而國內則報道常現(xiàn)青霉(P.frequentan)[2]、圓弧青霉(P.cyclopium)和殼青霉(P.crustosum)[3]也可引起。青霉病菌在代謝過程中可產生對植物和動物有毒性的次生代謝產物,如擴展青霉在侵染果品過程中能產生展青霉素(patulin)。展青霉素又叫棒曲霉毒素,對植物和動物具有很強的毒性,可引起人嘔吐、反胃[4]。食品添加劑聯(lián)合專家委員會(JECFA)研究報告表明,展青霉素對胚胎有毒性,同時伴隨有母體毒性展青霉素在相當大的劑量范圍內,可使小鼠大腦、腎臟、肝臟中的DNA鏈破裂,其中大腦是最重要的靶器官[5]。此外,展青霉素對成年哺乳動物和胚胎動物的腎臟也有毒害作用[6]。展青霉素直接接觸皮膚,可引起DNA損傷,從而造成細胞周期阻滯和內部介導細胞凋亡,積累大量具有皮膚毒性的聚胺產物[7].我國相應標準[8,9]規(guī)定蘋果山楂等半成品中展青霉素的限量為100μg/kg,且關于展青霉索的去除及工藝正在進一步的研究中[10]。因此,明確青霉菌(Penicilliumsp.)在蘋果組織中的分布情況至關重要。為了弄清蘋果染青霉病后青霉病菌在蘋果健康組織中的分布情況,進行了本試驗,以期為其風險情況做出評估。

        收稿日期:2014-12-08

        基金項目:國家農產品質量安全風險評估重大專項(GJFP2014002)

        1材料與方法

        1.1試驗材料

        1.1.1供試蘋果購自市場罹患青霉病的蘋果,品種為黃金帥。

        1.1.2培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基。

        1.2試驗方法

        1.2.1取樣將感染青霉病的蘋果,取病斑處及病斑外延1.0、1.5、2.0cm處蘋果組織,每處各取樣25g,勻漿后備用。

        1.2.2培養(yǎng)稱取25g樣品至盛有225mL滅菌蒸餾水的錐形瓶中,充分振搖,即為1:10稀釋液。取1:10稀釋液1mL注入含有9mL無菌水的試管中,另換一支1mL無菌吸管反復吹吸,此液為1:100稀釋液。依次稀釋。根據(jù)對樣品污染狀況的估計,選擇2~3個適宜稀釋度的樣品勻液(可包括原液),分別取1mL于2個無菌平皿內,同時取1mL滅菌蒸餾水加入2個無菌平皿作空白對照。及時將15~20mL冷卻至46℃的PDA培養(yǎng)基倒入平皿,轉動平皿使其混合均勻。待培養(yǎng)基凝固后,將平板倒置,(28±1)℃培養(yǎng)5d,觀察并記錄。

        1.2.3菌落計數(shù)按照2010年版食品微生物學標準提供的食品微生物學檢驗霉菌計數(shù)方法,肉眼觀察,必要時可用放大鏡,選取菌落數(shù)在10~150cfu的平板,根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)青霉菌。青霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數(shù)應采用兩個平板的平均數(shù)。

        2結果與分析

        經過菌落計數(shù),本試驗在蘋果青霉病病斑外延1.5cm范圍內都檢測到了青霉病菌的存在,病斑外延2.0cm范圍外未檢測到青霉病菌的存在,并確定了適合菌落計數(shù)的樣品稀釋倍數(shù)。在蘋果青霉病病斑處取樣的最佳稀釋倍數(shù)為1000倍,青霉菌菌落數(shù)為2800cfu/g;病斑外延1.0cm處,最佳稀釋倍數(shù)為100倍,青霉菌菌落數(shù)為120cfu/g;病斑外延1.5cm處,最佳稀釋倍數(shù)為10倍,青霉菌菌落數(shù)為18cfu/g;病斑外延2.0cm處,所有稀釋濃度均無任何菌落生長,對照培養(yǎng)皿中未發(fā)現(xiàn)任何菌落。

        3結論與討論

        對蘋果青霉病菌在病果內部的分布范圍進行檢測,病斑處分離到的青霉菌菌落數(shù)最高,為2800cfu/g;腐爛斑外延1.0cm處,最佳稀釋倍數(shù)為100倍,青霉菌菌落數(shù)為120cfu/g;腐爛斑外延1.5cm處,最佳稀釋倍數(shù)為10倍,青霉菌菌落數(shù)為18cfu/g;病斑外延2.0cm處,所有稀釋濃度均無任何菌落生長。在蘋果青霉病病斑外延2.0cm及以外范圍內未檢測到青霉菌,但此范圍內是否有毒素存在(包括何種毒素及毒素含量),需要進一步的研究。endprint

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