張文通，魏 鳳，李 峰，苗立中，劉吉山，沈志強*，，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

一例豬流行性腹瀉病的診斷與治療

張文通2，魏 鳳1，李 峰1，苗立中1，劉吉山1，沈志強*1，2，

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

山東省惠民縣某規(guī)模養(yǎng)豬場發(fā)生一例疑似豬流行性腹瀉病，根據發(fā)病情況調查、臨床癥狀、病理剖檢、病原分離、RT-PCR診斷，確診病原為豬流行性腹瀉病毒。根據確診結果，按照豬流行性腹瀉病防治措施操作，豬場發(fā)病情況立即得到好轉。

豬流行性腹瀉病；診治

豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的豬病毒性腹瀉疫病，是嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一，給世界各國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經濟損失[1-2]。2014年2月，山東惠民縣某養(yǎng)豬場發(fā)生了以哺乳仔豬水樣腹瀉、并伴有嘔吐等特征的疑似豬流行性腹瀉疾病，現將診治過程報告如下。

1 發(fā)病情況

2014年2月初發(fā)現有哺乳仔豬（3～21日齡）嘔吐、腹瀉、脫水。同圈仔豬發(fā)病率達100%，不同圈發(fā)病仔豬死亡率在11.1%～30.0%。用抗生素治療無效。

2 臨床癥狀

發(fā)病哺乳仔豬普遍精神沉郁，食欲下降，水樣腹瀉、個別仔豬伴有嘔吐，仔豬普遍偏瘦，但體溫正常。

3 病理變化

剖檢病死仔豬發(fā)現：小腸擴張、腸壁變薄，腸內充滿黃色液體，腸系膜淋巴結水腫。

4 病毒分離鑒定

4.1 病料采集

取病死仔豬小腸黏膜、內容物及水樣腹瀉糞便作為分離病毒的樣品，將樣品冷凍保存。

4.2 病料處理

將采集的樣品用滅菌PBS研磨，反復凍融，在4 ℃條件下3 000 r/min離心30 min、吸取上清，將上清液用0.22μm一次性濾器過濾除菌、分裝保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

5 病毒的RT-PCR鑒定

5.1 引物設計

根據GenBank JN825712.1序列設計，擴增長度661 bp，用于鑒定豬流行性腹瀉病毒。引物序列如下：

上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT

下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC

圖1 RT-PCR結果

5.2 病毒的RT-PCR RT-PCR擴增產物大小約660 bp，與預期一致（如圖1所示）?；厥誖TPCR產物，送往上海生物工程有限公司測序。測序結果與GenBank上報道的豬流行性腹瀉病毒序列同源性在96%～99%之間。

6 治療措施

經上述診斷確認病原為豬流行性腹瀉病毒。建議該養(yǎng)豬場采取如下措施：

6.1 保溫及消毒措施

建議保持豬舍溫度高于正常溫度1～2 ℃；保持豬舍衛(wèi)生整潔及全面、定期消毒。

6.2 補液，防止脫水措施

可以購買正規(guī)廠家的優(yōu)質口服補液鹽，讓發(fā)病豬群普遍飲用。

6.3 防止繼發(fā)細菌感染

提取病料的RNA，并同時提取PEDV陰性對照（細胞培養(yǎng)液）及PEDV陽性細胞毒的RNA。病毒RNA用寶生物工程(大連)有限公司提供的RNA提取試劑盒提取，一步法RTPCR反應成分及反應程序如下。

RT-PCR反 應 體 系 為：10×Buffer 5μL，MgCl2(25 mmol/ L) 10μL，dNTPs(10 mmol/L) 5μL，Rnase Inhibitor(40 U/μL) 1μL，AMV RTase XL(5u/μL) 1μL，AMV-Optimized Taq(5 U/μL) 1μL，上游引物P1（20μmol/L）1μL，下游引物P2（20μmol/L）1μL ，模板5μL，RNase Free ddH2O up to 50μL。

RT-PCR反應條件為：50 ℃反轉錄1 h；94 ℃ 5 min；進入PCR循環(huán)，94 ℃ 45 S，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35個循環(huán)后，72 ℃延伸10 min。反應結束后，用0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增結果。

可用痢菌凈防止細菌感染。

6.4 高免血清療法

5.3 病毒的RT-PCR鑒定結果

瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示，病毒的

對發(fā)病仔豬采用高免血清被動治療方法。采集發(fā)病豬群中痊愈后老母豬血液，制備高免血清：分離血清（注意無菌操作），在血清中添加一定比例的阿莫西林抗生素。按照仔豬體重，肌肉注射高免血清（建議0.5 mL/kg，1次/d，連用2次）。

6.5 疫苗接種

建議對全場豬群緊急免疫豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯活疫苗。高免血清治愈的發(fā)病仔豬豬群1周后進行疫苗接種。

該養(yǎng)豬場按照上述治療措施進行了操作，發(fā)病豬群死亡率及發(fā)病率大幅降低。實施2周后病情基本緩解，豬場進入穩(wěn)定狀態(tài)。

7 小結

自2011年以來，豬腹瀉病成為嚴重危害養(yǎng)豬行業(yè)的重大傳染病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經濟損失。專家證實豬流行性腹瀉病毒是豬腹瀉病的主要病原之一。筆者在收到山東惠民某豬場暴發(fā)疑似豬流行性腹瀉病的疫情后，通過發(fā)病情況調查、臨床觀察及病理剖檢，初步判斷疫情為豬流行性腹瀉引起。收集病料進行病毒分離及RTPCR鑒定，證實病原為豬流行性腹瀉病毒。并按照豬流行性腹瀉疫情采取防治措施，經過保溫、消毒、補液、防繼發(fā)感染及緊急免疫接種，疫情得到有效控制。

[1] 殷震，劉景華.動物病毒學[M].2版.北京：科學出版社，1997：688-690.

[2] 蔡寶祥.動物傳染病學[M].4版.北京：中國農業(yè)出版社，2001：300-301.

2015-07-06)

山東省農業(yè)科學院院地科技合作引導計劃項目（214YDHZ32）；山東省現代農業(yè)產業(yè)技術體系生豬創(chuàng)新團隊項目（?SDAIT-06-022-15）

張文通，男（1979-），河南滎陽人，碩士，助理研究員，主要從事基因工程疫苗研究。