吳 瀟，劉陽，張咪咪，師慧麗，楊忠義(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，山西晉中030801)

連翹［Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl］，木犀科連翹屬植物，園林中常應(yīng)用于公園綠地、庭院和街道，可叢植、孤植，病蟲害較少，易于管理［1－2］。同時(shí)連翹具有清熱止吐、清肝利膽、除濕退黃、通調(diào)三焦、暢達(dá)血脈、保肝護(hù)心等作用［3］，含有金絲桃素類等重要藥用價(jià)值和具有抗病毒、抗癌和治療AIDS 的應(yīng)用前景［4］。

隨著人們對(duì)連翹藥用價(jià)值研究的不斷深入和園林綠化建設(shè)事業(yè)的快速發(fā)展，連翹傳統(tǒng)的繁殖方式越來越不能滿足市場(chǎng)的需求，再加上培育出了許多觀賞價(jià)值更高的新品種，有些新品種用傳統(tǒng)的繁殖方法繁殖比較困難。山西省憑借在道地藥材黨參、黃芪和苦參3個(gè)品種藥材的研究利用，獲得國(guó)家中藥材GAP基地認(rèn)證。目前全國(guó)近年來已公布共有63家企業(yè)48個(gè)品種得到GAP認(rèn)證，山西在48個(gè)品種中占有三席位置，這為山西從事中藥材工作的同仁提供了堅(jiān)定道地藥材品種選育的信心，加快了培育道地資源品種，提升了山西道地藥材品種繁育及推廣進(jìn)程，也為山西道地藥材連翹進(jìn)一步開發(fā)利用提供方向。該研究利用組織培養(yǎng)的無性繁殖技術(shù)擬篩選出一種高效的連翹快繁方法，通過正交試驗(yàn)法利用不同激素種類和濃度水平進(jìn)行比較，最終通過方差分析篩選出最適宜連翹的組織培養(yǎng)體系，從而為連翹的大規(guī)模發(fā)展提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料及處理 從春季品種純正、生長(zhǎng)健壯、無病蟲害的連翹采集所萌發(fā)抽生的一年生嫩枝，將剪取的嫩枝蘸取適量洗衣粉仔細(xì)清洗2遍，再用流水沖洗后，放入無菌水中浸泡備用。在超凈臺(tái)上將枝條切成3～4 cm的含有2個(gè)腋芽的嫩莖莖段，放置在70%的酒精中消毒30 s，用無菌水沖洗3次，每次3 min。轉(zhuǎn)入0.1% 氯化汞溶液中消毒7 min［5］，用無菌水漂洗3次，每次3 min，然后接種到培養(yǎng)基上。

1.2 培養(yǎng)條件 溫度為22～26℃，培養(yǎng)基pH為5.8，光照度為1 500～2 000 lx，光照周期為10～12 h/d。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 初代培養(yǎng)。采用四因素三水平L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)［6］。每個(gè)處理接種20瓶，重復(fù)3次。接種21 d后，開始統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

1.3.2 增殖培養(yǎng)。以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度水平的6-BA、IBA和蔗糖，將經(jīng)過初代培養(yǎng)篩選出來的最佳培養(yǎng)基的植物材料轉(zhuǎn)接，采用三因素三水平L9(34)進(jìn)行增殖培養(yǎng)。每個(gè)處理接種20瓶，重復(fù)3次。接種23 d后，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果。

1.3.3 生根培養(yǎng)。由于激素水平對(duì)連翹生根起著主要作用［7－8］，所以生根培養(yǎng)以 MS、25 g/L 的蔗糖為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的6-BA和IBA作為生根培養(yǎng)基。將增殖培養(yǎng)篩選出來的最適培養(yǎng)基生長(zhǎng)良好的芽轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。每個(gè)處理接種20瓶，重復(fù)3次。接種27 d后，統(tǒng)計(jì)生根率，對(duì)生長(zhǎng)出的根進(jìn)行長(zhǎng)度測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng) 接種7 d，培養(yǎng)基上莖段開始萌芽生長(zhǎng)。在接種21 d后，統(tǒng)計(jì)成活率，結(jié)果表明(表1)，以MS為基本培養(yǎng)基(試驗(yàn)序號(hào)a4、a5、a6號(hào)培養(yǎng)基)的植株在初代培養(yǎng)成活率較高，均超過了70%，其中a5號(hào)培養(yǎng)基的成活率最高，達(dá)80.0%。

將初代培養(yǎng)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果通過SAS軟件進(jìn)行方差分析［9－10］，方差分析結(jié)果(表2)顯示，1MS培養(yǎng)基對(duì)連翹初代培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于3/2MS、1/2 MS培養(yǎng)基;1.0 mg/L 6-BA對(duì)連翹初代培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于1.5、0.5 mg/L 6-BA;0.3 mg/L IBA對(duì)連翹初代培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于0.2、0.1 mg/L IBA;25 g/L蔗糖對(duì)連翹初代培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于35、30 g/L蔗糖。

表1 初代培養(yǎng)正交試驗(yàn)結(jié)果

表2 各因素各水平之間初代培養(yǎng)成活率的多重比較

2.2 增殖培養(yǎng) 接種23 d后，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果(表3)顯示，加入1.0 mg/L 6-BA的MS基本培養(yǎng)基(試驗(yàn)序號(hào)b4、b5、b6號(hào)培養(yǎng)基)的植株在增殖培養(yǎng)成活率較高，均超過了70%，試驗(yàn)序號(hào)b4培養(yǎng)基的成活率最高，達(dá)88.3%。

表3 增殖培養(yǎng)正交試驗(yàn)結(jié)果

增殖培養(yǎng)方差分析結(jié)果(表4)顯示，1.0 mg/L 6-BA對(duì)連翹增殖培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于0.5、1.5 mg/L 6-BA;0.1 mg/L IBA對(duì)連翹增殖培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于0.2 mg/L IBA;35、25 g/L蔗糖對(duì)連翹增殖培養(yǎng)成活率的影響極顯著高于30 g/L蔗糖。

表4 各因素各水平之間增殖培養(yǎng)成活率的多重比較

2.3 生根培養(yǎng) 接種7 d后，部分培養(yǎng)基芽基部開始出現(xiàn)白色小突起。接種27 d后，統(tǒng)計(jì)生根率，然后對(duì)部分根進(jìn)行長(zhǎng)度測(cè)定。結(jié)果表明(表5)，試驗(yàn)序號(hào)c1、c4、c5和c6號(hào)培養(yǎng)基的植株生根率較高，均超過了80%，試驗(yàn)序號(hào)c4培養(yǎng)基的成活率和平均根長(zhǎng)均是最高的，分別達(dá)93.3%、9.7 mm。

表5 生根培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果

各因素各水平之間誘導(dǎo)生根率和平均根長(zhǎng)的多重比較結(jié)果(表6)顯示，1.5 mg/L的6-BA對(duì)連翹組織誘導(dǎo)根形成的影響極顯著高于 1.0和 2.0 mg/L的 6-BA，0.1 mg/L 的IBA對(duì)連翹組織誘導(dǎo)根形成的影響極顯著高于0.2和0.3 mg/L的IBA。1.5 mg/L的6-BA對(duì)連翹組織平均根長(zhǎng)形成的影響極顯著高于 1.0和2.0 mg/L的6-BA，0.1 mg/L的IBA對(duì)連翹組織平均根長(zhǎng)形成的影響極顯著高于0.2和0.3 mg/L的IBA。

表6 各因素各水平之間誘導(dǎo)生根率和平均根長(zhǎng)的多重比較

3 結(jié)論

通過不同激素種類及濃度水平配比，經(jīng)過正交試驗(yàn)法以及方差分析篩選出連翹的最佳組織培養(yǎng)體系為初代培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+ 蔗糖 25 g/L)、增殖培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖 35 g/L)、生根培養(yǎng)基(MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖25 g/L)，生根率可達(dá)90%以上，生根根數(shù)較多，適合大規(guī)模栽植。張紅梅等研究表明MS+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L+3%蔗糖的培養(yǎng)基是最適合花葉連翹的增殖培養(yǎng)基，能夠誘導(dǎo)出大量叢生苗［11］，該研究與其在激素濃度配比以及在基本培養(yǎng)基選擇上的結(jié)果均相同。孫海龍研究認(rèn)為6-BA的濃度對(duì)連翹分化影響很大，濃度過低會(huì)使分化效果差，而濃度過高則會(huì)導(dǎo)致玻璃化現(xiàn)象嚴(yán)重［12］。該研究篩選出來三類培養(yǎng)基的6-BA的濃度均在其研究的適宜范圍內(nèi)，能夠與其保持一致。

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