黃 瑜，蔡 佳，王 蓓，魯義善，簡紀(jì)常，吳灶和，湯菊芬*

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江524088;2.廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動物病原生物學(xué)及流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東湛江524088;3.廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動物病害控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東湛江524088;4.仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，廣東廣州510225)

克螨特，又稱炔螨特，英文通用名稱Propargite，是美國Uniroyal公司1968年研制成功的高效低毒、無內(nèi)吸性、低殘留、具有觸殺和胃毒雙重作用的有機(jī)硫廣譜殺螨劑，有效成分為2-(4-叔丁基苯氧基)環(huán)己基丙炔-2-基亞硫酸酯［1］。克螨特在農(nóng)業(yè)上主要用于防治棉花、果蔬、花卉的螨害效果顯著［2-4］。然而，近年有研究發(fā)現(xiàn)克螨特對寄生于鰻鱺身上的指環(huán)蟲有很好的治療效果［5］。斑馬魚(Brachydanio rerio)是一種亞熱帶淡水魚類，因其體側(cè)具有象斑馬一樣縱向的暗藍(lán)與銀色相間的條紋而得名，斑馬魚體積小、繁殖快、易于培養(yǎng)、成本低、同時(shí)易于給藥容易觀察，是試驗(yàn)中重要的科研魚類。筆者通過克螨特對斑馬魚的室內(nèi)急性毒性測定試驗(yàn)，為今后利用克螨特殺滅斑馬魚的寄生蟲疾病提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚 同批同齡的斑馬魚取自廣東省湛江市花鳥蟲魚市場，斑馬魚(Brachydanio rerio)體質(zhì)量為(0.3 ±0.1)g，全長為(20.0±5.0)mm，雌雄不限，試驗(yàn)前在容積為400 L的大水簇箱中馴養(yǎng)7 d。試驗(yàn)時(shí)挑取體格健壯、無傷無病的斑馬魚進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)藥物 克螨特(Propargite)，購自汕頭市光華化學(xué)廠。

1.3 試驗(yàn)條件 養(yǎng)殖用水為曝氣充氧除氯24 h以上的自來水，水溫(20±3)℃，pH在7.0左右，總硬度101～103 mg/L，堿度52.21 ～57.13 mg/L，溶解氧含量5.2 ～7.1 mg/L。充氣使用小型充氣泵，飼料為斑馬魚專用飼料。試驗(yàn)是在規(guī)格80 L的水族箱中進(jìn)行，每桶加入藥液水50 L。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 濃度設(shè)置。采用靜水試驗(yàn)方法，以4 d為1個試驗(yàn)周期。通過預(yù)試驗(yàn)，確定克螨特毒性試驗(yàn)的濃度范圍，即96 h 100%死亡濃度(LC100)和0%死亡濃度(LC0)。然后，按照等對數(shù)間距法確定克螨特急性毒性試驗(yàn)濃度梯度(表1)，設(shè)置7個濃度組和1個對照組進(jìn)行試驗(yàn)，觀察96 h內(nèi)斑馬魚的反應(yīng)，每組放30尾，試驗(yàn)藥液現(xiàn)配現(xiàn)用。

待測得克螨特對斑馬魚96 h的半致死濃度(LC50)和安全濃度(SC)后，再進(jìn)行LC50和SC的可信度驗(yàn)證。設(shè)置3個平行組，每組30條魚。試驗(yàn)所用藥液現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.4.2 結(jié)果觀察。試驗(yàn)前24 h停止投喂飼料，試驗(yàn)開始后的前8 h內(nèi)連續(xù)觀察受試魚的中毒癥狀及死亡情況，以后不定時(shí)進(jìn)行觀察，并于96 h分別記錄試驗(yàn)魚的死亡數(shù)和存活數(shù)。

1.4.3 指標(biāo)計(jì)算。LC50和95%可信區(qū)間的計(jì)算采用寇氏法［6］;按照以下公式計(jì)算 SC:SC=0.1 ×96 h LC50［7］。

1.4.4 數(shù)據(jù)處理。使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和Duncan’s多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 預(yù)試驗(yàn)結(jié)果 克螨特對斑馬魚96 h全部死亡的最小劑量(LC100)約為1.2 mg/L，無死亡的最大劑量(LC0)約為0.6 mg/L。

2.2 克螨特對斑馬魚的LC50和SC 不同濃度克螨特處理組斑馬魚的死亡數(shù)和致死率見表1。根據(jù)表1中各濃度克螨特處理組斑馬魚的96 h死亡數(shù)和致死率，計(jì)算出96 h斑馬魚的 LC50為0.909 mg/L，置信區(qū)間為0.876 ～0.943 mg/L，SC為 0.091 mg/L。

表1 各濃度克螨特處理組斑馬魚的96 h死亡數(shù)和死亡率

2.3 LC50和SC的驗(yàn)證 根據(jù)以上試驗(yàn)得出的斑馬魚LC50和SC進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。試驗(yàn)表明，斑馬魚LC50的3個組死亡數(shù)分別為14、16和15尾;SC的3個組沒有魚死亡。這表明斑馬魚的SC是可信的。顯著性分析表明，斑馬魚LC50的理想死亡尾數(shù)和LC50的實(shí)際死亡尾數(shù)沒有顯著差異，表明LC50的結(jié)果也是可信的。

3 討論

該試驗(yàn)將藥物加入斑馬魚所生活的水中，它們會自主連續(xù)地從溶液中吸收藥物，通過調(diào)節(jié)水中藥物濃度來改變給藥劑量。在預(yù)試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，隨著水中克螨特藥物濃度的增加，斑馬魚在一定時(shí)間內(nèi)的死亡率會相應(yīng)增加，說明產(chǎn)生毒性的藥物濃度與斑馬魚的死亡率呈正相關(guān)，因此可以用LC50來表示藥物毒性大小。筆者隨機(jī)選取體質(zhì)健壯且大小均勻的斑馬魚進(jìn)行試驗(yàn)，每組受試數(shù)均為30尾，這為判別藥物的作用效果提供了良好條件，大大降低了因?yàn)檠芯坎牧系馁|(zhì)量不佳和數(shù)量不足從而導(dǎo)致試驗(yàn)誤差較大的可能性。

研究表明，克螨特農(nóng)藥在96 h對鱒魚 LC50為0.118 mg/L［8］，藍(lán)鰓翻車魚 LC50為 0.197 mg/L［9］，鯉魚 LC50為 1.0 mg/L［10］。筆者通過克螨特農(nóng)藥對斑馬魚毒性的研究發(fā)現(xiàn)，96 h克螨特對斑馬魚的LC50為0.909 mg/L。依據(jù)試驗(yàn)所得斑馬魚對克螨特LC50和SC進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果表明，斑馬魚在LC50下的理想死亡尾數(shù)和實(shí)際死亡尾數(shù)并沒有顯著性差異，表明試驗(yàn)結(jié)果可信。在克螨特SC條件下飼養(yǎng)96 h，也沒有造成斑馬魚的死亡，說明斑馬魚對克螨特SC的結(jié)果也可信。這些結(jié)果為今后利用克螨特殺滅斑馬魚感染寄生蟲的用藥量提供了重要的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

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