范成平，胡寧貴，陳恩發(fā)，左銳*

(1.貴州省煙草公司安順市公司，貴州安順561000;2.貴州省生物技術(shù)研究所，貴州貴陽550006)

煙草白粉病(Erysiphe cichoracearum DC)是煙草生產(chǎn)上的主要病害之一，俗稱“上硝”、“發(fā)白”或“下霜”，白粉病的發(fā)生可對(duì)烤煙造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病在煙株苗期和成株期均可發(fā)生，其病原菌主要侵染煙草葉片，嚴(yán)重時(shí)也蔓延至莖稈。病發(fā)部位通常從下部葉開始，自下而上蔓延，嚴(yán)重時(shí)葉片全部脫落，僅留葉脈［1－2］。2010年7月中下旬貴州省平壩縣天龍種植區(qū)白粉病暴發(fā)，使用甲基硫菌靈等藥劑進(jìn)行防治，效果不明顯，致使煙農(nóng)亂購農(nóng)藥并不規(guī)范使用，病情非但沒有得到有效控制，還導(dǎo)致烤煙品質(zhì)的急劇下降，造成了大量損失。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，僅畢節(jié)地區(qū)在2012年因白粉病造成的直接經(jīng)濟(jì)損失就超過1億元。

烤煙的采收時(shí)間為7月中上旬，煙農(nóng)在采收時(shí)病葉與健康葉可能混合采收。根據(jù)安順地區(qū)各縣及烤煙生產(chǎn)基地負(fù)責(zé)烘烤的技術(shù)人員反映，當(dāng)病葉與健康葉同時(shí)混合烘烤時(shí)可導(dǎo)致健康葉片發(fā)病，但各生產(chǎn)基地反映的情況不一致。為了明確病葉和健康葉混合烘烤能否導(dǎo)致健康葉發(fā)病的實(shí)際情況，筆者對(duì)烤煙過程中晾干和烘烤2個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行離體侵染特性研究，同時(shí)以易感品種“南江3號(hào)”為試驗(yàn)材料，采用盆栽與大田調(diào)查相結(jié)合的試驗(yàn)方法研究了貴州安順地區(qū)煙草白粉病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，旨在為防治煙草白粉病提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試對(duì)象。煙草白粉病。

1.1.2 供試作物。準(zhǔn)備進(jìn)行烘烤的“南江3號(hào)”健康煙葉、感病煙葉，以及三葉草、羊蹄、牽牛花、夜來香、南瓜、葵花、黃瓜、蒲公英、車前草、缸豆、洋姜、大豆、番茄、水蛇麻、風(fēng)輪菜、地雷花、土荊芥、指甲花等雜草與作物的感染白粉病的葉片。

1.1.3 其他材料。培養(yǎng)皿、苯并咪唑保鮮培養(yǎng)基等。

1.2 方法

1.2.1 白粉病菌離體侵染測定。

1.2.1.1 白粉病菌離體侵染試驗(yàn)。白粉病病菌生長最適溫度為18～25℃，最適相對(duì)濕度為75% ～85%。選擇在散葉堆放、晾干、烘烤的整個(gè)過程中取白粉病最易感染的3個(gè)階段，即干球溫度分別為35、38、42℃，濕球濕度分別為33、37、32℃的烘烤階段進(jìn)行試驗(yàn)，將不同寄主的病葉與健康葉混合烘烤，并保持3個(gè)階段的條件下分別培養(yǎng)24、12、12 h，觀察并記錄離體健康葉的發(fā)病情況。并按上述條件和方法進(jìn)行不同作物上白粉病菌對(duì)健康煙葉的離體侵染試驗(yàn)，觀察和記錄健康葉的發(fā)病情況。

1.2.1.2 對(duì)照試驗(yàn)。參照離體葉段法［3］對(duì)健康離體煙草葉片接種煙草白粉病菌，觀察其發(fā)病情況。具體方法:取旺長期供試煙草植株中部葉片，剪取葉片主脈兩側(cè)葉段(5 cm×5 cm)，將葉段正面朝上放置于培養(yǎng)皿內(nèi)的苯并咪唑保鮮培養(yǎng)基上，再將培養(yǎng)皿放置于接種筒內(nèi)，把預(yù)先收集在硝酸纖維紙上的白粉病菌從接種筒上部側(cè)面的孔洞內(nèi)吹送入接種筒，靜置10 min，使病菌孢子充分沉降后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)［(24±1)℃，光照14 h/d］，觀察和記錄離體健康葉的發(fā)病情況。

將帖葉法與離體葉段法融合，將病葉與健康葉各剪下一小塊，將病葉有白粉病菌的一面與健康葉的上面貼合放置于培養(yǎng)皿內(nèi)的苯并咪唑保鮮培養(yǎng)基上，蓋上培養(yǎng)皿蓋，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)［(24±1)℃，光照14 h/d］，觀察和記錄離體健康葉的發(fā)病情況。

1.2.2 室內(nèi)盆栽煙草白粉病的發(fā)生分析。2013年4月上旬在貴州省生物技術(shù)研究所隔離室中，按照常規(guī)育苗方法育苗，所有育苗用工具和土壤均進(jìn)行嚴(yán)格消毒，待煙苗培育至7～8片真葉時(shí)進(jìn)行人工接種。接種時(shí)間為2013年6月11日，菌種由貴州省生物技術(shù)研究所保存。選取15～18株7～8片真葉期健康煙株置于溫室內(nèi)，采用噴霧接種方法接種［4］，接種用粉孢子濃度為1×106個(gè)/ml。接種后7 d每隔1 d調(diào)查單個(gè)葉片發(fā)病情況，同時(shí)記錄隔離室溫濕度，計(jì)算每天平均溫濕度。每個(gè)處理調(diào)查10株，每株煙調(diào)查所有展開的葉片，計(jì)算葉片發(fā)病率、單片葉片的發(fā)病等級(jí)，并計(jì)算病情指數(shù)，取3次調(diào)查結(jié)果的平均值。

病情指數(shù)=∑(各級(jí)病葉數(shù)×相應(yīng)級(jí)數(shù)值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×發(fā)病最高級(jí)數(shù)值)×100

1.2.3 大田煙草白粉病發(fā)生調(diào)查。試驗(yàn)于2014年6月在貴州省安順地區(qū)紫云縣白石巖中煙基地進(jìn)行，采用定田定株調(diào)查，每隔1 d調(diào)查一次，記錄煙草白粉病發(fā)病率、病情指數(shù)，分析病害發(fā)生流行規(guī)律。

1.2.4 葉片發(fā)病情況及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。按照煙草病蟲害分級(jí)及調(diào)查方法進(jìn)行調(diào)查。煙草白粉病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn):1級(jí)——病斑葉面積占葉面積的5%以下;3級(jí)——病斑葉面積占葉面積的6% ～10%;5級(jí)——病斑葉面積占葉面積的11% ～20%;7級(jí)——病斑葉面積占葉面積的21% ～40%;9級(jí)——病斑葉面積占葉面積的41%以上，甚至病原菌布滿整個(gè)葉片。

2 結(jié)果與分析

2.1 白粉病菌離體侵染 結(jié)果表明，整個(gè)烘烤過程的3個(gè)階段健康葉均不被感染。相同的方法和條件將三葉草、羊蹄、牽?；ā⒁箒硐?、南瓜、葵花、黃瓜、蒲公英、車前草、缸豆、洋姜、大豆、番茄、水蛇麻、風(fēng)輪菜、地雷花、土荊芥、指甲花等作物感染白粉病的葉片與健康烤煙葉片進(jìn)行試驗(yàn)，健康煙葉也不能被其他作物的病葉感染。參照離體葉段法［3］，在苯并咪唑保鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)通過帖葉法與抖粉法接種白粉菌的離體健康煙葉。結(jié)果表明，健康葉片均被感染。有研究表明，煙葉受病害侵染后，經(jīng)調(diào)制，顏色棕褐，葉表面有明顯的點(diǎn)狀病斑，葉片薄，油分少，香氣嚴(yán)重缺乏，雜氣重，破損度大，造碎率高，工業(yè)可用性差［5－6］。該研究表明在烤房的環(huán)境條件下，在散葉堆放、晾干、烘烤的整個(gè)過程中健康葉片均不會(huì)被感染，其品質(zhì)也不會(huì)受到影響。

表1 不同作物的離體侵染情況

續(xù)表1

2.2 室內(nèi)盆栽煙草白粉病的發(fā)生分析

2.2.1 溫度對(duì)白粉病發(fā)生規(guī)律的影響。由圖1可知，溫度對(duì)白粉病小病斑及病情指數(shù)的影響明顯，在10～15℃下，在病情指數(shù)大于50的情況下，10 d左右基本維持原有趨勢;在病情指數(shù)小于50的情況下，15 d呈現(xiàn)小幅上升趨勢，小病斑數(shù)量呈現(xiàn)下降趨勢。在18～25℃下，病情指數(shù)均維持上升趨勢，且持續(xù)6 d。病斑數(shù)量較少情況下，病情指數(shù)低，連續(xù)6 d維持平穩(wěn)趨勢;病情指數(shù)高，連續(xù)6 d維持上升趨勢;病斑數(shù)量較多情況下，維持下降趨勢。

2.2.2 濕度對(duì)白粉病發(fā)生規(guī)律的影響。由圖2可知，相對(duì)濕度為60%～80%條件下，病情指數(shù)維持原有上升趨勢。小病斑數(shù)量較少情況下，病情指數(shù)低，維持平穩(wěn)趨勢6 d;病情指數(shù)高，維持上升趨勢6 d;小病斑數(shù)量較多情況下，維持下降趨勢6 d。相對(duì)濕度在85%以上時(shí)，在病情指數(shù)較低情況下，呈現(xiàn)小幅上升趨勢;小病斑數(shù)量維持下降趨勢。

2.3 白粉病大田發(fā)生

2.3.1 小苗期。小苗期只要溫濕度適宜均可發(fā)病，當(dāng)葉片受到侵染，開始表現(xiàn)出癥狀后，即當(dāng)葉片出現(xiàn)零星斑點(diǎn)時(shí)，之后10 d左右發(fā)病等級(jí)達(dá)到9級(jí);病原菌繼續(xù)增多、增厚，持續(xù)10 d左右，發(fā)病葉片逐漸變黃，30 d后發(fā)病葉片全部干枯、死亡。

第2代病斑在第1代病斑暴發(fā)后10 d左右形成。即當(dāng)?shù)?代病斑發(fā)病等級(jí)達(dá)到9級(jí)時(shí)，第2代病斑開始形成，在葉片上表現(xiàn)出零星病斑。

2.3.2 成株期。成株期首次發(fā)病時(shí)間為7月上旬，病原菌從初侵染到9級(jí)需10 d左右，初侵染的葉片，病原菌零星分布在葉片上表面，葉片一旦受到侵染，很快出現(xiàn)很多小病斑，6 d左右小病斑數(shù)量達(dá)到最高，10 d左右小病斑擴(kuò)大或連合在一起形成大病斑或一片斑塊，占整片葉表面的50%以上。葉表面病原菌繼續(xù)增多、增厚，到20 d左右整個(gè)葉面布滿病原菌，且葉片背面也出現(xiàn)病原菌，此時(shí)葉片開始變黃。30 d后發(fā)病葉片干枯、死亡。一片葉受到侵染后5～10 d開始出現(xiàn)零星斑點(diǎn)，病斑迅速擴(kuò)大，再侵染其他葉片，病情嚴(yán)重的煙株頂部葉片也被病原菌侵染。

3 結(jié)論

在散葉堆放、晾干、烘烤的整個(gè)過程中取白粉病最易感染的3個(gè)階段，即干球溫度分別為35、38、42℃，濕球溫度分別為33、37、32℃的烘烤階段進(jìn)行試驗(yàn)，將病葉與健康葉混合烘烤。結(jié)果表明，整個(gè)烘烤過程的3個(gè)階段健康葉均不被感染。參照離體葉段法，在苯并咪唑保鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)通過帖葉法與抖粉法接種白粉菌的離體健康煙葉。結(jié)果表明，在該方法條件下健康葉片均被感染，證明在烤房的環(huán)境條件下，在散葉堆放、晾干、烘烤的整個(gè)過程中健康葉片均不會(huì)被侵染，其品質(zhì)也不會(huì)受到影響。

煙草白粉病一年四季均能發(fā)生，在煙草植株的整個(gè)生長周期均可侵染，與株齡無關(guān)。其危害程度與環(huán)境的溫度、濕度緊密相關(guān)，病菌生長最適溫度為18～25℃，最適相對(duì)濕度為75%～85%。一年有4～6次高發(fā)期，有暴發(fā)性的特點(diǎn)。在烤煙生產(chǎn)過程中暴發(fā)危害的時(shí)間一般在6月中下旬至7月上中旬，其暴發(fā)性是以烤煙生理特點(diǎn)及環(huán)境條件為主要因素疊加而導(dǎo)致的。

煙草發(fā)病的潛育期隨溫濕度而變化。溫度為18～25℃和濕度為60% ～80%時(shí)，病情指數(shù)維持上升趨勢，溫度為10～15℃和濕度85%以上，在病指較高的情況下，病情指數(shù)基本維持原有趨勢;反之則呈現(xiàn)小幅上升趨勢。在小病斑數(shù)量較少情況下，病指低，小病斑數(shù)量維持平穩(wěn)趨勢，反之則維持上升趨勢;小病斑數(shù)量較多情況下，小病斑數(shù)量維持下降趨勢。

煙草小苗期當(dāng)葉片受到侵染后10 d左右，發(fā)病等級(jí)達(dá)到9級(jí)，30 d后發(fā)病葉片全部干枯、死亡。第2代病斑在第1代病斑暴發(fā)后10 d左右形成。煙草成株期病原菌從初侵染到9級(jí)需10 d左右，到20 d左右整個(gè)葉面布滿病原菌，且葉片背面也出現(xiàn)病原菌，此時(shí)葉片開始變黃。30 d后病葉干枯、死亡。

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