楊衛(wèi)星，盧開(kāi)成，安冰(廣西國(guó)有派陽(yáng)山林場(chǎng)，廣西寧明532500)

桉樹(shù)(Eucalyptus)為桃金娘科(Myrtlefamily)桉屬常綠高大喬木，原產(chǎn)地大多數(shù)在澳大利亞［1］。桉樹(shù)喜光好濕、耐旱畏寒、抗熱抗病，因其生長(zhǎng)迅速、適應(yīng)性強(qiáng)、技術(shù)成熟、用途廣泛且經(jīng)濟(jì)效益優(yōu)良，而被世界上百余個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛引種栽培，是世界著名的三大速生樹(shù)種之一。桉樹(shù)引種我國(guó)已有百年歷史，在我國(guó)林業(yè)發(fā)展中占有舉足輕重的地位［2］。建立桉樹(shù)組織培養(yǎng)與再生系統(tǒng)，既可為商品化大規(guī)模育苗做準(zhǔn)備，又有助于建立轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)，為利用轉(zhuǎn)基因手段改良桉樹(shù)性狀奠定良好的基礎(chǔ)［3］。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 所采用桉樹(shù)無(wú)性系雷11(E.leizhou No 11)為材料，雷11是雷州林業(yè)局研究開(kāi)發(fā)的優(yōu)良無(wú)性系，具有生長(zhǎng)迅速、抗病性強(qiáng)等特點(diǎn)［4］。

1.2 試驗(yàn)方法 外植體的取材與滅菌:選用三年生桉樹(shù)半木質(zhì)化萌發(fā)莖段為外植體，取材時(shí)間宜天氣晴朗3 d后，10:00～15:00采集萌芽條，材料用飽和洗衣粉溶液刷洗干凈后備用。外植體消毒采用2個(gè)處理:①75%乙醇30 s+0.1%氯化汞7 min;②15%新潔爾滅30 min+10%次氯酸鈉10 min，滅菌后的材料切成1～2 cm長(zhǎng)的莖段，每段帶1個(gè)節(jié)接種到培養(yǎng)基上，置于光強(qiáng)3 000 lx、溫度25℃誘導(dǎo)不定芽。外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別設(shè)3個(gè)處理:①M(fèi)S+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L;②MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.4 mg/L;③MS+6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

增殖培養(yǎng)基分別設(shè)3個(gè)處理:①M(fèi)S+6-BA 0.7 mg/L+NAA 0.35 mg/L;②MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.25 mg/L;③MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.15 mg/L。培養(yǎng)條件:溫度24～26 ℃，光照12～14 h/d，光強(qiáng)2 500～3 000 lx。

生根培養(yǎng)基分別設(shè)3個(gè)處理:①1/2MS+IBA 0.3 mg/L+ABT1 0.6 mg/L;②1/2MS+IBA 0.2 mg/L+ABT 10.4 mg/L;③1/2MS+IBA 0.1 mg/L+ABT 10.2 mg/L。培養(yǎng)條件:溫度24～26 ℃，光照12～14 h/d，光強(qiáng)3 000～3 500 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體的取材與滅菌 由表1可知，滅菌方式②比①萌芽率高13%，灼傷率低13%，滅菌后的外植體生長(zhǎng)較好、萌發(fā)較快，有一定優(yōu)勢(shì)，但污染率較①高16%。這說(shuō)明處理①可以有效降低外植體的污染率，但對(duì)外植體起到明顯的傷害作用，易出現(xiàn)褐化，導(dǎo)致其死亡。試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)使用10%次氯酸鈉滅菌時(shí)，將10 min滅菌過(guò)程分成2次5 min滅菌過(guò)程(中間使用無(wú)菌水清洗數(shù)次)，對(duì)黃化、白化現(xiàn)象有一定抑制作用，且滅菌效果不變。以后的試驗(yàn)中，均以處理②為消毒方式。

表1 2種外植體消毒方式對(duì)比

2.2 桉樹(shù)組織培養(yǎng)體系的建立

2.2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基。由表2可知，誘導(dǎo)培養(yǎng)基的激素濃度以處理②效果最佳，增殖倍數(shù)適宜，達(dá)到2～3個(gè)芽，芽的長(zhǎng)勢(shì)及狀態(tài)良好，萌芽率高，生長(zhǎng)較快;處理①激素濃度過(guò)高，萌芽率較②低8%，且出現(xiàn)褐化玻璃化，難以馴化，即使很快擴(kuò)大繁殖，也會(huì)成為無(wú)效芽;處理③激素濃度偏低，萌芽率較②低17%，芽質(zhì)量好，但生長(zhǎng)慢，數(shù)量少，降低了擴(kuò)繁速度，對(duì)育苗生產(chǎn)進(jìn)度有所影響。

2.2.2 增殖培養(yǎng)基。由表3可知，增殖培養(yǎng)基的激素溶度以處理②效果最佳，增殖倍數(shù)適宜，達(dá)到3.96 cm，芽的長(zhǎng)勢(shì)及狀態(tài)良好，生長(zhǎng)旺盛，莖粗葉厚;處理①激素濃度過(guò)高，增殖個(gè)數(shù)較②低58.9%，生長(zhǎng)較弱，芽點(diǎn)過(guò)密，基部易形成愈傷團(tuán)塊;處理③激素濃度偏低，萌芽率較②低52%，莖葉細(xì)長(zhǎng)，長(zhǎng)勢(shì)變?nèi)酢＜刺幚恝跒樽罴言鲋撑囵B(yǎng)基。

表2 不同外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)比

表3 不同外植體增殖培養(yǎng)基對(duì)比

2.2.3 生根培養(yǎng)基。由表4可知，生根培養(yǎng)基的激素濃度以處理②效果最佳，接種21 d后，根系發(fā)達(dá)，達(dá)到7.45 cm，側(cè)根繁多，苗木生長(zhǎng)旺盛，長(zhǎng)勢(shì)均一，移栽后成活率可達(dá)95%;處理①激素濃度過(guò)高，苗高較②低73.4%，根長(zhǎng)較②低55.7%，生根率低，易出現(xiàn)培養(yǎng)基褐化、根基部膨大現(xiàn)象，部分不生根，苗木較弱，長(zhǎng)勢(shì)參差不齊，移栽后長(zhǎng)勢(shì)較弱，成活率低;處理③激素濃度偏低，苗高較②低68.2%，根長(zhǎng)較②低68.3%，生根率低，根系較弱，側(cè)根少，苗木生長(zhǎng)緩慢，細(xì)弱，長(zhǎng)勢(shì)參差不齊，移栽后成活率低，生長(zhǎng)較慢。

表4 不同生根培養(yǎng)基對(duì)比

3 結(jié)論與討論

外植體采集后，飽和洗衣粉水刷洗干凈的預(yù)處理方法效果最佳。采集后及時(shí)進(jìn)行清洗消毒并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，可極大減少剪口被病菌污染幾率，保持枝條的活性，從而降低污染率，提高萌芽率，達(dá)到事半功倍的效果。外植體消毒使用乙醇和氯化汞消毒一次的污染率最低，但易灼傷苗木，出現(xiàn)培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象;新潔爾滅和次氯酸鈉污染率次之，但基本無(wú)灼傷，萌芽率高，萌發(fā)較快。實(shí)際操作時(shí)，要注意細(xì)節(jié)，掌握要領(lǐng)，動(dòng)作干凈利落，可有效地降低污染率，這與其他桉樹(shù)外植體研究類似［5］。

不同濃度激素對(duì)外植體誘導(dǎo)有顯著影響，處理②為最佳培養(yǎng)基配方，接種7～10 d后芽開(kāi)始萌動(dòng)，12 d左右基部有綠色突起出現(xiàn)，20～25 d誘導(dǎo)出芽。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，激素濃度過(guò)高，易發(fā)生畸形并形成白色松散的愈傷組織，濃度過(guò)低，又影響萌動(dòng)，這與相思樹(shù)等其他樹(shù)種的組織培養(yǎng)有相似性［6］。在增殖培養(yǎng)時(shí)，激素濃度過(guò)高，也會(huì)出現(xiàn)畸形、玻璃化等現(xiàn)象，處理②為最佳配方，可得到最多的有效芽。

在工廠化生產(chǎn)中，要掌握好暗培養(yǎng)、弱光培養(yǎng)及自然光培養(yǎng)的時(shí)間，才能夠獲得生長(zhǎng)健壯、增殖倍數(shù)適宜的無(wú)菌芽，建立有效的無(wú)菌芽繁殖體系，生產(chǎn)出合格的苗木，在類似文獻(xiàn)中，也得到了同樣的結(jié)論［5］。

在生根培養(yǎng)試驗(yàn)中，處理②為最佳配方，接種3 d后芽基部開(kāi)始形成根原基突起，5～6 d后出現(xiàn)小根，19～21 d后長(zhǎng)出發(fā)達(dá)的根系，側(cè)根多而密，移栽成活率高。桉樹(shù)的根系發(fā)育是一個(gè)喜光過(guò)程，尤以自然光最佳，根系發(fā)育良好的同時(shí)，莖葉發(fā)育也很健壯，且培育后期木質(zhì)化程度好，可大幅度提高移栽后成活率。在工廠化生產(chǎn)中，如何減輕莖段基部褐變是生根研究的關(guān)鍵之一［7－8］，為了抑制培養(yǎng)基褐化，可適當(dāng)加入抗壞血酸(0.01～0.02 mg/L為宜)和活性炭(40 mg/L為宜)，加入過(guò)少無(wú)法抑制褐化，加入過(guò)量則容易影響到pH。

無(wú)菌芽誘導(dǎo)和無(wú)菌體系的建立，是一個(gè)復(fù)雜艱難的過(guò)程，是最核心的技術(shù)環(huán)節(jié)。隨著桉樹(shù)種植的不斷發(fā)展，組培培養(yǎng)技術(shù)不斷取得新的突破和進(jìn)展［9］，如何加快誘導(dǎo)速度、縮短培養(yǎng)周期、降低生產(chǎn)成本，特別是優(yōu)良無(wú)性系的選育推廣，都有待更多的試驗(yàn)和研究。

［1］祁述雄.中國(guó)桉樹(shù)［M］.2 版.北京:中國(guó)林業(yè)出版社，2002.

［2］祁述雄.中國(guó)引種桉樹(shù)與發(fā)展現(xiàn)狀［J］.廣西林業(yè)科學(xué)，2006，35(4):250－252.

［3］謝耀堅(jiān).桉樹(shù)組培培養(yǎng)研究進(jìn)展［J］.世界林業(yè)研究，2000，13(6):14－16.

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［9］楊民勝，李天會(huì).中國(guó)桉樹(shù)研究現(xiàn)狀與科學(xué)經(jīng)營(yíng)［J］.桉樹(shù)科技，2005，22(2):1－6.