田麗梅，孫志勇，向 明，宋春滿，楊葉昆，李雪梅*

（云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，云南 昆明 650106）

固相萃取-氣相色譜法檢測(cè)金銀花中9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留

田麗梅，孫志勇，向 明，宋春滿，楊葉昆，李雪梅*

（云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心，云南 昆明 650106）

采用固相萃取凈化，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)，建立了金銀花中9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)方法。金銀花樣品經(jīng)正己烷渦旋振蕩提取、TPH固相萃取柱凈化后，用氣相色譜檢測(cè)。9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的線性范圍在0.01～0.8 mg/L，平均回收率為82.8%～104.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.5%～5.7%，檢出限為0.002～0.005 mg/L。該方法靈敏、準(zhǔn)確，適用于金銀花中9 種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留量分析。

氣相色譜；固相萃??；擬除蟲(chóng)菊酯；農(nóng)藥殘留；金銀花

近年來(lái)隨著世界各國(guó)對(duì)天然藥物需求的日益擴(kuò)大，許多中藥材被廣泛地人工種植。中藥材在種植過(guò)程中，農(nóng)藥使用較為頻繁，因其直接關(guān)系到患者的身體健康，中藥材中的農(nóng)藥殘留不容忽視。金銀花自古被譽(yù)為清熱解毒的良藥，既能宣散風(fēng)熱，又善清解血毒，是藥食兩用的道地藥材[1]，用量多，用途廣，嚴(yán)格控制其中的農(nóng)藥殘留顯得尤為重要。測(cè)定中藥材中擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留的方法主要有液相色譜法[2]、氣相色譜法[3-12]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[13-19]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[20]。液相色譜法檢測(cè)擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留靈敏度不及氣相色譜好，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀利用電子電離源時(shí)，對(duì)擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的靈敏度也不夠理想，而氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為高端方法不易普及，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器作為選擇性檢測(cè)器，檢測(cè)擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留，仍有其優(yōu)勢(shì)。固相萃取作為一種簡(jiǎn)便的前處理方法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中被廣泛采用。固相萃取可采用單一填料的固相萃取小柱進(jìn)行，也可將不同類型填料的固相萃取小柱串聯(lián)進(jìn)行，近年來(lái)還出現(xiàn)了將不同類型填料混合裝填的固相萃取小柱[19]。本實(shí)驗(yàn)采用混合填料的固相萃取柱凈化，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)，建立了金銀花中9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留量的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

9 種金銀花樣品分別購(gòu)自云南省昆明市、廣西省柳州市、四川省廣元市、山東省東營(yíng)市、河北省邢臺(tái)市、浙江省麗水市、湖南省懷化市、貴州省畢節(jié)市、河南省新鄉(xiāng)市。

正己烷、丙酮（均為農(nóng)殘級(jí)） 美國(guó)天地公司；標(biāo)準(zhǔn)品七氟菊酯（CAS：79538-32-2）、聯(lián)苯菊酯（CAS：82657-04-3）、甲氰菊酯（CAS：64257-84-7）、氯氟氰菊酯（CAS：91465-08-6）、氯菊酯（CAS：52645-53-1）、氟氯氰菊酯（CAS：68359-37-5）、氯氰菊酯（CAS：52315-07-8）、氰戊菊酯（CAS：51630-58-1）、溴氰菊酯（CAS：52918-63-5）、滅蟻靈（CAS：2385-85-5，內(nèi)標(biāo)）均購(gòu)自百靈威公司，純度均大于99.0%，以正己烷配制，并稀釋成合適質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 儀器與設(shè)備

Hamilton MicroLab 500配液系統(tǒng) 瑞士Hamilton公司；7890氣相色譜儀（配備微池電子捕獲檢測(cè)器）、Florisil固相萃取柱、TPH固相萃取柱（500 mg/6 mL）美國(guó)Agilent公司；PrepLinc SPEi自動(dòng)固相萃取儀 美國(guó)J2 Scientifi c公司；多管旋渦混合儀 美國(guó)Talboys公司；SK5200H超聲波萃取儀 上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；DryVap定量濃縮儀 美國(guó)Horizon公司。

1.3 方法

1.3.1 溶液配制

分別稱取9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.01 g置10 mL容量瓶中，精確至0.000 1 g，用正己烷定容，配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L每種農(nóng)藥的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。然后移取每種農(nóng)藥的單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL置100 mL容量瓶中，用正己烷稀釋定容，得到每種農(nóng)藥質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合儲(chǔ)備液，－20 ℃保存，有效期6 個(gè)月。

稱取0.01 g滅蟻靈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于100 mL容量瓶中，精確至0.000 1 g，用正己烷定容，得到質(zhì)量濃度為100 mg/L的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。移取1 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液于100 mL容量瓶中，用正己烷定容，得到質(zhì)量濃度為1 mg/L的內(nèi)標(biāo)工作液。

1.3.2 樣品處理

金銀花樣品置于旋風(fēng)磨中粉碎，過(guò)850 μm篩，作為實(shí)驗(yàn)樣品。稱取2.0 g樣品于50 mL離心管中，加入15 mL正己烷（含內(nèi)標(biāo)滅蟻靈0.01 mg/L），旋渦混合5 min，再加5 g無(wú)水硫酸鎂，旋渦混合2 min，過(guò)濾，殘?jiān)?0 mL正己烷分2次洗滌，合并濾液，于定量濃縮儀上40 ℃濃縮近干，用2 mL正己烷復(fù)溶，待凈化。

用5 mL正己烷-丙酮（9∶1，V/V）預(yù)淋固相萃取柱，然后加入提取液，用10 mL正己烷-丙酮（9∶1，V/V）洗脫，收集洗脫液，濃縮近干，用1 mL正己烷溶解后上機(jī)檢測(cè)。

1.3.3 分析條件

色譜柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）毛細(xì)柱；載氣：高純He，恒壓方式，壓力：2.9 kPa；進(jìn)樣口溫度290 ℃，檢測(cè)器溫度350 ℃；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量2 μL。

柱溫程序：初溫80 ℃，以25 ℃/min由80 ℃升至150 ℃，再以4 ℃/min由150 ℃升至280 ℃，保持25 min至樣品全部流出。

1.3.4 定性定量方法

采用農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 萃取液的選擇

擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留提取一般采用石油醚-丙酮[4-6]、石油醚[7-8]、正己烷-丙酮[9-11]、乙酸乙酯-環(huán)己烷[12-16,21]、乙腈[19-20,22-23]等作為萃取溶劑。石油醚、石油醚-丙酮、乙酸乙酯-環(huán)己烷、正己烷-丙酮等溶劑提取雜質(zhì)相對(duì)較多。乙腈雖然穿透力強(qiáng)、提取效果好，但在后續(xù)過(guò)程中不易濃縮。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，正己烷也能滿足提取要求，且提取的雜質(zhì)較少，因此實(shí)驗(yàn)采用正己烷作為提取溶劑。

2.2 固相萃取柱的選擇

凈化擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留樣品，一般選用Floisil固相萃取小柱[4-7,9-10]，實(shí)驗(yàn)比較了Floisil固相萃取小柱和復(fù)合填料（Floisil＋GCB）TPH固相萃取小柱[19]的凈化效果。金銀花樣品經(jīng)2 種固相萃取柱凈化后，回收率均能滿足農(nóng)藥殘留分析要求。Floisil固相萃取小柱凈化后的樣品仍殘留一定的色素，TPH固相萃取小柱凈化后的淋出液基本無(wú)色，雜質(zhì)相對(duì)較少（圖1），因此實(shí)驗(yàn)選用TPH固相萃取小柱。

圖1 Florisil固相萃取小柱（A）和TPH固相萃取小柱（B）凈化的樣品色譜圖Fig.1 Chromatograms of spiked sample (at 0.02 mg/kg) cleaned up by Florisil SPE cartridge (A) and TPH SPE cartridge (B)

2.3 方法的準(zhǔn)確度與精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以正己烷配制9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品的不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，得出9 種農(nóng)藥的校準(zhǔn)曲線及其相關(guān)系數(shù)，9 條校準(zhǔn)曲線的R2均大于0.999。結(jié)果見(jiàn)表1，本方法對(duì)9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留量的檢出限為0.002～0.005 mg/L。

選用金銀花樣品，分別按0.02、0.10、0.50 mg/kg添加擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)，在3 個(gè)加標(biāo)水平上，9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的平均回收率在82.8%～104.6%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）在3.5%～5.7%之間，說(shuō)明本方法對(duì)9 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留有較好的回收率和精密度，能滿足多殘留分析要求。

表1 方法的回收率、精密度與檢測(cè)限Table1 Recoveries and relative standard deviations of 9 pyrethoid pesticides

2.4 樣品檢測(cè)結(jié)果

表2 9 個(gè)不同產(chǎn)地金銀花農(nóng)藥殘留含量Table2 Pesticide residue contents of honeysuckle from 9 growing areas mg/kg

9 個(gè)不同產(chǎn)地金銀花樣品的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2，其中云南省昆明市樣品檢出氟氯氰菊酯，含量為0.04 mg/kg；山東省東營(yíng)市樣品檢出氟氯氰菊酯和聯(lián)苯菊酯，含量分別為0.15 mg/kg和0.02 mg/kg；河北省邢臺(tái)市樣品檢出氟氯氰菊酯，含量為0.03 mg/kg；浙江省麗水市樣品檢出氟氯氰菊酯，含量為0.06 mg/kg；貴州省畢節(jié)市樣品檢出氟氯氰菊酯和溴氰菊酯，含量分別為0.05 mg/kg和0.40 mg/kg；河南省新鄉(xiāng)市樣品檢出氟氯氰菊酯，含量為0.04 mg/kg。廣西省柳州市樣品和四川省廣元市樣品均未檢出9 種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留。《中華人民共和國(guó)藥典（2010版）》僅規(guī)定了3 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留限量，未明確規(guī)定擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留限量。參照GB 2763—2014《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)飲料類茶葉中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留限量要求[24]，檢測(cè)的9 個(gè)產(chǎn)地金銀花相對(duì)安全，符合中藥飲片使用要求。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)采用渦旋振蕩提取、自動(dòng)固相萃取儀凈化、氣相色譜法同時(shí)測(cè)定了金銀花中9 種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留。雖然定性不及GB/T 23200—2008《桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中488 種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定：氣相色譜-質(zhì)譜法》使用的氣相色譜-質(zhì)譜法[19]，但其精確度和精密度仍能滿足農(nóng)藥多殘留的分析要求。在不具氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀條件下，或是僅需要測(cè)定擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留時(shí)，本方法仍然不失其實(shí)用性。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 一部[S]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 205.

[2] 周卿, 周旭美. 分散液液微萃取-高效液相色譜法測(cè)定金銀花中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2014, 20(20): 70-73.

[3] 王冬梅. 氣相色譜測(cè)定金銀花中6 種殺菌劑和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2010, 20(2): 267-268.

[4] 程壽峰, 張明時(shí), 夏品華, 等. 黔產(chǎn)中藥材飲片中擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留量分析[J]. 湖北大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2013, 35(2): 197-199.

[5] 夏品華, 張明時(shí), 王興寧, 等. 氣相色譜法測(cè)定中藥材中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留量[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2008, 18(2): 257-259.

[6] 訾偉旗, 杜斌. 氣相色譜法測(cè)定中藥材中擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留量[J].化工技術(shù)與開(kāi)發(fā), 2010, 39(10): 43-46.

[7] 詹雁, 譚鐳, 肖錦, 等. GC法測(cè)定中藥材中有機(jī)氯及擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留[J]. 華西藥學(xué)雜志, 2010, 25(6): 323-325.

[8] 翁淑琴, 李俊榮, 程心玲, 等. 固相萃取氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定桔梗中擬除蟲(chóng)菊酯的農(nóng)藥殘留[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志, 2009, 44(15): 1184-1185.

[9] 劉童, 王永林, 王愛(ài)民, 等. 葒草藥材中12 種有機(jī)氯及擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留分析[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2010, 16(18): 47-49.

[10] 鄭楊, 程景. 茶葉中7 種有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)研究[J]. 農(nóng)藥科學(xué)管理, 2011, 32(3): 34-37.

[11] 馮潔, 湯樺, 陳大舟, 等. 茶葉中9 種有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留的前處理方法研究[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2010, 29(10): 1041-1047.

[12] 郟征偉, 毛秀紅, 苗水, 等. 氣相色譜雙塔雙柱法同時(shí)測(cè)定中藥材中56 種有機(jī)氯類及擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留量[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 45(3): 353-358.

[13] 何芳, 孔祥虹, 何強(qiáng), 等. 氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)中藥材中81 種農(nóng)藥殘留[J]. 化學(xué)分析計(jì)量, 2013, 22(3): 9-11.

[14] 何睿, 張春玲, 常育. 中藥材中7 種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法研究[J]. 西北藥學(xué)雜志, 2014, 29(2): 132-134.

[15] 莊婉娥, 弓振斌, 葉江雷, 等. 凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定金銀花中33 種農(nóng)藥殘留組分[J]. 分析化學(xué), 2010, 38(6): 811-816.

[16] 羅逢健, 陳宗懋, 湯富彬, 等. 固相萃取和氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中34 種農(nóng)藥殘留[J]. 農(nóng)藥, 2010, 49(5): 363-366.

[17] 劉洪波. 氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定杭白菊等3 種中藥中5 種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留[J]. 浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 32(1): 110-115.

[18] 劉洪波, 趙曉芳, 石貴英, 等. 濁點(diǎn)萃取反萃取-氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定金線蓮中5 種擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留[J]. 中國(guó)中藥雜志, 2014, 39(15): 2859-2861.

[19] 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. GB/T 23200—2008 桑枝、金銀花、枸杞子和荷葉中488 種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定: 氣相色譜-質(zhì)譜法[S]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2008.

[20] 程志, 張蓉, 劉韋華, 等. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速篩查測(cè)定中藥材中144 種農(nóng)藥殘留[J]. 色譜, 2014, 32(1): 57-68.

[21] 楊曉鳳, 謝淋, 韓梅, 等. 凝膠滲透色譜凈化-氣相色譜法測(cè)定茶葉中30 種有機(jī)氯及擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留量[J]. 理化檢驗(yàn): 化學(xué)分冊(cè), 2011, 47(6): 698-700.

[22] 盧劍, 武中平, 高巍, 等. 氣相色譜雙柱法測(cè)定茶葉中多種有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥殘留量[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(24): 401-404.

[23] 楊曉鳳, 謝淋, 韓梅, 等. GC-ECD法測(cè)定茶葉中30 種有機(jī)氯及菊酯類農(nóng)藥殘留[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2010, 23(3): 764-767.

[24] 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì). GB 2763—2014 食品中農(nóng)藥最大殘留限量[S]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2014.

Determination of 9 Pyrethroid Pesticide Residues in Honeysuckle by Solid Phase Extraction and Gas Chromatography

TIAN Limei, SUN Zhiyong, XIANG Ming, SONG Chunman, YANG Yekun, LI Xuemei*
(Technology Center, China Tobacco Yunnan Industrial Co. Ltd., Kunming 650106, China)

A method was developed for the determination of 9 pyrethroid pesticide residues in honeysuckle with solidphase extraction and gas chromatography. The results showed that average recoveries of 9 pesticides spiked at 0.02, 0.1 and 0.5 μg/g were in the range of 82.8%-104.6% with relative standard deviation (RSD) of 3.5%-5.7%. The linear range of the presented method was 0.01-0.8 mg/L, and the limits of detection (LOD) were 0.002-0.005 mg/L. The method is sensitive and suitable for the analysis of pyrethroid pesticide residues in honeysuckle.

gas chromatography; solid-phase extraction; pyrethroid; pesticide residue; honeysuckle

R914

A

1002-6630（2015）20-0239-03

10.7506/spkx1002-6630-201520046

2014-12-22

云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013JC03）

田麗梅（1974—），女，助理工程師，本科，研究方向?yàn)檗r(nóng)藥殘留分析。E-mail：571962751@qq.com

*通信作者：李雪梅（1971—），女，研究員，博士，研究方向?yàn)闊煵莅踩栽u(píng)價(jià)。E-mail：xmlikm@126.com