夏盟愷，曾　菁，牛春麗，彭　芳

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理　671000）

肝龍膠囊和美洲大蠊脫脂膏對正常大鼠膽汁分泌的影響

夏盟愷，曾菁，牛春麗，彭芳*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

目的：研究肝龍膠囊和美洲大蠊脫脂膏對正常大鼠膽汁分泌的影響。方法：取80只大鼠隨機(jī)分組，各組均按20 mL∕kg進(jìn)行灌胃給藥，1次∕d，連續(xù)給藥7 d。采用大鼠膽汁流量實(shí)驗(yàn)、膽汁成分分析觀察受試藥的利膽作用。結(jié)果：肝龍膠囊無利膽作用，對膽汁成分無影響；而美洲大蠊脫脂膏具有利膽作用，其膽汁流量與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），使膽汁中TBL、DBL、IBL的含量降低（P＜0．05）。結(jié)論：肝龍膠囊對正常大鼠無利膽作用；美洲大蠊脫脂膏則有利膽作用。

肝龍膠囊;美洲大蠊脫脂膏；利膽作用

［DOI］10．3969∕j．issn．1672-2345．2015．02．002

膽汁淤積是由于膽汁生成障礙或流動障礙所造成的一種臨床綜合征。無論何種原因所致的膽汁淤積均可導(dǎo)致肝臟損傷和慢性膽汁淤積性肝病。膽汁淤積通常伴隨有血清堿性磷酸酶升高、黃疸和高膽固醇血癥，并逐步發(fā)展為肝硬化甚至肝功能衰竭〔1〕。

肝龍膠囊是國家食品藥品監(jiān)督管理局正式登記在案的抗肝炎中藥新藥。已有眾多文獻(xiàn)證明肝龍膠囊有顯著的抗乙型肝炎療效〔2-3〕?，F(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，肝龍膠囊還有一定的抗脂質(zhì)過氧化能力〔4〕，對酒精性肝損傷以及化學(xué)試劑造成的急性肝損傷有一定的修復(fù)能力，延緩或抑制損傷因素對肝臟造成的炎癥反應(yīng)〔5-6〕，以及控制和調(diào)節(jié)肌肉收縮的能力〔7〕。

美洲大蠊脫脂膏是將美洲大蠊干燥蟲體粉碎后，用15倍量95%乙醇冷浸提取3次，所得乙醇液合并，濃縮得提取浸膏。所得到的浸膏，上聚酰胺柱，依次用水及不同比例的含水甲醇洗脫，定量收集，分別濃縮。其中某一劃段成分經(jīng)冷凍干燥后即為所用樣品。通過計(jì)算，所提取物占生藥的比率為0．2%。康復(fù)新液是根據(jù)云南大理白族人民應(yīng)用蜚蠊治療惡瘡的有效經(jīng)驗(yàn)，從美洲大蠊藥材提取液中分離、精制而成的生物制劑，其成分復(fù)雜，含有18種氨基酸，其中丙氨酸最多，還含有動物油脂、蛋白質(zhì)、多元醇類及肽類活性物質(zhì)，其中康復(fù)新液主要成分美洲大蠊浸膏的濃度為0．04 mg∕mL。

上述研究結(jié)果提示肝龍膠囊具有一定的抗肝損傷作用，如能進(jìn)一步探索美洲大蠊來源的系列產(chǎn)品是否影響膽汁的分泌，這對美洲大蠊更好地改善消化系統(tǒng)消化吸收功能及如何減輕炎癥發(fā)生具有重要的指導(dǎo)意義。

1　實(shí)驗(yàn)材料與方法

1．1動物標(biāo)準(zhǔn)SD健康大鼠80只，雌雄各半，體重250～300 g，由昆明醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，合格證號：SCXK（滇）2008-0003。

1．2實(shí)驗(yàn)試劑及藥品肝龍膠囊（昆明賽諾制藥有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字Z20050113）；康復(fù)新液（昆明賽諾制藥有限公司，批號：國藥準(zhǔn)字Z53020054）；美洲大蠊脫脂膏（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院劉光明教授提供）。

1．3器材AE240電子分析天平（瑞士梅特勒有限公司）；1．0R型低溫高速離心機(jī)（德國Heraeus公司）；7180型全自動生化分析儀（日本Hitachi公司）。

1．4樣品及所用藥物的配制肝龍膠囊樣品用生理鹽水配制為3個(gè)濃度：0．125%、0．25%、0．5%；美洲大蠊脫脂膏樣品用生理鹽水配制為3個(gè)濃度：0．25%、0．5%、1%。

1．5肝龍膠囊對正常大鼠膽汁分泌的影響取體重250～300 g大鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)分為8組，肝龍膠囊高劑量組（100．00 mg∕kg）、中劑量組（50．00 mg∕kg）、低劑量組（25．00 mg∕kg）；美洲大蠊脫脂膏高劑量組（200．00 mg∕kg）、中劑量組（100．00 mg∕kg）、低劑量組（50．00 mg∕kg）；陽性組（康復(fù)新）（0．36 mg∕kg），對照組（生理鹽水）。肝龍膠囊、美洲大蠊脫脂膏組、對照組、康復(fù)新組均按20 mL∕kg對大鼠進(jìn)行灌胃給藥，1次∕d，連續(xù)給藥7 d。實(shí)驗(yàn)前12 h禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)前每鼠腹腔注射20%烏拉坦（0．5 mL∕100 g）后，行腹部手術(shù)，仰位固定于固定板上，沿腹正中線切開2 cm，打開腹腔，在十二指腸降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下穿2根絲線，結(jié)扎乳頭部，向肝臟方向作V形切口，插入1 mL塑料管，用小燒杯收集膽汁。手術(shù)后用止血鉗夾閉腹壁，以鹽水紗布覆蓋。待穩(wěn)定20 min后，收集大鼠給藥后所分泌4 h膽汁，每30 min換一個(gè)小燒杯收集，共收集8次。記錄膽汁流量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束測定4 h的膽汁分泌總量，計(jì)算膽汁的體質(zhì)量系數(shù)〔8-11〕。并測定膽汁中的總膽固醇（Total cholesterol，TC），總膽紅素（Total bilirubin，TBL），直接膽紅素（Direct bilirubin，DBL），間接膽紅素（Indirect bilirubin，IBL）和總膽汁酸（To?tal bile acid，TBA）。

膽汁的體質(zhì)量系數(shù)=膽汁重量（g）÷體重量（g）× 100%

2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2．1肝龍膠囊對正常大鼠膽汁流量的影響對膽汁分泌量的影響：與對照組比較，康復(fù)新液組膽汁分泌量顯著性增多（P＜0．01），美洲大蠊脫脂膏中劑量組增多（P＜0．05）；與康復(fù)新液組比較，肝龍膠囊高、中劑量組顯著性減少（P＜0．01），肝龍膠囊低劑量組、美洲大蠊脫脂膏3個(gè)劑量組膽汁分泌量與康復(fù)新液組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。對膽汁系數(shù)的影響：與對照組比較，康復(fù)新液組膽汁系數(shù)顯著性增大（P＜0．01），美洲大蠊脫脂膏中劑量組增大（P＜0．05）；與康復(fù)新液組比較，肝龍膠囊高、中劑量組顯著性減?。≒＜0．01），肝龍膠囊低劑量組、美洲大蠊脫脂膏3個(gè)劑量組膽汁系數(shù)與康復(fù)新液組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05）。膽汁分泌量與膽汁系數(shù)成正比，膽汁分泌量越多，膽汁系數(shù)越大。見表1。

表1　肝龍膠囊對正常大鼠4 h膽汁流量的影響（，n=10）

表1　肝龍膠囊對正常大鼠4 h膽汁流量的影響（，n=10）

注：與對照組比較*P＜0．05，**P＜0．01；與陽性組比較##P＜0．01。

膽汁系數(shù)∕% 0．46±0．25 0．36±0．21##0．45±0．17##0．61±0．24 0．56±0．10 0．67±0．09* 0．53±0．17 0．76±0．22**組別對照組肝龍膠囊高劑量組肝龍膠囊中劑量組肝龍膠囊低劑量組美洲大蠊脫脂膏高劑量組美洲大蠊脫脂膏中劑量組美洲大蠊脫脂膏低劑量組康復(fù)新液組劑量∕（mg∕kg）—100．00 50．00 25．00 200．00 100．00 50．00 0．36膽汁分泌量∕mL 1．16±0．62 0．90±0．52##1．13±0．43##1．51±0．61 1．40±0．25 1．66±0．21* 1．32±0．42 1．89±0．54**

2．2肝龍膠囊對正常大鼠膽汁主要成分的影響

美洲大蠊脫脂膏3個(gè)劑量組對TBL、DBL、IBL均有下降作用，但結(jié)果未出現(xiàn)濃度依賴性。其中美洲大蠊脫脂膏中劑量組的膽紅素與對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），美洲大蠊脫脂膏低劑量組的TBL、IBL與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），康復(fù)新的IBL、TC與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。見表2。

3　討論

膽汁是膽道中流動的一種特殊液體，75%由肝細(xì)胞分泌，25%由膽管細(xì)胞分泌。膽汁的成分中97%是水，水中溶解許多成分，除了鈣、鈉、鉀、碳酸氫鹽等無機(jī)成分之外，還包括膽色素、TC、膽鹽、TBA等有機(jī)成分。

表2　肝龍膠囊對正常大鼠膽汁主要成分的影響（，n=10）

表2　肝龍膠囊對正常大鼠膽汁主要成分的影響（，n=10）

注：與對照組比較*P＜0．05，**P＜0．01；與陽性組比較#P＜0．05。

組別對照組肝龍膠囊高劑量組肝龍膠囊中劑量組肝龍膠囊低劑量組美洲大蠊脫脂膏高劑量組美洲大蠊脫脂膏中劑量組美洲大蠊脫脂膏低劑量組康復(fù)新液組劑量∕（mg∕kg）—100．00 50．00 25．00 200．00 100．00 50．00 0．36 TBL∕（μmol∕L）138．13±68．12 144．18±37．43#115．80±36．41 99．31±19．12 115．84±29．31 67．01±10．09* 72．33±30．62* 79．35±17．26 DBL∕（μmol∕L）109．99±57．38 121．79±27．47#97．71±30．28 84．45±15．75 101．08±23．86 58．21±10．37* 63．54±26．89 68．68±13．67 IBL∕（μmol∕L）28．05±9．98 22．39±6．28#18．09±6．49 14．86±6．10 14．76±5．58 8．80±0．81** 8．79±4．01** 10．68±3．13* TC∕（mmol∕L）TBA∕（μmol∕L）0．32±0．08 0．31±0．04#0．34±0．08#0．27±0．08 0．32±0．02#0．30±0．03#0．31±0．07#0．24±0．04* 153．11±23．70 147．71±36．79 156．33±12．39 145．64±30．89 169．73±17．66 152．45±36．55 171．55±42．97 137．68±23．13

TBA是膽汁的重要組成和功能部分，除了促進(jìn)脂肪酸吸收的作用之外，它還具有兩個(gè)重要的功能：抑制TC沉淀形成膽結(jié)石、通過向膽汁的主動運(yùn)輸促進(jìn)水分和溶質(zhì)的輸出。膽紅素是體內(nèi)鐵卟啉化合物的主要代謝產(chǎn)物，也是臨床上判斷黃疸的重要依據(jù)，而且是肝功能的重要指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，美洲大蠊脫脂膏中劑量組膽汁分泌量與對照組比較有較大的增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）；康復(fù)新液組與對照組比較膽汁分泌量增加明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），提示美洲大蠊脫脂膏中劑量組、康復(fù)新液組對大鼠膽汁分泌有不同程度的促進(jìn)作用。美洲大蠊脫脂膏低劑量組對TBL、IBL均有降低作用，美洲大蠊脫脂膏中劑量組對TBL、DBL、IBL均有降低作用，2個(gè)劑量組IBL含量與對照組比較降低明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01），提示美洲大蠊脫脂膏可能通過降低膽紅素來減少膽汁淤塞以及其它肝膽疾病的發(fā)病率；康復(fù)新液對IBL、TC也有降低作用（P＜0．05），提示康復(fù)新液可能是通過降低IBL、TC來促進(jìn)膽汁的分泌及改善機(jī)體的消化功能。本次實(shí)驗(yàn)中各組TBA含量與對照組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），提示康復(fù)新液、美洲大蠊脫脂膏促膽汁分泌作用可能與TBA含量變化無關(guān)。

實(shí)驗(yàn)中肝龍膠囊各劑量組膽汁分泌量、膽汁系數(shù)與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），肝龍膠囊高劑量組TBL、DBL、IBL含量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0．05），與康復(fù)新液組比較有所增多（P＜0．05）；肝龍膠囊高、中劑量TC含量與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與康復(fù)新液組比較亦有所增多（P＜0．05）。肝龍膠囊低劑量組膽汁流量、膽紅素含量及TC含量與康復(fù)新液組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），而高、中劑量組膽汁流量、膽紅素含量及TC含量與康復(fù)新組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），提示實(shí)驗(yàn)可能受大鼠個(gè)體因素、劑量設(shè)計(jì)等因素的影響。綜上所述，肝龍膠囊并無利膽作用，與康復(fù)新液組比較，出現(xiàn)了膽汁流量減少、膽紅素及膽固醇含量升高等效果。

從美洲大蠊脫脂膏組膽汁各成分變化來看，美洲大蠊脫脂膏可能為水利膽劑，除了降低膽紅素濃度并未改變其它成分在膽汁中的濃度。本次實(shí)驗(yàn)中因?yàn)榭紤]實(shí)驗(yàn)中取血對大鼠術(shù)后生存的影響以及麻醉對血清膽紅素成分的影響，并未進(jìn)行血清膽紅素的評估，故無法判斷膽汁中膽紅素降低是否產(chǎn)生了對肝臟的保護(hù)效果以及減少黃疸發(fā)生的作用，有待進(jìn)一步研究。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)，肝龍膠囊、美洲大蠊脫脂膏的3個(gè)劑量組并未呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，肝龍膠囊低劑量組膽汁流量、膽汁系數(shù)與對照組比較雖未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但出現(xiàn)了流量增加、系數(shù)增大的趨勢，效果比肝龍膠囊高、中劑量組好；美洲大蠊脫脂膏中劑量促膽汁分泌的效果比高劑量好，美洲大蠊中、低劑量組對膽紅素的降低效應(yīng)也較高劑量組明顯，分析可能的原因?yàn)樗幬飫┝吭O(shè)計(jì)不好，提示用藥原則應(yīng)以選擇較小劑量、長期應(yīng)用。

由于研究還處于初期階段，未能對膽汁中其它成分的變化進(jìn)行測定，故可能存在尚未研究出來美洲大蠊脫脂膏促膽汁分泌的機(jī)制，有待進(jìn)一步深入研究。

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（責(zé)任編輯李楊）

Effect of Ganlong Capsule and Periplaneta americana Skimmed Cream on Bile Secretion of Normal Rats

Xia Mengkai,Zeng Jing,Niu Chunli,Peng Fang*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To investigate the effect of Ganlong capsule and Periplaneta americana skimmed cream on bile secretion of normal rats．Methods:80 rats were randomly divided into groups．After seven consecutive days of intragastric administration of 20 mL∕kgonce a day to each group,the effect was observed by the bile flow experiment and the analysis of bile composition．Results: Ganlong capsule had no choleretic effec,and no effect on bile compositon．Periplaneta americana skimmed cream had choleretic effect, and compared with NS group,the difference in the bile flow was statistically significant(P＜0．05),and the content of TBL,DBL and IBL in bile decreased(P＜0．05)．Conclusion:Ganlong capsule had no choleretic effect;Periplaneta americana skimmed cream had choleretic effect．

Ganlong capsule;Periplaneta americana skimmed cream;choleretic effect

R965．1

A

1672-2345（2015）02-0004-04

2014-08-02

2014-12-05

夏盟愷，碩士研究生，主要從事藥理學(xué)研究．

彭芳，教授．