宋 麗，侯遠(yuǎn)沛

(徐州市傳染病醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州221004)

110例產(chǎn)婦乳汁HBV-DNA含量與血清HBsAg濃度的相關(guān)性分析

宋 麗，侯遠(yuǎn)沛

(徐州市傳染病醫(yī)院檢驗科，江蘇徐州221004)

目的通過分析產(chǎn)婦乳汁中乙肝病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）含量與產(chǎn)婦血清乙肝病毒表面抗原（HBsAg）濃度含量的相關(guān)性，探討乙型肝炎產(chǎn)婦母乳喂養(yǎng)的安全性問題，正確指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)。方法選擇徐州市傳染病醫(yī)院門診乙肝產(chǎn)婦110例，利用實時熒光PCR技術(shù)（FQ-PCR）測定產(chǎn)婦乳汁HBV-DNA含量，采用時間分辨免疫熒光法（IFMA）檢測HBsAg含量。結(jié)果110例產(chǎn)婦HBsAg感染濃度＞500ng/ml有24例，乳汁HBV-DNA陽性16例，平均濃度為8.86E+06IU/ml，陽性率66.7%，HBsAg感染濃度在300～500ng/ml范圍的66例，乳汁HBV-DNA陽性26例平均濃度為9.12E+04IU/ml，陽性率39. 4%，HBsAg感染濃度＜300ng/ml有20人，乳汁HBV-DNA陽性3例且平均濃度為3.54E+03IU/ml，陽性率15.0%。由此可見HBsAg感染濃度與乳汁HBV-DNA含量呈正相關(guān)。結(jié)論建議產(chǎn)婦哺乳前應(yīng)做乳汁HBV-DNA和乙肝標(biāo)志物檢測，乳汁HBV-DNA陽性率及病毒含量隨著HBsAg感染濃度的升高而升高。HBV產(chǎn)婦乳汁具有一定的傳染性，因此要正確選擇哺乳方式從而降低新生兒乙肝病毒的感染率。

乳汁；HBV-DNA，HBsAg；時間分辨免疫熒光法（IFMA）

近年來隨著人們醫(yī)療條件的不斷改進(jìn)和醫(yī)學(xué)知識的廣泛普及，在嬰幼兒喂養(yǎng)方式上，越來越多的母親更傾向于母乳喂養(yǎng)，但同時也增加了母嬰傳播乙肝的概率。母嬰傳播產(chǎn)后感染的主要介質(zhì)是母乳[1]。母乳中的HBV-DNA具有一定的傳染性，特別是血清HBsAg高濃度且乳汁HBV-DNA陽性的產(chǎn)婦母乳，大大提高了嬰幼兒感染乙肝的幾率。無免疫力的新生兒及免疫力差的兒童尤其是母親為乙肝病毒表面抗原陽性（HBsAg）的新生兒是HBV的高危人群[2]。筆者通過檢測產(chǎn)婦乳汁HBV-DNA和血清HBsAg濃度，并對其相關(guān)性進(jìn)行分析比較，從而探討乙肝病毒攜帶者產(chǎn)婦母乳喂養(yǎng)安全問題。

1 資料與方法

1.1 一般材料選取2014年6月至2015年6月我院門診110例乙肝產(chǎn)婦，其平均年齡在22～30歲。所有產(chǎn)婦均無肝炎臨床癥狀并排除其它傳染性疾病，并經(jīng)過患者知情同意。

1.2 標(biāo)本采集抽取產(chǎn)婦血樣3ml于分離膠試管離心備用，定量檢測乙肝病毒表面抗原。乳汁HBV-DNA檢測標(biāo)本前處理很重要，對產(chǎn)婦乳頭用無菌生理鹽水消毒后，用無菌試管留取乳汁，置冰箱4℃過夜，吸棄上層乳白色脂肪層，吸取中間乳層進(jìn)行離心沉淀處理。乳清和沉淀的DNA檢測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)沉淀的陽性率及DNA濃度均明顯高于乳清，對于乳汁的HBVDNA檢測還是應(yīng)該取沉淀進(jìn)行檢測，否則有可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果[3]。

1.3 試劑和儀器儀器為廈門安普利生物有限公司GeneLight 9800熒光定量擴(kuò)增儀量PCR，試劑盒由廈門安普利生物有限公司提供：乙肝病毒標(biāo)志物試劑盒蘇州新波生物技術(shù)有限公司提供，儀器為蘇州新波生物技術(shù)有限公司EFFICUTA-969，SYM-810。

1.4 檢測方法采用實時熒光PCR技術(shù)（FQPCR），根據(jù)體外擴(kuò)增原理，利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移實時跟蹤熒光定量檢測方法對產(chǎn)婦乳汁HBVDNA進(jìn)行特異性定量分析。陰性對照定量值應(yīng)< 500IU/ml，臨界陽性對照值應(yīng)符合定量范圍2.0× 103IU/ml～9.0×103IU/ml，強(qiáng)陽性對照定量值應(yīng)符合定量范圍2.0×107IU/ml～9.0×107IU/ml，否則該次試驗視為無效。實驗嚴(yán)格按照試劑說明書和SOP文件操作。

采用雙抗體夾心時間分辨免疫熒光法（IFMA）定量檢測乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。實驗時應(yīng)同時設(shè)有6個標(biāo)準(zhǔn)品，HBsAg濃度≥0.2ng/ml，結(jié)果判斷為陽性，反之陰性。特別注意的是血清HBsAg濃度如果≥150ng/ml，待測標(biāo)本應(yīng)稀釋后在計算濃度值，且稀釋后的濃度均應(yīng)在線性范圍內(nèi)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用PEMS3.1軟件，率的檢驗采用χ2檢驗，均數(shù)的檢驗采用t檢驗，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

110例產(chǎn)婦乳汁HBV-DNA含量與血清HB-sAg濃度的相關(guān)性分析見表1。

表1 不同濃度乙肝病毒表面抗原(HBsAg)與乳汁HBV-DNA檢測結(jié)果比較

3 討論

由以上表1結(jié)果顯示A組的產(chǎn)婦HBsAg感染濃度>500ng/ml有24例，乳汁HBV-DNA陽性16例且平均濃度為8.86E+06IU/ml，陽性率66.7%與B組的產(chǎn)婦HBsAg感染濃度在300~500ng/ml范圍的66例，乳汁HBV-DNA陽性26例平均濃度為9.12E+04IU/ml，陽性率39.4%相比較，兩者相差有統(tǒng)計學(xué)差義（χ2=5.26，P＝0.02）。B組與C組的產(chǎn)婦HBsAg感染濃度<300ng/ml，乳汁HBV-DNA陽性3例且平均濃度為3.54E+03IU/ml，陽性率15.0%與相比較，兩者相差有統(tǒng)計學(xué)差義（χ2=4.09，P＝0.04）。A組的產(chǎn)婦和C組的產(chǎn)婦相比較，均有統(tǒng)計學(xué)差義（χ2=11.87，P＝0.0006）。

眾所周知，近年來世界衛(wèi)生組織（WHO）大力提倡母乳喂養(yǎng)，母乳喂養(yǎng)雖然有很多優(yōu)點，其成分既是嬰幼兒成長發(fā)育的最佳營養(yǎng)品又可增強(qiáng)其免疫力。但是，據(jù)文獻(xiàn)報道HBV攜帶者母親，其子女約有38%～58%HBsAg呈陽性[4]。母乳喂養(yǎng)能增加嬰兒感染HBV的危險．為了避免母乳喂養(yǎng)傳染嬰兒，應(yīng)采取退乳及人工喂養(yǎng)[5]。嬰幼兒的口腔粘膜以及胃腸消化道的潰瘍和水腫、產(chǎn)婦乳頭的干裂和破潰，均可誘發(fā)嬰幼兒乙肝感染的可能性。所以，嬰幼兒喂養(yǎng)方式的選擇要本著科學(xué)謹(jǐn)慎的態(tài)度，不要一味的只看到母乳喂養(yǎng)的優(yōu)點而忽視了其潛在的傳染性。

肝炎在圍生(產(chǎn))期和嬰幼兒時期感染HBV者中，分別有90%和25%～30%將發(fā)展成慢性感染[6]。目前較多的研究結(jié)論都反映出血清中HBsAg與HBV DNA之間存在正相關(guān)性[7]。本研究顯示乳汁HBV-DNA陽性率及病毒含量隨著HBsAg感染濃度的升高而升高。此結(jié)果與梁淑蘭等人研究結(jié)果-血清中表面抗含量與乙肝產(chǎn)婦乳汁中HBV-DNA含量呈正相關(guān)相同[8]?？紤]到基層醫(yī)療單位基因診斷實驗室尚不能普及，如果以血清乙肝標(biāo)志物進(jìn)行血清安全性評價，應(yīng)盡可能采用雙抗體夾心時間分辨免疫熒光法（IFMA）定量檢測HBsAg以提高陽性檢出率。通常HBsAg和HBeAg陽性被認(rèn)為是具有傳染性的間接標(biāo)志，HBsAg、HBeAg和HB-cAb是HBV復(fù)制活躍的標(biāo)志[9]。也有文獻(xiàn)結(jié)果表明，血清HBeAg陽性與乳汁中HBV-DNA的檢出并不完全一致，部分HBeAg陰性產(chǎn)婦乳汁中仍能檢出HBV-DNA[10]。因此，產(chǎn)婦HBsAg濃度和乳汁HBV-DNA含量聯(lián)合檢測更具有積極的臨床意義。如果產(chǎn)婦HBsAg檢出陽性，無論濃度高低，建議到有資質(zhì)的醫(yī)院進(jìn)行乳汁HBV-DNA檢測。對乳汁HBV-DNA陽性的產(chǎn)婦，為了安全起見，應(yīng)考慮對嬰兒采取人工喂養(yǎng)方式；對乳汁HBV-DNA陰性且HBsAg感染濃度高的產(chǎn)婦，應(yīng)定期進(jìn)行乳汁HBV-DNA復(fù)查，以確保哺乳期的安全，從而降低嬰幼兒感染乙肝的可能性。

[1]黃蓮芬.乙肝病毒感染或攜帶產(chǎn)婦檢測乳汁乙肝病毒DNA結(jié)果分析[J].中國醫(yī)學(xué)報，2011，8(22)：90-93.

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R446.19，R512.6+2

A

1674-1129(2015)06-0771-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2015.06.030

2015-08-06；

2015-10-14)