霍建富，劉書君，申云飛(山西康寶生物制品股份有限公司技術(shù)中心，長治 046000;通訊作者，E-mail:hjf19690320@163.com)

雪蓮是我國生長在高寒地區(qū)的一種名貴藥用植物。由于人們掠奪性采挖，致使野生雪蓮自然資源遭到嚴(yán)重破壞，面臨滅絕的危險。為保護和合理開發(fā)這一名貴藥用植物資源，通過雪蓮人工栽培或利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)是目前解決雪蓮自然資源短缺的主要途徑。

雪蓮培養(yǎng)物是選取雪蓮離體組織，經(jīng)脫分化形成的愈傷組織作為繼代種子，給予一定條件進行繼代培養(yǎng)而獲得的團塊狀顆粒，或該顆粒經(jīng)干燥粉碎得到的粉末。2010年衛(wèi)生部已批準(zhǔn)雪蓮培養(yǎng)物為新資源食品，允許用于功能性食品、保健品、化妝品等領(lǐng)域。人工配制的培養(yǎng)基可以為雪蓮細(xì)胞培養(yǎng)提供必要營養(yǎng)，其中微量元素是細(xì)胞生命活動必需的含量甚微的元素;但許多微量元素是重金屬(如:Hg、Cu、Pb)，而鉛又廣泛存在于自然界中，是一種蓄積性的有害重金屬，長期過量攝入可導(dǎo)致人體慢性中毒，因此對雪蓮培養(yǎng)物中微量鉛控制十分重要。本文建立了一種準(zhǔn)確度好、靈敏度高、重現(xiàn)性好的雪蓮培養(yǎng)物中微量鉛含量的檢測方法，為雪蓮培養(yǎng)物標(biāo)準(zhǔn)的建立提供科學(xué)依據(jù)。

1 試劑與儀器

1.1 試劑

硝酸，優(yōu)級純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)，高氯酸，優(yōu)級純(國藥集團化學(xué)試有限公司)，純化水(山西康寶生物制品股份有限公司)，對照品，金屬鉛(含量99.99%)(中國食品藥品檢定研究院)，雪蓮培養(yǎng)物(山西康寶生物制品股份有限公司，批號:20131003、20131004、20131005)。

1.2 儀器

AA-6300CF原子吸收分光光度計(日本島津);ASK-6100自動進樣器(日本島津);SL-1萬用電爐(北京中興偉業(yè)儀器有限公司);SX2-5-12實驗電阻爐(上海征飛電爐有限公司);AE240電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測條件

參照文獻［3，4］的石墨爐原子吸收光譜法建立了雪蓮培養(yǎng)物中微量鉛含量測定的光譜條件:波長283.3 nm，燈電流6 mA，狹縫1.0 nm，進樣量10 μl，干燥溫度120℃ 20 s，灰化溫度450℃，20 s，原子化溫度1 900℃，4 s，氘燈背景校正。以吸光度定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品中鉛含量。

2.2 溶液的制備

硝酸的配制:按實驗用量，量取適量的硝酸慢慢加入等體積的純化水中，搖勻，即得。

0.5 mol/L硝酸的配制:量取3.2 ml硝酸慢慢加入約50 ml水中，放冷后稀釋至100 ml，搖勻，即得。

混合酸的配制:按實驗用量，取9份硝酸與1份高氯酸混合，搖勻，即得。

鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 mg/ml)的制備:準(zhǔn)確稱取金屬鉛1.000 g，分次加入(總量≤37 ml)硝酸，加熱溶解，移入1 000 ml容量瓶中，加水至刻度，混勻即得。

鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液的制備:吸取鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液1.0 ml于100 ml容量瓶中，加0.5 mol/L硝酸至刻度，逐漸稀釋，制備成濃度為 0 ng/ml，5.00 ng/ml，10.00 ng/ml，20.00 ng/ml，40.00 ng/ml，80.00 ng/ml鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液。

供試品溶液的制備:取三批雪蓮培養(yǎng)物樣品(批號:20131003、20131004、20131005，)，采用干法灰化法，即精密稱取雪蓮培養(yǎng)物(干品)1.000 g于瓷坩堝中，先小火在萬用電爐上炭化至無煙，移入實驗電阻爐500℃ ±25℃灰化8 h，冷卻。若樣品灰化不徹底，則加1 ml混合酸在萬用電爐上小火加熱，反復(fù)多次直到灰化完全，放冷，用0.5 mol/L硝酸將灰分溶解，濾入25 ml容量瓶中，用水少量多次洗滌瓷坩堝，洗液合并于容量瓶中，定容混勻即得;并同法配制試劑空白。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取上述配制的鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液各10 μl，注入石墨爐，測得其吸光度，并求得吸光度與濃度的回歸方程(見圖1)。結(jié)果 鉛在0-80.00 ng/ml的范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=0.005 2X+0.014 6，R2=0.999 4，其中 Y 為吸光度;X 為濃度(ng/ml)。

圖1 線性回歸曲線Figure 1 Standard linear regression curve of plumbum

2.4 結(jié)果

2.4.1 精密度 采用制備好的供試品溶液(20131003)依法連續(xù)進樣6次，結(jié)果顯示鉛的6次測定的吸光度RSD=1.9%(見表1)。從實驗結(jié)果看，6次測定的吸光度平均標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.0%，說明該方法精密度良好。

表1 重復(fù)性試驗結(jié)果Table 1 The repeatability test results

2.4.2 回收率試驗 將鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 mg/ml)用0.5 mol/L硝酸逐步稀釋成100 ng/ml的溶液;精確稱取批號為20131003的樣品3份各0.500 g，分別加入上述稀釋成100 ng/ml的鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.4 ml，0.5 ml，0.6 ml，按上述供試品溶液的制備方法處理樣品，并同法作試劑空白。依法進樣，并計算結(jié)果。實驗表明鉛元素的回收率在96.6%-100.5%之間(見表2)，RSD=1.2%，實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。

表2 回收率試驗結(jié)果Table 2 Recovery test results

從實驗結(jié)果看，高、中、低三種不同濃度的加樣回收率均在95%-105%之間，符合試驗要求，平均回收率為98.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.0%，說明該方法的準(zhǔn)確度好。

2.4.3 樣品的檢測 分別吸取三批供試品溶液與試劑空白液各10 μl，注入石墨爐，測得其吸光度，代入上述的線性回歸方程中，求得鉛含量(限度≤0.2 mg/kg)，結(jié)果見表3。

表3 三批樣品中鉛含量測定結(jié)果及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 3 The content of plumbumin three batches of samples and its relative standard deviation

通過對三批樣品進行檢測，結(jié)果均在規(guī)定限度內(nèi)，經(jīng)三次測定，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%，說明本方法可以用于雪蓮培養(yǎng)物中鉛含量的控制。

3 討論

用石墨爐原子吸收光譜法測定雪蓮培養(yǎng)物中的微量鉛含量，用干法灰化法消解樣品，采用1900℃為原子化溫度，450℃為灰化溫度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算鉛含量，試驗中比較了三種消解樣品的方法，即壓力罐消解法、濕式消解法、干法灰化法，結(jié)果顯示壓力罐消解法在消解的過程中由于罐內(nèi)壓力過高，如操作不當(dāng)很容易發(fā)生漏氣和爆炸等不安全因素，故此法不易用于雪蓮培養(yǎng)物的消解;濕式消解法操作繁瑣、費時且容易炭化和噴液等不安全現(xiàn)象，也不適合用于雪蓮培養(yǎng)物的消解;干法灰化不僅方便操作，而且安全，準(zhǔn)確，所以最終選用干法灰化法處理試樣。

試驗還對原子化溫度進行了考察，為確定原子化溫度，考察了鉛原子化溫度與吸收信號之間的關(guān)系。隨著原子化溫度的升高，鉛的吸收信號逐漸增大，當(dāng)原子化溫度在1 700-2 300℃范圍內(nèi)時，鉛的吸收信號達到最大且基本保持不變。所以本實驗選擇原子化溫度為1 900℃;另外，試驗還對灰化溫度進行了選擇，因鉛是低溫元素，在較高溫度下會發(fā)生揮發(fā)損失，通過實驗考察可知，當(dāng)灰化溫度高于500℃時，鉛就開始出現(xiàn)揮發(fā)損失，從而影響了準(zhǔn)確度，綜合考慮，本實驗的灰化溫度選在450℃，時間持續(xù)20 s。

本實驗的試劑空白與樣品所用試劑的純度和容器的潔凈度有關(guān)，而鉛又廣泛分布于自然界。因此，鉛的檢測是易污染、限量低的痕量分析，空白越低，準(zhǔn)確度越高，所以要求整個實驗空白要很低，實驗過程中要嚴(yán)格控制污染，為保證實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，建議同時進行加標(biāo)回收實驗。

本文采用干法灰化消解雪蓮培養(yǎng)物樣品，石墨爐原子吸收光譜法測定其微量鉛含量，其方法學(xué)考察精密度和準(zhǔn)確度均達到分析要求，所建立的雪蓮培養(yǎng)物中微量鉛含量測定方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可供其質(zhì)量控制參考使用。

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