高效液相色譜法測定科安乳膏中6-姜辣素含量

鄭峙云1，桂雙英1，龍子江1，周緒天2

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省中藥制劑工程技術(shù)研究中心安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院藥物制劑研究所，

安徽 合肥230012；2.安慶鎮(zhèn)痛消瘤研究所，安徽 安慶246001)

[摘要]目的采用高效液相色譜法建立科安乳膏中6-姜辣素含量的測定方法。方法色譜柱為C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水(70∶30)，檢測波長為280 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為20 μL。結(jié)果6-姜辣素濃度在1.02～20.4 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好(r=0.999 9)；平均加樣回收率為98.83%，RSD為1.08%(n=6)。結(jié)論所建立的高效液相色譜法簡便、準(zhǔn)確、可靠，可用于科安乳膏的含量測定。

[關(guān)鍵詞]高效液相色譜法；6-姜辣素；科安乳膏；含量測定

[中圖分類號]R284；R927.2[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.05.025

基金項(xiàng)目：安徽省科技攻關(guān)項(xiàng)目(09010302039)

作者簡介：鄭峙云(1970-)，女，實(shí)驗(yàn)師

收稿日期：(2014-10-30；編輯：張倩)

科安乳膏是由生姜、雄黃與適宜的基質(zhì)制成的復(fù)方乳膏，臨床用于腫瘤治療，效果顯著。現(xiàn)代藥理研究表明，科安乳膏具有明顯的抑制腫瘤作用[1-2]。生姜是科安乳膏主要藥物之一，具有解表散寒、溫中止嘔、化痰止咳、解魚蟹毒等功效。近年來，實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)生姜的提取物有很好的抑瘤效果[3]。姜辣素是生姜中主要活性成分，包括6-姜辣素、8-姜辣素、10-姜辣素、12-姜辣素等10余種成分，以6-姜辣素含量最高，其生物活性也最強(qiáng)。因此，6-姜辣素可作為生姜及含生姜制劑的質(zhì)量評價指標(biāo)。目前，6-姜辣素的含量測定方法多為紫外分光光度法和高效液相色譜法[4-5]，但前者專屬性和靈敏度不理想。為有效控制科安乳膏質(zhì)量，本研究旨在建立該制劑中6-姜辣素的高效液相色譜測定方法。

1　儀器與試藥

1.1儀器日本島津LC-20A高效液相色譜儀(SPD-M20A紫外檢測器，LC-20AB泵，LC-solution色譜工作站)；HH-S恒溫水浴鍋：江蘇國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠；超聲清洗器AS3120：天津奧特賽恩斯儀器有限公司；色譜柱：phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

1.2試藥6-姜辣素對照品：成都恩曼斯特生物技術(shù)有限公司(批號 20100412)；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，科安乳膏為自制品(批號分別為131205、131207、131209)。

通信作者：桂雙英，guishy0520@126.com

2　方法與結(jié)果

2.1試藥的制備

2.1.16-姜辣素對照品溶液的制備精密稱取6-姜辣素標(biāo)準(zhǔn)品10.2 mg，置10 mL量瓶中，以甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，定容至刻度。精密吸取1.0 mL置10 mL量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，即得對照品貯備液。

2.1.2供試品溶液的制備精密稱取本品乳膏約4.8 g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇50 mL，稱質(zhì)量。加熱回流30 min，放冷，加甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3陰性對照溶液的制備精密稱取缺干姜乳膏4.8 g，按“2.1.2”項(xiàng)下制備方法，得陰性對照品溶液。

2.2色譜條件色譜柱:phenomenex C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別精密吸取6-姜辣素對照品、科安乳膏樣品、陰性對照溶液各20 μL，進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，陰性樣品無干擾。見圖1。

2.4線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品貯備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，以甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣20 μL，每樣進(jìn)兩次，記錄色譜，取平均值，并以濃度(c)為橫坐標(biāo)、峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=11 691c-8 962.9(r=0.999 9)。結(jié)果表明，6-姜辣素檢測濃度在1.02～20.4 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取6-姜辣素對照品溶液(8.16 μg/mL)，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積RSD為0.92%(n=6)，表明該方法精密度良好。

圖16-姜辣素對照品(A)、科安乳膏樣品(B)和陰性對照品(C)的高效液相色譜圖

2.6重復(fù)性試驗(yàn)取同一批科安乳膏，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液6份，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定6次。結(jié)果，6-姜辣素含量的RSD為1.51%。表明本方法重復(fù)性較好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，依法每隔2 h測定1次，共考察12 h，結(jié)果，峰面積積分值的RSD為0.99%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8加樣回收率試驗(yàn)精密吸取已知含量的科安乳膏6份，每份約2.4 g，精密稱定，分別精密加入6-姜辣素對照品儲備液0.4 mL(102 μg/mL)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，依法測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為98.83%，RSD為1.08%，表明該方法準(zhǔn)確度好，結(jié)果見表1。

表1　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品含量測定取批號分別為131205、131207、131209的3批樣品，按上述方法制備樣品溶液，分別精密量取樣品溶液和對照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算含量。結(jié)果測得6-姜辣素含量分別為35.22、33.55、33.40 μg/mg，RSD分別為1.21%、0.98%和1.64%。

3　討論

參考文獻(xiàn)高效液相色譜法測定6-姜辣素含量的流動相優(yōu)化時，分別[5-7]考察了甲醇-水體系、乙腈-水體系和乙腈-甲醇-水體系，結(jié)果乙腈-甲醇-水體系效果最優(yōu)，甲醇-水和乙腈-水體系均次之。研究結(jié)果表明，甲醇-水比例為70∶30時能達(dá)到有效分離，考慮到甲醇-水體系成本低、操作簡單，故采用甲醇-水作為流動相。

3批科安乳膏中6-姜辣素含量測定結(jié)果在33.40～35.22 μg/mg，但因檢測的樣品有限，制劑中6-姜辣素含量限度還有待增加原料批次和成品批次而定。同時，雄黃也是本制劑的重要組成成分之一，課題組正在進(jìn)一步制定制劑中雄黃的含量幅度，從而有效控制制劑質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

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