章亞兵，汪 寧

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥 230031;2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽 合肥 210051)

通過(guò)體外藥理實(shí)驗(yàn)研究中藥及復(fù)方制劑藥理作用，由于中藥成分的復(fù)雜性［1］，體外實(shí)驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)體系的干擾因素大，易受到中藥中的滲透壓、pH、鞣酸及離子等成分的干擾，影響到了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。日本學(xué)田代真一提出了中藥血清藥理學(xué)方法的概念［2］，中藥血清藥理學(xué)是指將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口給動(dòng)物灌服一定時(shí)間后采集動(dòng)物血液，分離血清，用含有藥成分的血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。作為一種改良的中藥體外實(shí)驗(yàn)方法，中藥血清藥理學(xué)研究排除了中藥粗制劑直接加入反應(yīng)系統(tǒng)所帶來(lái)的干擾，有利于發(fā)現(xiàn)體外沒(méi)有作用而體內(nèi)有作用的藥物，相對(duì)真實(shí)地反映藥物的整體作用［3］。但是機(jī)體在服用一定劑量的某種藥物后，藥物的成分或代謝產(chǎn)物經(jīng)過(guò)血液循環(huán)到達(dá)其作用的靶器官，而最終與靶器官的細(xì)胞上的作用靶點(diǎn)直接接觸的并不是含藥血清，而是含有一定濃度活性成分的組織液［4］。在機(jī)體產(chǎn)生的組織液中，腦脊液是常見(jiàn)的也是一種十分重要的組織液。但是由于血腦屏障(Blood-brain barrier，BBB)作用，使得腦脊液的成分與血清的成分，不論是生理性還是藥物(代謝)成分都存在差異。血腦屏障是存在于腦組織和血液之間的一個(gè)復(fù)雜的細(xì)胞系統(tǒng)，控制血腦兩側(cè)的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，從而保證中樞神經(jīng)組織內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定［5］。BBB受損是腦血管疾病發(fā)生、發(fā)展的主要原因之一［6］?？赏ㄟ^(guò)代謝進(jìn)入血清的中樞神經(jīng)藥物有效成分因受BBB的選擇性通過(guò)作用是否能夠達(dá)到腦脊液中，發(fā)揮中樞神經(jīng)保護(hù)作用，是研究者們對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行藥效學(xué)研究時(shí)面臨的難題。近來(lái)有學(xué)者提出用含藥腦脊液通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)用于研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的藥理作用。以中藥復(fù)方的含藥腦脊液來(lái)代替含藥血清通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究中藥的藥理作用及確定中藥的有效成分將可能縮小研究范圍，突出重點(diǎn)，并可避免血清中復(fù)雜成分的干擾，更能體現(xiàn)有效成分的藥理作用，增加有效成分研究的針對(duì)性［7－10］。

1 腦脊液藥理學(xué)方法的提出

中藥腦脊液藥理學(xué)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予一定劑量的中藥后，通過(guò)采集動(dòng)物含藥腦脊液作為受試藥進(jìn)行藥理研究的實(shí)驗(yàn)方法。腦脊液是存在于各腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)的無(wú)色透明液體，由腦部特殊的毛細(xì)血管網(wǎng)產(chǎn)生。而血腦屏障是存在于腦部的血漿與腦細(xì)胞之間的屏障，其中存在著緊密連接蛋白等特殊生物學(xué)結(jié)構(gòu)，僅僅分子質(zhì)量較小的脂溶性物質(zhì)及氣體分子才能順利通過(guò)進(jìn)入腦脊液。其他化學(xué)物質(zhì)，即使是對(duì)腦組織有治療作用的藥物也有可能被認(rèn)為是對(duì)大腦內(nèi)部環(huán)境產(chǎn)生不利影響而阻擋在BBB以外，這樣才能保證維持大腦內(nèi)生理環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常結(jié)構(gòu)與功能［11－13］。BBB對(duì)于腦部正常的生理活動(dòng)起著至關(guān)重要的作用，但是由于其同時(shí)能夠阻止藥物自由進(jìn)入腦組織，也增加了對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病的治療難度，對(duì)于新藥篩選和藥理藥效的保護(hù)作用及其機(jī)制的闡述同樣增加了難度。鑒于此，在對(duì)新藥篩選和藥理藥效的保護(hù)作用及其機(jī)制的闡述時(shí)，中藥的有效成分是否能夠通過(guò)BBB作用于腦部神經(jīng)細(xì)胞發(fā)揮藥理作用是我們實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵。梅建勛等［14］提出中藥腦脊液藥理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法，并研究了這一方法對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的離體作用。在家兔灌胃給予中藥后，采集腦脊液并作用于正常星形膠質(zhì)細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，正常星形膠質(zhì)細(xì)胞在含腦脊液培養(yǎng)基中培養(yǎng)狀態(tài)明顯優(yōu)于含相同濃度血清培養(yǎng)基［15］，表明中藥腦脊液方法優(yōu)于血清藥理學(xué)方法，并使用此方法研究了腦益智方的含藥腦脊液對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的保護(hù)作用［16］。

2 中藥腦脊液藥理學(xué)的現(xiàn)狀

2.1 中藥腦脊液藥理學(xué)的應(yīng)用 在具體試驗(yàn)時(shí)，如何造模以及細(xì)胞損傷指標(biāo)的選擇是學(xué)者們根據(jù)研究對(duì)象的不同而具體選擇，一般通過(guò)采集含藥腦脊液后作用于經(jīng)過(guò)加入化學(xué)物質(zhì)如谷氨酸［17］、KCl［18］、過(guò)氧化氫［19］、連二亞硫酸鈉［20］等進(jìn)行造模的細(xì)胞株，通過(guò)考察細(xì)胞的各類指標(biāo)研究其保護(hù)作用及作用機(jī)制。選擇合適的化學(xué)物質(zhì)造模后，細(xì)胞的各項(xiàng)指標(biāo)如膜通透性［21］、氧化應(yīng)激水平［22］、能量代謝［23］、鈣超載程度［24］、各類基因、蛋白的表達(dá)均會(huì)發(fā)生變化［25］，通過(guò)對(duì)這些指標(biāo)的檢測(cè)可確認(rèn)含藥腦脊液是否有保護(hù)作用，以及通過(guò)一系列指標(biāo)的測(cè)定找出其作用靶點(diǎn)。在膜通透性檢測(cè)方面，可使用AO/EB染色，臺(tái)盼蘭染色，培養(yǎng)上清液中LDH濃度等指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn);在衡量細(xì)胞氧化應(yīng)激水平方面，NO濃度、SOD活性、MDA濃度、ROS濃度均是常用參數(shù);在能量代謝水平方面，ATP酶活性檢測(cè)、羅丹明123染色利用流式細(xì)胞術(shù)分析等試驗(yàn)是良好的方法;在鈣超載程度衡量時(shí)可使用細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度檢測(cè)，Westen-blotting方法檢測(cè)鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)比值衡量磷酸化程度等方法。在凋亡蛋白表達(dá)方面，c-fos和c-jun、凋亡基因bax、bcl-2 和 caspase-3 均是不錯(cuò)的選擇［26－30］。由于腦脊液是體內(nèi)重要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)液，通過(guò)給藥后可從下列方面說(shuō)明可應(yīng)用于藥效學(xué)的研究。首先，含藥腦脊液中可能含有效應(yīng)物質(zhì)，可應(yīng)用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的體外藥效學(xué)研究。葉光華等［31］證明了清心開(kāi)竅方含藥腦脊液對(duì)αβ25-35損傷的PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用。李福東等［32］發(fā)現(xiàn)PC12細(xì)胞在開(kāi)心散含藥腦脊液無(wú)血清培養(yǎng)基中也能夠生長(zhǎng)，并且具有含藥腦脊液濃度相關(guān)性。開(kāi)心散復(fù)方中的有效成分能夠經(jīng)過(guò)吸收、轉(zhuǎn)化并通過(guò)BBB進(jìn)入腦部發(fā)揮藥效。張曉艷等［33］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，清心開(kāi)竅方含藥腦脊液能夠明顯提高KCL所致?lián)p傷的PC12細(xì)胞活力，在AD的治療效果是顯著的。上述研究成果從不不同方面說(shuō)明了含藥腦脊液可改善損傷細(xì)胞的保護(hù)作用，為臨床用藥提供了依據(jù)，為保護(hù)機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。其次，含藥腦脊液中新化學(xué)物質(zhì)研究可闡述中藥復(fù)方的物質(zhì)基礎(chǔ)。孫志翠等［34］在相同色譜條件下比較了各組的HPLC指紋圖譜，初步鑒定出了腦脊液成分、復(fù)方成分以及代謝產(chǎn)物，證實(shí)了給藥后腦脊液中出現(xiàn)了復(fù)方中的有效成分。李越峰等［35］利用HPLC法比較大鼠給藥后血中以及腦脊液中的移行成分，確認(rèn)了復(fù)方中的有效成分為辛弗林、芍藥苷、柴胡皂苷C及甘草次酸的混合物。汪寧等［36］通過(guò)研究通竅活血顆粒家兔灌胃后利用氣相色譜法研究腦脊液移行成分，并且發(fā)現(xiàn)了通竅活血顆粒復(fù)方制劑中君藥麝香所含成分麝香酮，并提出可定量測(cè)定其含量以此作為復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一。上述研究表明，含藥腦脊液的藥效學(xué)結(jié)果均有物質(zhì)基礎(chǔ)依據(jù)，是藥效學(xué)的重要佐證。另外，腦脊液的成分變化引起腦內(nèi)其他生物活性物質(zhì)變化也是研究的熱點(diǎn)。謝寧等［37－38］通過(guò)灌胃方式給予家兔地黃飲子水提取物后抽取家兔腦脊液并用來(lái)研究了含藥腦脊液對(duì)β-淀粉樣蛋白(αβ25-35)所致PC12損傷細(xì)胞即早基因c-fos和cjun、凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3表達(dá)作用的影響。結(jié)果顯示 c-fos、c-jun、bax和 caspase-3表達(dá)被抑制，只有bcl-2的表達(dá)是提高的，含藥腦脊液可通過(guò)引起腦內(nèi)基因的表達(dá)影響神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2.2 中藥腦脊液藥理學(xué)的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)步驟

2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇 大小鼠、家兔、犬是我們常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。鄒永杰在對(duì)Longa法加以改良，建立小鼠的線栓法永久性大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型，深入研究了高壓氧預(yù)適應(yīng)對(duì)小鼠MCAO模型的腦缺血保護(hù)作用［39］。池欣欣用大鼠進(jìn)行了缺血再灌注大鼠腦損傷的實(shí)驗(yàn)研究［40］。大鼠由于價(jià)格低廉、飼養(yǎng)費(fèi)用低、腦血管解剖結(jié)構(gòu)與高等動(dòng)物相似、生態(tài)學(xué)和倫理學(xué)等因素考慮［41］，是實(shí)驗(yàn)者常選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一。劉聰?shù)韧ㄟ^(guò)新西蘭兔灌胃柴黃顆粒后取腦脊液研究了腦脊液中發(fā)熱介質(zhì)的影響［42］。家兔可取得腦脊液量遠(yuǎn)大于大小鼠，雖然費(fèi)用較之稍高，為保持理化、生物特性的一致性，可減少因種群差異產(chǎn)生的免疫反應(yīng)，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度，也是實(shí)驗(yàn)者常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。張升等建立一種新的手術(shù)模型，實(shí)現(xiàn)對(duì)腦脊液(CSF)的多次采集，動(dòng)物手術(shù)存活率為80%，模型成功率為60%［43］，有利于多次累積采集腦脊液，適合用于對(duì)腦脊液需求量大的實(shí)驗(yàn)。馬鋒等利用六味地黃丸兔、大鼠、人3種不同種屬動(dòng)物含藥腦脊液腦脊液對(duì)αβ1-40誘導(dǎo)的細(xì)胞活力減低有明顯抑制作用，且未發(fā)現(xiàn)差異性［44］，提示種群差異不是我們動(dòng)物選擇的唯一標(biāo)準(zhǔn)。

2.2.2 腦脊液采集 動(dòng)物的腦脊液體積很少，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)根據(jù)自身能力及特點(diǎn)，盡量采取熟練的、可行的獲取方法。楊子等［45］進(jìn)行了3種采集方法的比較，以選擇可靠的采集方法。第一，經(jīng)皮穿刺延髓池抽取腦脊液。本方法雖然操作簡(jiǎn)單，但是難度太大，未能成功采集合格腦脊液，其原因是采集者不能不能確保進(jìn)針位置的絕對(duì)準(zhǔn)確，且不能保證進(jìn)針深度合適，容易刺穿延髓池。第二，直視下劃破硬脊膜抽取腦脊液。本方法10只大鼠均能采集到清涼腦脊液，但離心后出現(xiàn)8例血性腦脊液，合格率為20%。究其原因，在用手術(shù)刀片劃破硬脊膜時(shí)極易劃破組織血管，導(dǎo)致采集失敗，且待腦脊液流出后再用微量注射器采集，在流出和采集的間隔極易被污染。第三，直視下經(jīng)硬脊膜穿刺微量進(jìn)樣器抽取腦脊液。本方法100%采集到清涼合格的腦脊液，且每只能采集超過(guò)100 μL。本方法能夠成功采集足量腦脊液的原因?yàn)?，在直視下采集者可用微量注射器直接刺入枕大孔采集，不易產(chǎn)生偏差，且腦脊液未流出之前不與外界接觸，不容易產(chǎn)生污染，加之腦脊液只會(huì)流向微量注射器，不會(huì)產(chǎn)生損失。馬偉等［46］采取了直視下經(jīng)硬脊膜穿刺微量進(jìn)樣器抽取腦脊液的方法，通過(guò)枕大孔共抽取了30只SD大白鼠，3只未取出，5只因出現(xiàn)混血失敗，其余22只均成功抽出，平均76 μL，成功率為73%，并且其中有18只腦脊液超過(guò)100 μL。另通過(guò)枕大孔取了50只家兔，其中2例未取出，4例出現(xiàn)混血失敗，其余均成功采集，平均700 μL，成功率88%。上述結(jié)果表明兩組實(shí)驗(yàn)者采取的直視下經(jīng)硬脊膜穿刺微量進(jìn)樣器抽取腦脊液的方法可行，一組采集者成功率略低的原因可能在于采集手法及熟練程度存在差異，并不表明采集方法不可靠，本方法為目前采集者的首選方法。

2.2.3 腦脊液的保存 腦脊液離體后，可立即實(shí)驗(yàn)，或者短期－20℃保存，一般不超過(guò)30 d，以防變性。夏吉榮等［47］通過(guò)比較腦脊液和血清中共同含有的化學(xué)物質(zhì)神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)，發(fā)現(xiàn)在相同溫度下腦脊液中的NSE穩(wěn)定性較差，說(shuō)明腦脊液對(duì)離體后的化學(xué)物質(zhì)保護(hù)作用更差。另外發(fā)現(xiàn)腦脊液中的NSE測(cè)定值比文獻(xiàn)中的測(cè)定值低，可能是實(shí)驗(yàn)后放置的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致NSE分解。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步表明，標(biāo)本保存溫度、時(shí)間可能是NSE穩(wěn)定性的重要影響因素，這就要求實(shí)驗(yàn)者的盡量縮短采集時(shí)間，并在采集結(jié)束后盡快于－20℃保存。

3 中藥腦脊液藥理學(xué)的總結(jié)和展望

中藥腦脊液藥理學(xué)是近年應(yīng)用于中樞神經(jīng)疾病與治療藥物研究的熱點(diǎn)，其模擬了中藥經(jīng)過(guò)加工、給藥、吸收、代謝后在腦部的分布情況，為中藥及其成方制劑研究提供了良好的離體實(shí)驗(yàn)方法，有利于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的保護(hù)作用、作用機(jī)制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。隨著方法學(xué)的進(jìn)一步完善，其必將適用于更加廣泛的研究領(lǐng)域中。

［1］趙 超，李會(huì)軍，陳 君，等.中藥復(fù)雜成分解析與質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，43(3):283 －288.

［2］Htioko I，Sekae A，Yukio O.Effect of shosaikoto，a Japanese and Chinese herbalmedicinal mixture on the mitogenic activity of lipopo2 lysaocharide，a new pharmacological testing method ［J］.J Ethno2 Hpermacol，1987，21:452531.

［3］黃臣虎，陸 茵，高驍君，等.中藥血清藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(10):266 －271.

［4］王喜軍，張 寧.六味地黃丸的血清藥物化學(xué)研究［J］.中國(guó)天然藥物，2004，2(4):219 －222.

［5］廖華寧，汪 寧，王 艷.緊密連接蛋白與血腦屏障［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(3):377 －379.

［6］張春麗，孟 強(qiáng).缺血性腦血管病血腦屏障研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2013，19(11):1935 －1937.

［7］胡海燕，席東澤，雷 磊，等.清心開(kāi)竅方含藥腦脊液對(duì)谷氨酸致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38(12):1997－2000.

［8］秦秀德，劉 玉，張玉蓮，等.清腦益智方含藥腦脊液對(duì)缺氧復(fù)氧皮層神經(jīng)元細(xì)胞重塑相關(guān)指標(biāo)的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19(10):174 －177.

［9］李福東，王艷華，張 超，等.開(kāi)心散含藥腦脊液對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40(6):12 －14.

［10］何秀麗，孟 菲，周妍妍，等.地黃飲子含藥腦脊液對(duì)受損PC12細(xì)胞β-淀粉樣前體蛋白mRNA表達(dá)的干預(yù)［J］.中醫(yī)藥信息，2011，28(4):26 －28.

［11］Deeken JF，Loscher W.The blood-brain barrier and cancer:transporters，treatment and Trojan horses［J］.Clin Cancer Res，2007，13(6):1663－1674.

［12］Hawkins BT，Davis TP.The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disese［J］.Pharmacol Rev，2005，57(2):173 －185.

［13］Ballabh P，Braun A，Nedergaar DM，et al.The bloodbrain barrier:an overview:structure，regulation，and clinical implications［J］.Neurobiol Dis，2004，16(1):1 －13.

［14］梅建勛，張伯禮，陸 融.中藥腦脊液藥理學(xué)研究方法的初建:對(duì)中藥影響的星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的觀察［J］.中草藥，2000，31(7):523 －526.

［15］梅建勛，張伯禮.中藥腦脊液保護(hù)神經(jīng)元損傷的離體實(shí)驗(yàn)研究［J］.天津中醫(yī)，2000，17(5):36 －38.

［16］梅建勛，張伯禮.采用腦脊液藥理學(xué)方法對(duì)中藥影響星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用的觀察［J］.中藥材，2000，23(8):467－469.

［17］汪 寧，鄧 奕，朱 荃，等.通竅活血湯含藥所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，31(3):1307－1310.

［18］王 俊.六味地黃丸對(duì)KCl誘導(dǎo)PC12細(xì)胞鈣超載損傷的保護(hù)作用池欣欣［D］.沈陽(yáng):遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

［19］朱未名，胡海燕，陳 翔，等.清心開(kāi)竅方含藥腦脊液對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31(3):466 －469.

［20］胡海燕，崔志慧，陳 翔，等.清心開(kāi)竅方含藥腦脊液對(duì)連二亞硫酸鈉所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，38(9):1314 －1317.

［21］楊麗娜，頭部前低溫對(duì)全腦缺血再灌注損傷大鼠線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔及細(xì)胞凋亡的影響［D］.石家莊:河北醫(yī)科大學(xué)，2014.

［22］楊靜靜，趙啟韜.中藥抑制心血管系統(tǒng)氧化應(yīng)激的活性成分及其機(jī)制［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，15(5):104 －106.

［23］余福林，李紅梅，高 延，等.缺血/再灌注損傷后心肌細(xì)胞線粒體功能及其能量代謝變化［J］.西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(2):113－115.

［24］孫 洲，龔 瑜，孫圣剛，等.鈣超載對(duì) PC12細(xì)胞活性及 p-CREB 表達(dá)的影響［J］.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2011，32(3):384－386.

［25］姚 娟，馬慧萍，楊 燕，等.缺氧環(huán)境對(duì) PC12細(xì)胞損傷及HIF-1 mRNA表達(dá)水平的影響［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2011，27(2):162－166.

［26］劉瑞珍，郭春鈺，曾 靖，等.3’－大豆苷元磺酸鈉對(duì)谷氨酸引起的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，34(2):161－164.

［27］陶美皊.dFGEM對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究［D］.長(zhǎng)沙:湖南師范大學(xué)，2012.

［28］王 佳，高 峰，張春兵，等.川芎嗪對(duì)咖啡因引起的PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33(6):695 －698.

［29］張 明，荔志云，趙紅斌，等.大黃素甲醚對(duì)神經(jīng)細(xì)胞缺氧性損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(2):106－110.

［30］宋明潔，戴雪伶，常 平，等.Zn2+對(duì)αβ1－40誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.生命科學(xué)研究，2013，17(4):331 －336.

［31］葉光華，胡海燕，陳 翔，等.清心開(kāi)竅方含藥腦脊液對(duì)αβ25－35所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)中藥雜志，2012，37(21):3271 －3274.

［32］李福東，王艷華，張 超，等.開(kāi)心散含藥腦脊液對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞的促生長(zhǎng)作用［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40(6):12－14.

［33］張曉艷，胡海燕，陳 翔，等.清心開(kāi)竅方含藥腦脊液對(duì)氯化鉀所致PC12細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2014，5(34):2477－2479.

［34］孫志翠，劉西建，郭 煒，等.酸棗仁湯含藥腦脊液指紋圖譜研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(24):171 －173.

［35］李越峰，蘇云明，李延麗，等.四逆散鎮(zhèn)靜催眠作用的物質(zhì)基礎(chǔ)初步研究［J］.中草藥，2012，43(7):1361 －1365.

［36］汪 寧，常國(guó)潔，晉齊中，等.通竅活血顆粒灌胃家兔后體內(nèi)血清及腦脊液中麝香酮的分析［J］.中藥材，2012，35(8):1291－1294.

［37］謝 寧，孟 菲，姚辛敏，等.地黃飲子含藥腦脊液對(duì)Aβ25 －35誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷即早基因c-fos和c-jun表達(dá)的影響［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18(22):2875 －2877.

［38］謝 寧，姚辛敏，孟 菲，等.地黃飲子含藥腦脊液對(duì)Aβ25－35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷凋亡基因bax bcl-2和caspase-3表達(dá)的影響［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25(9):1770 －1773.

［39］鄒永杰.高壓氧預(yù)適應(yīng)對(duì)小鼠永久性大腦中動(dòng)脈閉塞模型的保護(hù)作用研究［D］.重慶:第三軍醫(yī)大學(xué)，2013.

［40］池欣欣.中藥與骨髓源干細(xì)胞聯(lián)合治療缺血再灌腦損傷大鼠的實(shí)驗(yàn)研究［D］.沈陽(yáng):遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2013.

［41］Ginsberg MD，Busto R.Rodent models of cerebral ischemia［J］.Stroke，1989，20(12):1627－1642.

［42］劉 聰，楊 林，方 芳，等.柴黃顆粒對(duì)內(nèi)毒素致熱新西蘭兔腦脊液中發(fā)熱介質(zhì)的影響［J］.兒科藥學(xué)雜志，2012，18(5):13－16.

［43］張 升，辛艷飛，顧利強(qiáng)，等.Beagle犬腦脊液(CSF)多次采集手術(shù)模型的建立［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2011，28(5):69－71.

［44］馬 鋒，田建英.六味地黃丸含藥腦脊液神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2006，28(3):165 －167.

［45］楊 子，賴關(guān)朝，王國(guó)彬，等.SD大鼠腦脊液采集方法改進(jìn)［J］.中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué)，2011，38(2):117 －119.

［46］馬 偉，馬 鋒，田建英.一種簡(jiǎn)單實(shí)用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中藥腦脊液采集方法［J］.寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29(4):436 －437.

［47］夏吉榮，伯孝華，黃天祿，等.腦脊液保存條件對(duì)神經(jīng)元特異性烯醇化酶測(cè)定結(jié)果的影響分析［J］.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，1996，11(4):34－35.