黃衛(wèi)，陳湘

（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院泌尿外科，湖南 長(zhǎng)沙 410008）

可溶性B7-H4在膀胱癌診斷中的價(jià)值

黃衛(wèi)，陳湘

（中南大學(xué)湘雅醫(yī)院泌尿外科，湖南 長(zhǎng)沙 410008）

目的探討可溶性B7-H4（sB7-H4）在膀胱癌中的診斷價(jià)值。方法應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)夾心法檢測(cè)117例膀胱癌患者與120例正常人血清sB7-H4水平，采用ELISA法檢測(cè)膀胱癌抗原（UBC）和尿液細(xì)胞角蛋白19-片段（CYFRA21-1），利用受試者工作特性曲線（ROC）比較分析sB7-H4作為膀胱癌血清標(biāo)志物的診斷價(jià)值。結(jié)果膀胱癌患者血清sB7-H4水平（48.73±14.69）ng/ml明顯高于正常人（29.52±17.84）ng/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。sB7-H4在膀胱癌診斷中的靈敏性（87.18%）和準(zhǔn)確性（78.48%）均高于尿UBC及CYFRA21-1，特異性（74.17%）低于CYFRA21-1及UBC。結(jié)論sB7-H4在膀胱癌診斷中具有良好的臨床應(yīng)用前景，聯(lián)合檢測(cè)sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可提高膀胱癌的診斷率。

膀胱癌；B7-H4；ELISA；受試者工作特性曲線

膀胱癌大多為移行細(xì)胞癌。其術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，并具有由淺表向深部浸潤(rùn)性發(fā)展的特點(diǎn)。膀胱鏡是對(duì)膀胱癌進(jìn)行診斷和隨訪的主要手段，但因其為侵入性檢查，患者常因畏懼頻繁復(fù)檢而失去早期診斷治療的機(jī)會(huì)。因此，尋找無(wú)創(chuàng)、簡(jiǎn)便的腫瘤標(biāo)志物已成為近年研究的熱點(diǎn)。B7-H4是最新發(fā)現(xiàn)的B7家族成員，它在抗原特異性的免疫反應(yīng)中起到非常重要的調(diào)節(jié)作用[1]。利用免疫組織化學(xué)染色方法，業(yè)已發(fā)現(xiàn)B7-H4在各種腫瘤組織中均有過(guò)度表達(dá)，如結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌等。B7-H4可表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的胞膜上和胞漿內(nèi)，還能以可溶性形式存在于血清中，且有實(shí)驗(yàn)證明了宮頸癌和食管癌患者血清中可溶性B7-H4（soluble B7-H4,sB7-H4）水平的增高[2-3]。本研究用雙抗體ELISA夾心法，定量檢測(cè)膀胱癌患者血清中sB7-H4水平，比較分析sB7-H4與尿膀胱癌抗原（urinary bladder cancer antigen，UBC）、尿液細(xì)胞角蛋白19-片段（cytokeratin19fragment，CYFRA21-1）在靈敏性、特異性及準(zhǔn)確度上的差異，探討sB7-H4在膀胱癌診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2012年1月-2013年12月湘雅醫(yī)院泌尿外科住院117例膀胱癌患者。均經(jīng)臨床診斷和病理診斷確診，年齡32～74歲。正常人120例，均為經(jīng)本院體檢健康的志愿者，年齡22～71歲。

1.2 標(biāo)本留取

所有受試者均于清晨空腹抽靜脈血6 ml，加入試管，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，分離血清，留待測(cè)定sB7-H4，置入-20℃冰箱保存。

1.3 sB7-H4測(cè)定

采用雙抗體夾心ELISA法，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，試劑盒購(gòu)于美國(guó)R&D公司[4]。

1.4 尿UBC和CYFRA21-1檢測(cè)

所有研究對(duì)象在行膀胱鏡或手術(shù)前留取晨尿，1000 g離心15min后，取上清液置入20℃冰箱保存，用作UBC和CYFRA21-1檢測(cè)。UBC采用瑞典生物技術(shù)有限公司試劑盒，ELISA法檢測(cè)，其中單克隆抗體對(duì)細(xì)胞角蛋白18（cytokeratin18，CKl8）有特異性，同時(shí)對(duì)CK8有交叉反應(yīng)。CYFRA21-1采用法國(guó)CIS國(guó)際生物公司試劑盒，放射免疫技術(shù)檢測(cè)，其測(cè)定為通過(guò)識(shí)別2株鼠單克隆抗體BM19-21、KS19-1的雙抗體夾心法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌患者和正常人血清sB7-H4、尿液UBC和CYFRA21-1水平

與正常人比較，膀胱癌患者血清中sB7-H4水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0l）（見(jiàn)表1）。該結(jié)果提示，sB7-H4在膀胱癌早期診斷中具有潛在應(yīng)用的價(jià)值。

表1 膀胱癌患者和正常人3種血清標(biāo)記物水平比較

2.2 sB7-H4與UBC、CYFRA21-1相關(guān)性分析

將117例膀胱癌患者血清sB7-H4水平分別與UBC、CAl5-3水平進(jìn)行單因素直線相關(guān)分析，結(jié)果顯示，sB7-H4與UBC、CYFRA21-1均呈正相關(guān)（r分別為0.521和0.531，P＜0.0l）。

2.3 膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1曲線下面積比較

利用受試者工作特性曲線（ROC）測(cè)得sB7-H4對(duì)應(yīng)產(chǎn)生的曲線下面積（AUC）為0.837（95%可信區(qū)間為0.764～0.928），大于UBC的0.713（95%可信區(qū)間為0.645～0.824）和CYFRA21-1的0.782（95%可信區(qū)間為0.739～0.892）（見(jiàn)附圖）。

附圖 早期膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1曲線下面積比較

表2 sB7-H4、UBC、CYFRA21-1診斷效率比較%

2.4 膀胱癌患者血清sB7-H4、UBC、CYFRA21-1診斷效率比較

通過(guò)ROC曲線分析，sB7-H4的最佳診斷值為35.32 ng/ml，它在膀胱癌診斷中的靈敏性（87.18%）和準(zhǔn)確性（78.48%）均高于UBC及CYFRA21-1，特異性（74.17%）低于UBC及CYFRA21-1，UBC和CYFRA21-1單項(xiàng)檢測(cè)時(shí)的陽(yáng)性率都比較低，而聯(lián)合檢測(cè)sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可將膀胱癌的診斷率提高至92%。見(jiàn)表2。

3 討論

由于膀胱癌的早期癥狀以血尿?yàn)橹?，但引起血尿的病因有很多，如泌尿系統(tǒng)感染、結(jié)石等，往往容易漏診。尿細(xì)胞學(xué)檢查可作為血尿的初步篩查，但其檢出率較低，不易于鑒別出分化良好的腫瘤細(xì)胞，亦可導(dǎo)致漏診。雖然膀胱鏡檢查可作為檢測(cè)膀胱癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但費(fèi)用高，且檢查過(guò)程往往引起患者不適，不適合作為篩查使用。所以臨床上急切需要尋找敏感性高、特異性好的膀胱癌腫瘤標(biāo)志物。目前已知血清或尿液中的某些腫瘤標(biāo)志物，如CYFRA21-1、UBC等在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性膀胱癌的診斷以及療效監(jiān)測(cè)方面具有一定應(yīng)用價(jià)值[7]。但是否也能用于膀胱癌的早期診斷或篩查目前尚不明確。

目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)B7-H4與腫瘤關(guān)系的研究越來(lái)越多，已證實(shí)大多數(shù)腫瘤組織均高表達(dá)B7-H4，如前列腺癌、子宮內(nèi)膜癌、胰腺癌等等[6-8]，幾乎涵蓋腫瘤的各個(gè)領(lǐng)域。眾多研究表明，B7-H4在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有重要作用，可為腫瘤的診斷和治療提供一種新的靶位點(diǎn)，具有良好的臨床應(yīng)用前景。然而，目前對(duì)B7-H4的研究大多采用Western blot和免疫組織化學(xué)染色的方法，其操作繁鎖，只能定性研究B7-H4在腫瘤組織中表達(dá)情況，很難比較手術(shù)前后患者B7-H4含量的變化。本研究采用ELISA法定量檢測(cè)117例膀胱癌患者血清中sB7-H4水平，同時(shí)與膀胱癌常用的輔助診斷指標(biāo)UBC、CYFRA21-1進(jìn)行比較，分析3者在靈敏性、特異性及準(zhǔn)確性上的差異，以探討sB7-H4在膀胱癌診斷中的價(jià)值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膀胱癌患者血清sB7-H4水平明顯高于正常人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。直線相關(guān)分析顯示，sB7-H4與UBC、CYFRA21-1均呈正相關(guān)，提示sB7-H4初步具備膀胱癌血清標(biāo)志物的潛質(zhì)。利用受試者工作特性曲線（ROC）測(cè)得sB7-H4對(duì)應(yīng)產(chǎn)生的曲線下面積（AUC）為0.868，大于UBC的0.745和CA125的0.796。該結(jié)果說(shuō)明雖然3者在膀胱癌的診斷中均有一定的準(zhǔn)確性，但sB7-H4的準(zhǔn)確性要稍高于CA125和UBC。sB7-H4的靈敏性、準(zhǔn)確性分別為87.18%和78.48%，明顯高于UBC和CYFRA21-1，而特異性僅為74.17%，低于UBC的85.83%和CYFRA21-1的92.5%，提示sB7-H4可能是一個(gè)廣譜的腫瘤標(biāo)志物。盡管3種血清標(biāo)志物均具有一定的診斷價(jià)值，但sB7-H4的診斷效率要高于UBC和CYFRA21-1。UBC和CYFRA21-1單項(xiàng)檢測(cè)時(shí)的陽(yáng)性率都比較低，而聯(lián)合檢測(cè)sB7-H4、UBC和CYFRA21-1可將膀胱癌的診斷率提高至94.87%。因?yàn)槟[瘤的發(fā)生是多基因、多步驟改變的結(jié)果，也是多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的調(diào)控過(guò)程，聯(lián)合檢測(cè)正成為該領(lǐng)域一個(gè)重要的探索方向，能彌補(bǔ)單項(xiàng)檢測(cè)的不足，可明顯提高膀胱癌的診斷率。

綜上所述，本研究表明sB7-H4在膀胱癌診斷中具有良好的臨床應(yīng)用前景，但尚需做以下的基礎(chǔ)研究進(jìn)一步證實(shí)：①目前對(duì)于B7-H4的受體及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑尚未明確，尚不清楚sB7-H4來(lái)源于何處，以及sB7-H4能在多大程度上代表體內(nèi)總的B7-H4含量；②對(duì)B7-H4分子表達(dá)的調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步明確。

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（張蕾 編輯）

Diagnostic value of soluble B7-H4 in bladder cancer

Wei HUANG,Xiang CHEN
(Department of Urology,Xiangya Hospital,Central South University, Changsha,Hunan 410008,P.R.China)

【Objective】To discuss the diagnostic value of soluble B7-H4(sB7-H4)in bladder cancer.【Methods】Using sandwich ELISA method,the serum level of soluble B7-H4 was detected in 117 cases of bladder cancer patients and 120 cases of normal people.ELISA method was used to determine the urine levels of urinary bladder cancer antigen(UBC)and cytokeratin 19 fragment(CYFRA21-1),then the diagnosis value of sB7-H4 in bladder cancer was analyzed with ROC(receiver operating characteristic)curve.【Results】The serum level of soluble B7-H4 in the bladder cancer patients[(48.73±14.69)ng/ml]was significantly higher than that in the normal people[(29.52±17.84)ng/ml],there was a significant difference between them (P＜0.01).The sensitivity(87.18%)and accuracy(78.48%)of sB7-H4 in bladder cancer were higher than those of UBC and CYFRA21-1,but the specificity(74.17%)was lower than that of UBC and CYFRA21-1.【Conclusions】Soluble B7-H4 has good prospects in clinical application in diagnosing bladder cancer.Detection of serum level of sB7-H4 together with UBC and CYFRA21-1 can raise the positive diagnostic rate of bladder cancer.

bladder cancer；B7-H4；ELISA；receiver operating characteristic(ROC)curve

R737.14

B

1005-8982（2015）30-0065-03

2015-04-08