勾曉丹 姜麗華 張瑩瑩 趙明杰

1.遼寧省朝陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所，遼寧 朝陽(yáng) 1220002.遼寧省朝陽(yáng)市食品藥品監(jiān)督執(zhí)法支隊(duì)，遼寧 朝陽(yáng) 122000

參芪健胃顆粒收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十冊(cè)，由黨參、當(dāng)歸、黃芪等十四味藥材加工制成。具有溫中健脾、理氣和胃之功效。主治脾胃虛寒型的慢性萎縮性胃炎、適用于胃脘脹痛、痞悶不適、喜氣喜按、噯氣呃逆等癥。原標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀、鑒別和檢查項(xiàng)，無(wú)其他檢定方法。為控制參芪健胃顆粒的質(zhì)量，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)，采用高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)法對(duì)處方中當(dāng)歸的有效成分阿魏酸的含量進(jìn)行了測(cè)定，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果較為滿意，為參芪健胃顆粒定量指標(biāo)提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 島津LC-2010A 型高效液相色譜儀(包括LC-2010 型紫外檢測(cè)器;LC Solution 色譜工作站);CPA225D 型電子天平(十萬(wàn)分之一);BSA224-CW 型電子天平(萬(wàn)分之一)。

1.2 試劑與試藥 乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水;阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110773-201313);參芪健胃顆粒(河南輔仁堂制藥有限公司，批號(hào):201311421、201403232、201411111)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱CAPCELL PAK C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈-0.085%磷酸(17∶83);柱溫:35℃，體積流量:1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)316 nm;對(duì)照液和供試品液進(jìn)樣量均為10 μl。理論板數(shù):按阿魏酸計(jì)算理論板數(shù)不低于5000;分離度大于1.5，外標(biāo)法計(jì)算含量。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取對(duì)照品12mg，置100ml 量瓶，加入70%甲醇適量使溶解，標(biāo)定至刻度，搖勻。精取5ml 置50ml 量瓶，70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取裝量差異下供試品適量，研細(xì)，精密稱定1.8g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)0.45μm 濾膜濾過(guò)，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照液 按照處方制法制備缺少當(dāng)歸的模擬樣品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 陰性干擾實(shí)驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下3 種溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照液色譜圖中在阿魏酸峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間附近未檢出干擾峰(圖1)。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液1、5、10、15、20μl 注入液相色譜儀，測(cè)定，以濃度(X)為橫坐標(biāo)，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=62811255.05X-7641.88 (r=0.9999)。結(jié)果表明，阿魏酸在0.01354～0.2708μg 范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，按峰面積計(jì)算，結(jié)果RSD=0.2%，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6 份，分別依法處理，測(cè)定結(jié)果RSD=0.5%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，室溫放置，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h 進(jìn)樣，測(cè)得峰面積值RSD=0.8%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取己知含量的樣品(批號(hào):201411111，阿魏酸含量為0.0079 mg/g)6 份，每份1.8g，精密加入阿魏酸對(duì)照品溶液(0.0120mg/ml)1ml，按供試品溶液方法制備，依法測(cè)定含量并計(jì)算回收率(表1)。

表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.4 樣品含量的測(cè)定 取3 批樣品，按供試品溶液方法制備，分別進(jìn)樣10μl，依法測(cè)定，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中阿魏酸的含量(表2)。

表2 樣品中阿魏酸的測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)中，阿魏酸在316nm 處有最大吸收，因此選用316nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，按照參考文獻(xiàn)，用乙腈-0.085%磷酸，阿魏酸色譜峰基本達(dá)到了基線分離，其他組分無(wú)干擾，且穩(wěn)定性良好。經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，最終建立了適合本品的流動(dòng)相比例為乙腈-0.085%磷酸(17∶83)。

綜合考慮提取分離中藥有效成分常用方法的優(yōu)缺點(diǎn)，本方法以70%甲醇為溶劑，由于溶劑浸提法費(fèi)時(shí)，效率一般，故采用加熱回流提取法作為參芪健胃顆粒中阿魏酸的提取方法。

參芪健胃顆粒具有溫中健脾、理氣和胃之功效，用途廣泛，但原有標(biāo)準(zhǔn)過(guò)于簡(jiǎn)單。本文闡述的含量測(cè)定方法專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、陰性對(duì)照無(wú)干擾、方法可靠，使參芪健胃顆粒原有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到充實(shí)、完善，更能準(zhǔn)確、有效控制參芪健胃顆粒的質(zhì)量。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:124-125.

［2］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥方成制劑第十冊(cè)［S］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1995:103.

［3］邱穎.RP-HPLC 法測(cè)定丹燈通腦軟膠囊中葛根素和阿魏酸的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17 (2):212-213.

［4］黃羅，郭健新，劉詠梅，等.HPLC 測(cè)定阿魏酸的含量探討［J］.中成藥，2004，26 (2):134-136.

［5］夏明，董曉燁.當(dāng)歸養(yǎng)榮丸中阿魏酸的含量測(cè)定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29 (1):103-104.