李紅林，鄭云會，陸衛(wèi)平，楊士軍，劉艷秋，高美華

（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇 淮安 223300；2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，山東 青島 266071）

干擾素-γ、白介素-6、白介素-17及轉(zhuǎn)化生長因子-β1在橋本甲狀腺炎患者血清中的表達(dá)

李紅林1，鄭云會1，陸衛(wèi)平1，楊士軍1，劉艷秋1，高美華2

（1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇 淮安 223300；2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，山東 青島 266071）

目的探討干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-6（IL-6）、白介素-17（IL-17）及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）4種細(xì)胞因子水平與橋本甲狀腺炎（HT）的相關(guān)性。方法用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測20例HT患者（HT組）和20例健康體檢者（對照組）的IFN-γ、IL-6、IL-17和TGF-β1濃度，用電化學(xué)發(fā)光法檢測游離三碘甲腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）、促甲狀腺激素（TSH）和甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）水平。結(jié)果HT組IFN-γ、IL-6及IL-17濃度顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；TGF-β1濃度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組IL-6、IFN-γ、IL-17與TPOAb呈正相關(guān)（r=0.3602、0.3391和0.5165，P＜0.05）；IL-6與FT3、IL-17與FT4呈負(fù)相關(guān)（r=-0.3582和-0.4295，P＜0.05）；IL-17與TSH呈正相關(guān)（r=0.3976，P＜0.05）。結(jié)論IFN-γ、IL-6及IL-17 3種炎癥細(xì)胞因子在HT患者血清中高表達(dá)，可能共同參與HT的免疫紊亂過程。

橋本甲狀腺炎；細(xì)胞因子；白介素-17；轉(zhuǎn)化生化因子β1

橋本甲狀腺炎（Hashimoto’s thyroiditis，HT）又稱為慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎，1912年由日本學(xué)者Hashimoto首先報(bào)道。隨著社會節(jié)奏加快、環(huán)境壓力增加，HT成為臨床常見的器官特異性自身免疫性疾病。HT可誘發(fā)甲狀腺腫大或結(jié)節(jié)，增加甲狀腺腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[1]。HT好發(fā)于育齡期女性，導(dǎo)致多種不良妊娠結(jié)局[2]，嚴(yán)重威脅人類的健康。目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。近年來，中外學(xué)者認(rèn)為輔助性T細(xì)胞1（helper T cells 1，Th1）、Th17等淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子水平變化引起的免疫功能紊亂與HT的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但相關(guān)研究結(jié)果不一致，細(xì)胞因子與HT患者甲狀腺激素的相關(guān)性，更是少有報(bào)道[3-4]。本實(shí)驗(yàn)就HT患者外周血中干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白介素-17（Interleukin-17，IL-17）及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）4種細(xì)胞因子水平及其與甲狀腺功能指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行研究，以探討其在HT中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1研究對象

選取2013年10月-2014年6月在江蘇省淮安市第一人民醫(yī)院初次診斷為HT且未治療的患者（HT組）20例。其中，男性3例，女性17例；年齡（45.3±13.12）歲。所有入選患者符合以下診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：①有甲狀腺功能減退的臨床癥狀和體征；②可觸及彌漫性甲狀腺腫大，質(zhì)地較韌，伴峽部錐體葉腫大：③患者血清甲狀腺過氧化物酶抗體（thyroid peroxidase antibody，TPOAb）、促甲狀腺激素（thyrotropin，thyroid stimulating hormone，TSH）濃度升高，游離三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine，F(xiàn)T3）、游離甲狀腺素（free thyroxine，F(xiàn)T4）水平減低；④甲狀腺B超回聲不均，伴發(fā)多發(fā)性低回聲灶或甲狀腺結(jié)節(jié)。另選取同期健康體檢者20例作為對照組。男性6例，女性14例；年齡（42.8±17.7）歲。對照組無甲狀腺疾病史，甲狀腺功能正常，自身抗體檢測結(jié)果為陰性。所有研究對象排除妊娠、感染、腫瘤、過敏性疾病及其他自身免疫性疾病、未使用免疫抑制劑。

1.2標(biāo)本采集

抽取早晨空腹靜脈血5 ml，2 500 r/min離心10 min，立即檢測甲狀腺激素和自身抗體，其余血清分裝于離心管中，密封置于-20℃冰箱保存，以備成批檢測細(xì)胞因子。

1.3主要儀器及試劑

酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測IFN-γ、IL-6、IL-17及TGF-β1濃度，試劑盒由美國Rapidbio公司提供，儀器采用北京普朗公司的DNM-9602型酶標(biāo)儀；用電化學(xué)發(fā)光法檢測FT3、FT4、TSH及TPOAb水平，儀器采用瑞士Roche公司生產(chǎn)的E170模塊型電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑為專用配套試劑。所有操作嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較用成組資料t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，用χ2檢驗(yàn)，各指標(biāo)間相關(guān)性用Pearson相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1性別、年齡及甲狀腺功能比較

兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)學(xué)意義（P＞0.05）。HT組患者FT3、FT4水平明顯降低（P＜0.05），TSH、TPOAb水平明顯升高（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組患者性別、年齡及甲狀腺功能比較（n=20±s）

表1 兩組患者性別、年齡及甲狀腺功能比較（n=20±s）

組別男/女/例年齡/歲FT3/（pmol/L）FT4/（pmol/L）TSH/（mIU/L）TPOAb/（IU/L）對照組6/1442.8±17.74.45±0.3411.94±1.991.67±0.530.91±1.27 HT組3/1745.3±13.13.78±0.798.96±3.6425.56±29.23546.29±369.48 t/χ2值0.5740.5083.4843.2123.6546.601 P值0.4490.6150.0010.0030.0010.000

2.2細(xì)胞因子水平比較

HT組患者IFN-γ、IL-6及IL-17濃度顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組TGF-β1水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

2.3相關(guān)性分析

兩組患者IL-6、IFN-γ、IL-17與TPOAb呈正相關(guān)（P＜0.05）；IL-6與FT3、IL-17與FT4呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；IL-17與TSH呈正相關(guān)（P＜0.05）；TGF-β1與甲狀腺功能指標(biāo)無相關(guān)性（P＞0.05）。見表3。

表2 兩組患者細(xì)胞因子水平比較（n=20±s）

表2 兩組患者細(xì)胞因子水平比較（n=20±s）

組別IFN-γ/（ng/L）IL-17/（pg/ml）IL-6/（ng/L）TGF-β1/（ng/L）對照組250.65±67.61594.84±169.9649.66±13.16478.26±152.56 HT組305.12±46.17771.75±142.1862.47±11.34521.14±117.84 t值2.9753.5703.2980.995 P值0.0050.0010.0020.326

表3 甲狀腺功能與4種細(xì)胞因子的相關(guān)性

3 討論

HT以患者甲狀腺出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤和組織結(jié)構(gòu)破壞、功能低下、血清中出現(xiàn)高滴度的TPOAb和甲狀腺球蛋白抗體為主要特征。其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但有文獻(xiàn)報(bào)道個(gè)體內(nèi)的甲狀腺細(xì)胞凋亡[6]、Treg/Th17細(xì)胞軸異常[7]因素在HT的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γ，以及與Th17細(xì)胞分化成熟過程密切相關(guān)的IL-6、TGF-β1和IL-17在HT發(fā)病過程中的作用，也逐漸引起學(xué)者們的關(guān)注。

IFN-γ主要由Th1細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞產(chǎn)生，能直接調(diào)節(jié)靶細(xì)胞對凋亡的易感性，參與細(xì)胞凋亡信號的傳導(dǎo)，誘導(dǎo)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的Fas、腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體以及細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子群Caspase的表達(dá)上調(diào)，活化DNA酶，降解染色體，促使甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡，導(dǎo)致甲狀腺組織破壞[6]。

IL-17既是Th17細(xì)胞產(chǎn)生的特征性細(xì)胞因子，也是Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)分子[8]，具有強(qiáng)烈的促炎作用。IL-17能刺激人成纖維細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子-1[9]，募集中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在甲狀腺組織中浸潤，并誘導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、前列腺素E2等多種促炎癥細(xì)胞因子[10]，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和甲狀腺組織的免疫損傷，促進(jìn)自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生、發(fā)展。

IL-6主要由Th2細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞合成，可促進(jìn)B細(xì)胞增殖、分化和分泌抗體，激活自身反應(yīng)性T細(xì)胞，引發(fā)甲狀腺上皮細(xì)胞內(nèi)的體液免疫功能紊亂。TGF-β是一種多肽類活性物質(zhì)，因其能夠促進(jìn)成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化生長而得名，共有6種亞家族成員，其中TGF-β1主要由Th3細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生，具有干預(yù)Na?ve T細(xì)胞分化，抑制巨噬細(xì)胞激活，下調(diào)機(jī)體免疫應(yīng)答的功能。在IL-6的協(xié)同作用下，TGF-β1能啟動Th17效應(yīng)細(xì)胞的分化，增強(qiáng)致炎癥細(xì)胞因子IL-17的表達(dá)，介導(dǎo)甲狀腺組織炎癥反應(yīng)的發(fā)生[11]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HT患者血清中炎癥細(xì)胞因子IFN-γ、IL-6、IL-17水平顯著高于對照組，且兩組患者的IL-6、IFN-γ、IL-17與TPOAb呈正相關(guān)；IL-6與FT3、IL-17與FT4呈負(fù)相關(guān)；IL-17與TSH呈正相關(guān)。該結(jié)果與筆者之前所報(bào)道的彌漫性毒性甲狀腺腫（graves disease，GD）患者血清中的相應(yīng)細(xì)胞因子表達(dá)模式類似[12]，提示上述3種細(xì)胞因子參與甲狀腺的免疫紊亂過程，共同促進(jìn)自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生。HT組調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子TGF-β1水平略高于對照組，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且TGF-β1與甲狀腺功能指標(biāo)無相關(guān)性。與薛海波等[7]的報(bào)道相似，但明顯不同于MANOLOVA等[13]的研究結(jié)果，可能是由于研究對象種族不同、病程差異的原因引起，有待更多的研究證實(shí)。

綜上所述，HT患者血清中炎癥細(xì)胞因子IFN-γ、IL-6及IL-17高表達(dá)，且與甲狀腺激素、TPOAb有一定的相關(guān)性。調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子TGF-β1高表達(dá)不明顯，提示其在HT的發(fā)病過程發(fā)揮不同作用，而與HT的病情輕重程度有關(guān)。

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（童穎丹 編輯）

Expression of IFN-γ,IL-6,IL-17 and TGF-β1in serum of patients with Hashimoto's thyroiditis

Hong－lin LI1,Yun－h(huán)ui ZHENG1,Wei－ping LU1,Shi－jun YANG1, Yan－qiu LIU1,Mei－h(huán)ua GAO2
(1.The First Huai'an Hospital,Nanjing Medical University,Huai'an,Jiangsu 223300, P.R.China;2.Department of Immunology,Medical College,Qingdao University, Qingdao,Shandong 266071,P.R.China)

Abastract:【Objective】To explore the role of cytokines in the pathogenesis of Hashimoto's thyroiditis (HT)by detecting the levels of IFN－γ,IL－6,IL－17 and TGF－β1in HT patients.【Methods】A total of 20 patients with HT and 20 gender－and age－matched normal controls were examined.The levels of serum IFN－γ,IL－6,IL－17 and TGF－β1were measured by ELISA.FT3,FT4,TSH and TPOAb levels were determined by ECLIA.【Results】The levels of serum IFN－γ,IL－6 and IL－17 in the HT group were significantly higher than those in the controls group(P＜0.05).There were no significant difference in TGF－β1between the HT and control groups(P＞0.05).Correlation analysis revealed that IFN－γ,IL－6 and IL－17 were positively correlated with TPOAb(r=0.3602,0.3391 and 0.5165,P＜0.05),IL－6 was negative correlated with FT3(r=－0.3582,P＜0.05),IL－17 was negative correlated with FT4(r=－0.4295,P＜0.05),and a positive correlation was found between IL－17 and TSH(r=0.3976,P＜0.05).【Conclusion】IFN－γ,IL－6 and IL－17 are highly expressed in the peripheral blood of the patients with HT,which play important roles in the pathogenesis of HT with humoral immune disorder.

Hashimoto's thyroiditis;cytokine;interleukin 17;transforming growth factor－β1

R392.6

B

1005-8982（2015）32-0089-04

2015-07-20

高美華，E-mail：meihuagao66@163.com