楊敏馨，寇 濤，張莉莉，何進田，李 博，王 恬

（南京農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，江蘇 南京 210095）

高劑量二甲基甘氨酸鈉對肉雞生產(chǎn)性能、血常規(guī)和血液生理生化指標的影響

楊敏馨，寇 濤，張莉莉，何進田，李 博，王 恬*

（南京農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，江蘇 南京 210095）

研究日糧中添加高劑量食品添加劑二甲基甘氨酸鈉對肉雞生產(chǎn)性能、血常規(guī)和血液生理生化指標的影響。實驗選擇1 日齡愛拔益加（Arbor Acres，AA）肉雞480 只，隨機分為4 個處理組，每組6 個重復，每個重復20 只肉雞，實驗期分為1～21 d（前期）和22～42 d（后期）。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，實驗組為在基礎(chǔ)日糧中分別添加1 500、7 500、15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉。結(jié)果表明：1）日糧中添加1 500 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉顯著降低了肉雞前期耗料與體質(zhì)量增加量比（P＜0.05）；實驗后期，15 000 mg/kg組肉雞的耗料與體質(zhì)量增加量比顯著高于1 500 mg/kg組和7 500 mg/kg組（P＜0.05）。從全期來看，7 500 mg/kg組和15 000 mg/kg組肉雞的平均體質(zhì)量日增加量與對照組相比差異均不顯著（P＞0.05）。2）不同添加劑量的二甲基甘氨酸鈉對21 日齡和42 日齡肉雞的血常規(guī)指標較對照組均沒有顯著差異（P＞0.05）。3）前期15 000 mg/kg組肉雞的總蛋白含量和白蛋白含量顯著低于對照組（P＜0.05）。后期15 000 mg/kg組肉雞血液中的總膽紅素極顯著高于對照組、1 500 mg/kg組和7 500 mg/kg組（P＜0.01）。綜上所述，15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉可對肉雞的消化吸收和肝功能造成一定的損傷，應(yīng)用時應(yīng)嚴格按規(guī)定控制用量。

二甲基甘氨酸鈉；肉雞；生產(chǎn)性能；血常規(guī)；血液生理生化水平

二甲基甘氨酸是一種氨基酸的衍生物，其在機體內(nèi)是膽堿向甘氨酸代謝的中間產(chǎn)物。作為一種食品添加劑，二甲基甘氨酸具有提高機體免疫力及抗氧化能力等生理生化作用[1-3]。研究表明在肉雞日糧中添加1 500 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉能有效促進肉雞胰腺的發(fā)育，改善屠宰性能和肉品質(zhì)，并可顯著提高血液及肝臟中的總抗氧化能力[4-5]。而又有研究發(fā)現(xiàn)，人和動物體若攝入二甲基甘氨酸代謝產(chǎn)物甘氨酸的量過多，不僅不能被機體吸收利用，還會打破機體對氨基酸的吸收平衡而影響其他氨基酸的吸收，導致營養(yǎng)失衡而影響生長[6-7]。Meduski等[8]報道給小鼠飼喂二甲基甘氨酸，其LD50（半數(shù)致死量）達到7 400 mg/kg。由于肉雞對于外界的不良因素反應(yīng)更加敏感，本實驗選用愛拔益加（Arbor Acres，AA）肉雞為研究模型，對二甲基甘氨酸鈉在肉雞上的耐受劑量進行評價，為二甲基甘氨酸鈉作為食品添加劑在食品科學領(lǐng)域的應(yīng)用提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗用添加劑為二甲基甘氨酸鈉鹽（C4H10NNaO2），由齊魯晟華制藥有限公司提供。有效成分為二甲基甘氨酸，純度為99.0%。

1.2 方法

1.2.1 動物實驗設(shè)計

采用隨機單因子實驗進行設(shè)計，選擇體質(zhì)量相近、1 日齡的AA肉雞480 只，隨機分為4 個處理組，即對照組、有效劑量組、兩個多倍劑量組，多倍劑量組的劑量分別選用有效劑量的5 倍和10 倍，每組6 個重復，每個重復20 只肉雞，雌雄各半，實驗期分為1～21 d（前期）和22～42 d（后期）。實驗在同一雞舍同一飼養(yǎng)管理條件下進行。

1.2.2 日糧設(shè)計

基礎(chǔ)日糧以玉米-豆粕為主，實驗日糧配制參照NRC1994《家禽的營養(yǎng)需要量》，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。各實驗組分別為：CON組為對照組，T1組、T2組及T3組分別為在基礎(chǔ)日糧中添加1 500、7 500、15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉的實驗組。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of diets %

1.2.3 飼養(yǎng)管理

實驗前對雛舍及器具進行消毒，實驗雞采用籠養(yǎng)方式。實驗期內(nèi)肉雞自由飲水和采食，每天沖刷洗引水管1 次，日喂料2 次。定期清理糞便，持續(xù)光照。飼養(yǎng)期間1 周2 次帶雞消毒，并進行一次雞舍外的環(huán)境消毒；肉雞的免疫程序按常規(guī)進行。

1.2.4 樣品采集與制備

分別于第21、42天08：00開始采樣，以重復為單位，每組每重復選取1 只平均體質(zhì)量接近的肉雞，雌雄各半，稱質(zhì)量后頸靜脈放血屠宰，采集血樣待測。

1.2.5 指標測定及方法

1.2.5.1 生產(chǎn)性能測定

1 日齡實驗肉雞體質(zhì)量于進雞欄當日以重復為單位稱量，于21、42 d早晨稱質(zhì)量（此前停飼12 h，自由飲水）。每天記錄肉仔雞的采食量，以重復為單位分別計算平均日采食量（average daily feed intake，ADFI）、平均體質(zhì)量日增加量（average daily gain，ADG）和耗料與體質(zhì)量增加量比（F/G）。

1.2.5.2 血常規(guī)指標測定

在實驗期的21 d和42 d時，每個重復隨機選取實驗肉雞1 只，靜脈采集全血1 mL，迅速注入乙二胺四乙酸二鈉（ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt，EDTA-2Na）抗凝管，混勻后，將抗凝血樣品送至南京市軍區(qū)總醫(yī)院，使用全自動血細胞分析儀對血液常規(guī)指標進行分析，主要包括白細胞計數(shù)（white blood cell count，WBC）、紅細胞計數(shù)（red blood cell count，RBC）、血紅蛋白濃度（hemoglobin，HGB）、紅細胞壓積（red blood cell specific volume，HCT）、血小板計數(shù)（blood platelet，PLT）。

1.2.5.3 血液生理生化指標測定

在實驗期的21 d和42 d時，每個重復隨機選取1 只肉雞進行靜脈采血，4 ℃、3 000 r/min離心15 min制備血清，使用上?？迫A生物提供的試劑盒，經(jīng)VITALAB Selectra E全自動生化分析儀測定，包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶（aspartate transaminase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、總蛋白（total protein，TPRO）、白蛋白（albumin，ALB）、尿素氮（urea nitrogen，UN）、肌酐（creatinine，CRE）、血糖（glucose，GLU）、總膽紅素（total bilirubin，TBILI）含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

實驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010進行初步整理，用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用單因素方差分析（one-way analysis of variance）進行差異顯著性檢驗，并采用鄧肯氏（Duncan’s）法進行多重比較。結(jié)果以±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對AA肉雞生產(chǎn)性能的影響

表2 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對AA肉雞生產(chǎn)性能的影響Table 2 Effect of different dose levels of dietary supplementation with Na-DMG on growth performance of AA broilers

由表2可知，就前期來看，1 500 mg/kg組肉雞的平均體質(zhì)量日增加量和平均日采食量與CON組相比均有提高的趨勢，但F/G比對照組降低4.0%（P＜0.05）；7 500 mg/kg組和15 000 mg/kg組肉雞的平均體質(zhì)量日增加量、平均日采食量及F/G較對照組無顯著差異（P＞0.05）。

后期7 500 mg/kg組和15 000 mg/kg組肉雞的平均體質(zhì)量日增加量顯著低于1 500 mg/kg組（P＜0.05），分別降低了9.72%和10.36%，但與CON組相比差異不顯著（P＞0.05）；就F/G而言，處理組與CON組相比差異均不顯著（P＞0.05），其中15 000 mg/kg組肉雞的F/G顯著高于1 500 mg/kg組和7 500 mg/kg組（P＜0.05）。

從全期來看，7 500 mg/kg組和15 000 mg/kg組肉雞的平均體質(zhì)量日增加量極顯著低于1 500 mg/kg組（P＜0.0 1），但與C O N組相比差異均不顯著（P＞0.05），1 500 mg/kg組肉雞的平均體質(zhì)量日增加量顯著高于CON組（P＜0.05）；1 500、7 500、15 000 mg/kg組肉雞的平均日采食量較C O N組并無顯著差異（P＞0.05）。與CON組相比，1 500 mg/kg組肉雞的F/G顯著降低3.22%（P＜0.05），而15 000 mg/kg組肉雞的F/G較CON組差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對AA肉雞血常規(guī)指標的影響

表3 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對AA肉雞血液常規(guī)指標的影響Table 3 Effect of different dose levels of dietary supplementation with Na-DMG on hematological parameters of AA broilers

由表3可知，與CON組相比，不同添加劑量的二甲基甘氨酸鈉對肉雞前期和后期血液中的紅細胞數(shù)量、白細胞數(shù)量、血紅蛋白含量、紅細胞壓積及其血小板數(shù)量的影響差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對AA肉雞血液生理生化指標的影響

由表4可知，21 日齡肉雞二甲基甘氨酸鈉組的尿素氮、肌酐、血糖、總膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及堿性磷酸酶含量與CON組相比差異均不顯著（P＞0.05）。15 000 mg/kg組肉雞的總蛋白含量和白蛋白含量顯著低于CON組（P＜0.05），而1 500 mg/kg組和7 500 mg/kg組肉雞的總蛋白和白蛋白含量與CON組相比并無顯著差異（P＞0.05）。

表4 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對21 日齡AA肉雞血液生理生化指標的影響Table 4 Effect of different dose levels of dietary supplementation with Na-DMG on blood biochemical indices of 21-day-old AA broilers

表5 不同添加劑量二甲基甘氨酸鈉對42 日齡AA肉雞血液生理生化指標的影響Table 5 Effect of different dose levels of dietary supplementation with Na-DMG on blood biochemical indices of 42-day-old AA broilers

由表5可知，與CON組相比，42 日齡肉雞二甲基甘氨酸鈉組的尿素氮、肌酐、血糖、總蛋白、白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及堿性磷酸酶含量均無顯著差異（P＞0.05）。1 500 mg/kg組和7 500 mg/kg組肉雞的總膽紅素含量較CON組差異不顯著（P＞0.05），但15 000 mg/kg組肉雞的總膽紅素含量極顯著高于CON組、1 500 mg/kg組和7 500 mg/kg組（P＜0.01）。

3 討 論

二甲基甘氨酸是一種氨基酸的衍生物，其在機體內(nèi)是膽堿向甘氨酸代謝的中間產(chǎn)物，能作為甲基的供體而發(fā)揮作用，有研究報道，二甲基甘氨酸能提高運動員和賽馬的運動機能[9]。Kalmar等[10]研究發(fā)現(xiàn)在家禽日糧中添加二甲基甘氨酸鈉能提高肉雞的生產(chǎn)性能。已有臨床實驗證明人和新西蘭白兔口服二甲基甘氨酸并不會顯示出危害作用[11-12]。但目前二甲基甘氨酸鈉作為食品添加劑在肉雞日糧添加的安全性和耐受性的研究報道尚不多見。

本實驗發(fā)現(xiàn)在肉雞日糧中添加1 500 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉能有效降低肉雞的耗料與體質(zhì)量增加量比，增加全期體質(zhì)量日增加量，而添加7 500 mg/kg和15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉對肉雞的生產(chǎn)性能影響不顯著。Kalmar等[13]研究表明肉雞日糧中添加10 000 mg/kg的二甲基甘氨酸對肉雞的生產(chǎn)性能影響并不顯著。這與本實驗的研究結(jié)果一致，表明肉雞對高劑量的二甲基甘氨酸鈉的耐受性較高，并未對其生產(chǎn)性能造成不利影響。有報道稱給動物飼喂1 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉，發(fā)現(xiàn)二甲基甘氨酸鈉組的糞便中的二甲基甘氨酸鈉殘留與對照組相比幾乎沒有差異，這說明低劑量的二甲基甘氨酸鈉在腸道中具有很高的吸收效率[9]。而Kalmar等[14]發(fā)現(xiàn)在日糧中添加量為10 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉的肉雞糞便中卻顯示出很高的二甲基甘氨酸殘留，這可能與高劑量的二甲基甘氨酸鈉造成的腸道消化吸收功能障礙有關(guān)，高劑量的二甲基甘氨酸鈉可能在早期肉仔雞的腸道發(fā)育過程中影響了腸絨毛對其他營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，并且對腸絨毛的發(fā)育造成損害，才導致肉雞的生產(chǎn)性能沒有提高。

血液常規(guī)檢查是全身體檢中的基本體檢項目，它的意義在于可以發(fā)現(xiàn)許多全身性疾病的早期跡象，診斷動物是否健康[15-16]。本實驗結(jié)果表明日糧中添加不同水平的二甲基甘氨酸鈉對于肉雞的健康沒有顯著影響，肉雞前期和后期的血液常規(guī)指標測定值均在正常參考值范圍內(nèi)。本實驗中血液中白細胞數(shù)量（WBC）、紅細胞數(shù)量（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞壓積（RBC）及其血小板數(shù)目（PLT）并不受高劑量二甲基甘氨酸鈉的添加而變化，都維持在正常的范圍內(nèi)，這說明肉雞對二甲基甘氨酸鈉在代謝過程中并沒有危害到血細胞的正常數(shù)量，也從一定程度上說明二甲基甘氨酸鈉在血液中有很高的代謝和吸收速率。

血液生化指標是指血液中的一些酶和蛋白質(zhì)，這些小分子酶和蛋白質(zhì)可以反映機體新陳代謝、免疫調(diào)節(jié)、能量傳遞、組織細胞通透性以及生長發(fā)育等的改變，從而間接了解動物機體健康狀況，并且血液生化指標的變化是機體一些組織和器官將要損害的前導信號[17]。目前，血液生化指標的測定已經(jīng)廣泛地應(yīng)用到許多研究領(lǐng)域，如動物疾病的診斷、體現(xiàn)受試動物對其所在自然生態(tài)環(huán)境的適應(yīng)程度等。本實驗發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，二甲基甘氨酸鈉添加劑量為15 000 mg/kg的日糧顯著降低了肉雞前期血液中總蛋白和白蛋白的含量，但添加劑量為1 500 mg/kg和7 500 mg/kg組的肉雞總蛋白和白蛋白含量較對照組差異不顯著。由此可見，高劑量的二甲基甘氨酸鈉可能會對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收產(chǎn)生一定的影響。研究發(fā)現(xiàn)血清蛋白主要由白蛋白和球蛋白組成，而肝臟是合成白蛋白的場所，機體通過從食物中吸收蛋白質(zhì)等而進行合成白蛋白和總蛋白，當機體出現(xiàn)蛋白質(zhì)營養(yǎng)不良或吸收不良的時候，肝實質(zhì)細胞無法獲取合成白蛋白所需的營養(yǎng)物質(zhì)，從而使白蛋白的合成受影響，使白蛋白的含量降低[18]。高劑量的二甲基甘氨酸在機體代謝途徑中，可產(chǎn)生代謝產(chǎn)物甘氨酸，Wang Weiwei等[19]研究報道稱機體過量攝入甘氨酸可影響中性氨基酸的轉(zhuǎn)運和利用，這可能是總蛋白和白蛋白降低的原因。血液中的谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是一種對肝臟損傷很敏感的酶，正常情況下分布于肝細胞和其他組織內(nèi)，在氨基酸的合成和蛋白質(zhì)分解代謝中起重要的中介作用[20-21]。在實驗中，15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉能夠從一定程度上提高谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量，這說明高劑量二甲基甘氨酸鈉可能對肉雞肝細胞造成了一定損傷。而膽紅素是血液循環(huán)中衰老紅細胞在肝臟、脾臟及骨髓的單核-吞噬細胞系統(tǒng)中分解和破壞的產(chǎn)物[22]。若機體內(nèi)生成膽紅素過多，超過了肝細胞處理膽紅素的能力，或者肝細胞處理膽紅素的能力下降，以及膽紅素排泄障礙等均可使血液中膽紅素水平增高。本實驗后期，15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉與其他組相比顯著提高了肉雞血液中的總膽紅素的含量，這可能是由于高劑量的二甲基甘氨酸鈉對肉雞的肝臟細胞造成了損傷，使得肝臟處理膽紅素的能力下降，造成血液中膽紅素的含量升高。

4 結(jié) 論

日糧中添加1 500 mg/kg和7 500 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉并未對AA肉雞的生產(chǎn)性能和血液生化水平造成不利影響，但高劑量15 000 mg/kg的二甲基甘氨酸鈉顯著降低了飼養(yǎng)前期AA肉雞血液中總蛋白、白蛋白的含量，并提高了后期血液中膽紅素的含量，對AA肉雞肝細胞功能造成了一定的損傷。結(jié)果提示：在食品中添加高劑量的二甲基甘氨酸鈉會對機體代謝產(chǎn)生不良影響，使用時應(yīng)嚴格按規(guī)定控制劑量。

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Effect of High-Dose N，N-Dimethylglycine Sodium on Growth Performance， Hematological Parameters and Blood Physiobiochemical Indices of Broilers

YANG Minxin， KOU Tao， ZHANG Lili， HE Jintian， LI Bo， WANG Tian*
(College of Animal Science and Technology， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China)

The main objective of this study was to evaluate the effect of high-dose N,N-dimethylglycine sodium (Na-DMG) on growth performance, hematological parameters and blood physiobiochemical indices of broilers. Totally 480 one-day-old Arbor Acres (AA) broiler chicks were randomly allocated to four groups with 6 replicates in each group, and fed commercial diet supplemented with N,N-dimethylglycine sodium at doses of 1 500, 7 500 and 15 000 mg/kg, respectively, for 42 days, which was divided into early (1?21 d) and later (22?42 d) stages. The results showed that: 1) the dietary addition of 1 500 mg/kg N,N-dimethylglycine sodium could decrease the feed gain ratio of 21-day-old broilers signifi cantly (P < 0.05). N,N-dimethylglycine sodium at 15 000 mg/kg could result in the increased the feed gain ratio of 42-day-old broilers when compared with 1 500 and 7 500 mg/kg (P < 0.05). Throughout the whole administration period, no signifi cant difference in feed gain ratio among the control group, 7 500 mg/kg and 15 000 mg/kg groups was observed (P > 0.05); (2) different dose levels of dietary supplementation with N,N-dimethylglycine sodium had no significant difference in hematological parameters of broilers when compared with the control group (P > 0.05); 3) feeding with 15 000 mg/kg N,N-dimethylglycine sodium decreased blood total protein and albumin levels of 21-day-old broilers significantly when compared with the control group (P < 0.05), while total bilirubin in the blood from the 15 000 mg/kg group was signifi cantly higher than that from the control, 1 500 mg/kg and 7 500 mg/kg groups (P < 0.01). In conclusion, the dietary addition of 15 000 mg/kg N,N-dimethylglycine sodium can damage digestible absorption and liver function of broilers.

N,N-dimethylglycine sodium; broiler; growth performance; hematological parameters; blood physiochemical indices

TS202.3

A

1002-6630（2015）09-0185-05

10.7506/spkx1002-6630-201509034

2014-07-02

江蘇省科技支撐計劃（農(nóng)業(yè)）項目（BE2010356）

楊敏馨（1991—），女，碩士研究生，研究方向為動物營養(yǎng)與飼料科學。E-mail：yangminxin1991@163.com

*通信作者：王恬（1958—），男，教授，博士，研究方向為動物營養(yǎng)與飼料科學。E-mail：twang18@163.com