丁 斌，劉阿敏，李德剛，狄潘潘，李曉祥

(1.安徽中醫(yī)藥大學，安徽 合肥 230038;2.安徽省新星藥物開發(fā)有限責任公司，安徽合肥 230088)

美托洛爾為選擇性β1受體阻滯劑，是用于治療高血壓等心血管疾病的經(jīng)典藥物［1］，其包括兩個對映異構體S-美托洛爾與R-美托洛爾，S-美托洛爾與 β1受體的親和力是 R-美托洛爾的500倍［2］，S-美托洛爾具有心臟選擇性，即使高劑量也不會對β2受體產(chǎn)生阻滯作用，與其他藥物幾乎無藥物相互作用。抗高血壓藥物緩釋制劑與普通制劑相比可以減少服藥次數(shù)，長時間維持合適的血藥濃度避免出現(xiàn)峰谷現(xiàn)象［5］，提高藥物的安全性、有效性。國內(nèi)研究美托洛爾緩釋片均為消旋體，目前還沒有S-美托洛爾緩釋片產(chǎn)品上市，也沒有相關研究報道。骨架緩釋片技術成熟、工藝簡單、釋藥合理，將琥珀酸S-美托洛爾制成24 h骨架緩釋片，必將為臨床提供一種更加有效、安全的抗高血壓緩釋制劑。

1 儀器與材料

1.1 藥品與試劑 琥珀酸S-美托洛爾原料(安徽省新星藥物開發(fā)有限責任公司制備，批號:20130402，含量:99.91%，純度:99.74%)，琥珀酸S-美托洛爾對照品(安徽省新星藥物開發(fā)有限責任公司制備，批號:20130103，含量:99.90%，純度:99.92%)，羥丙基甲基纖維素(HPMC，規(guī)格 K15M、K100M，上海昌為醫(yī)藥輔料技術有限公司)，微晶纖維素、可壓性淀粉、乳糖、微粉硅膠、硬脂酸鎂(安徽山河藥用輔料股份有限公司)，試劑均為分析純。

1.2 儀器 高效液相色譜儀(SPD-10AVP檢測器、LC-10ATVP泵，日本島津)，ZRS-8GD型智能溶出試驗儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)，AB135-S型電子天平(德國梅特勒公司)，DP30型單沖壓片機(北京國藥龍立科技有限公司)，片劑硬度測定儀(上海黃海藥檢儀器廠)，UV-2450型紫外可見分光光度計(日本島津)。

2 方法與結果

2.1 琥珀酸S-美托洛爾24 h緩釋片的制備 原料、骨架材料及填充劑分別過100目篩，按處方量稱取、混勻，濕法制粒，以90%的乙醇溶液制備軟材，過24目篩制粒，于60℃干燥，30目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂和微粉硅膠，混勻，采用8 mm淺凹沖模壓片，壓力控制在9 kg左右。

2.2 琥珀酸S-美托洛爾含量的測定

2.2.1 對照品的配置 精密稱取已干燥的琥珀酸S-美托洛爾標準品52 mg，置于100 mL容量瓶中，用pH=6.8的磷酸緩沖溶液溶解并定容，搖勻，精密量取1 mL定容至10 mL得濃度為52 mg·L－1的對照品溶液，備用。

2.2.2 波長的選擇 取上述配制的對照品溶液，以pH=6.8的磷酸緩沖溶液為空白溶液，按照中國藥典UV法(紫外分光光度法)測定項下操作，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描吸收圖譜見圖1。

由圖譜可知在222和280 nm附近有最大吸收，但是由于在222 nm處為末端吸收，故選擇280 nm作為檢測波長。按處方比例稱取輔料，同法操作，在此波長下輔料無吸收干擾。

2.2.3 色譜條件 參考美國藥典關于琥珀酸美托洛爾的標準，最終選擇色譜柱:Luna C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:乙腈—磷酸鹽緩沖液(pH=3)20∶80，流速:1.0 mL·min－1，柱溫:35℃，波長:280 nm。

2.2.4 檢測限、定量限的測定 取上述13.2 mg·L－1濃度的對照液，并將其逐步稀釋進樣，峰高為基線噪音10倍的濃度為最低定量限濃度，峰高為基線噪音3倍的濃度為最低檢測限濃度。結果表明，最低檢測限濃度為0.021 mg·L－1，最低定量限濃度為 0.072 mg·L－1。

2.2.5 線性范圍 精密稱取對照品13.2 mg置于100 mL容量瓶中，加溶出介質至刻度，搖勻，得濃度132 mg·L－1的儲備溶液。分別精密量取 0.05、0.25、0.5、0.75、1.0、1.2 mL 于 10 mL 容量瓶中，加溶出介質定容后分別進樣200 μL，以峰面積(A)對進樣量濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程:A=50 739C+897.94(R2=0.999 6、r=0.999 8)，結果表明琥珀酸 S-美托洛爾在 0.66 ～15.8 mg·L－1范圍內(nèi)線性關系良好。

2.2.6 系統(tǒng)精密度試驗 取上述對照品溶液(13.2 mg·L－1)在上述色譜條件下，重復進樣6次，計算得RSD(相對標準偏差)=0.44%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 溶液穩(wěn)定性試驗 取上述對照品溶液(13.2 mg·L－1)，室溫放置分別于 0、2、4、6、8、12、24、48 h進樣，記錄峰面積，計算得峰面積RSD=1.2%，表明溶液在48 h穩(wěn)定性良好。

2.2.8 準確度試驗 精密稱取對照品 0.66、10.56、15.84 mg(相當于對照品質量的 5%、80%、120%)分別置于100 mL量瓶中加介質定容，再分別從中精密量取1 mL于10 mL量瓶中加介質稀釋到刻度，各配制3份，搖勻，進樣，結果表明回收率為 100.19%，RSD=0.77%。

2.3 琥珀酸S-美托洛爾釋放度檢測法 取上述方法制備的緩釋片，參照釋放度測定法(中國藥典2010版二部附錄 XD第一法)采用槳法:50 r·min－1，溫度:(37 ±0.5)℃，釋放介質為 pH=6.8 的磷酸緩沖液，于 0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h取樣10 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，并及時補充同等體積介質，取續(xù)濾液備用。采用HPLC法測定釋放量，用外標法計算累計釋放度［6－7］。

2.4 影響琥珀酸S-美托洛爾釋放因素考察 本研究采用相似因子法對釋放度曲線進行相似性判斷，相似因子系數(shù)f2可反映釋放度差異，f2在50～100之間說明兩曲線相似，f2=100說明曲線重合，相似因子系數(shù)f2越小，釋放曲線間差異越大，相似因子系數(shù)計算公式:

2.4.1 不同規(guī)格HPMC對釋放度的影響 分別取相同粒度不同規(guī)格的HPMC(K15M和K100M)以及K15M和K100M的混合骨架材料(質量比1∶1)，用量均占總質量40%，分別制備緩釋片，取6片測定釋放度，釋放曲線如圖2。

采用相似因子法對釋放曲線兩兩之間進行相似性判定，K15M組為曲線A，混合骨架組為曲線B，K100M為曲線C，A與 B之間 f2=43.14，A與 C之間 f2=32.49，B 與 C 之間 f2=51.92 結果表明不同規(guī)格的HPMC對釋放影響較大，低黏度HPMC釋放較快，易造成前期突釋，高黏度釋放不完全，20 h僅釋放77%。

2.4.2 混合HPMC比例對釋放度的影響 取K15M和K100M的混合骨架材料，質量比分別為2∶1、1∶1、1∶2 制備緩釋片，釋放曲線如圖3。

采用相似因子法對釋放曲線兩兩之間進行相似性判定，K15M與K100M 質量比2∶1組 A，1∶1組為曲線為曲線B，1∶2組為曲線C，A與B之間f2=46.98，A 與 C 之間 f2=37.25，B 與 C 之間 f2=57.54，由結果可知骨架材料混合比例不同對釋放度影響較大，高黏度HPMC含量過高會導致前期釋放較慢后期釋放不完全。

2.4.3 HPMC用量對釋放度的影響 取K15M和K100M的混合骨架材料(質量比1∶1)，用量分別占總處方質量20%、40%、60%制備緩釋片，釋放曲線如圖4。

由結果可知不同含量HPMC對釋放度影響較大，A曲線20%量與B曲線40%量、C曲線60%量的 f2分別為43.73 和39.57，B 與C 的 f2=69.57 說明兩片劑釋放行為相似，由圖4可知一定范圍內(nèi)隨著HPMC含量提高釋放速率明顯減小，但是HPMC的含量增大到一定程度后，進一步增大HPMC含量，藥物的釋放速率減慢程度趨緩。

2.4.4 填充劑種類對釋放度的影響 以乳糖、微晶纖維素(MCC)、預膠化淀粉作為填充劑用量均為片劑的50%制備緩釋片，釋放曲線如圖5。

其中乳糖組為曲線A，預膠化淀粉組為曲線B，MCC組為曲線C，A與B之間f2=44.36，A與C之間 f2=52.57、B 與 C 之間 f2=72.89，預膠化淀粉組與乳糖組差異明顯，乳糖組釋放較快，MCC組與預膠化淀粉組無明顯差異，但是預交化淀粉組輔料蓬松，片劑壓力較小，綜合考慮選擇MCC作為填充劑效果最好。

2.4.5 壓力對釋放度的影響 選擇混合骨架材料(質量比1∶1)以及MCC為填充劑考察壓力對釋放度影響［8］，采用6、9、12 kg 壓力壓片，釋放曲線如圖6。

其中6 kg組為曲線A，9 kg組為曲線B，12 kg組為曲線 C，A與 B之間 f2=46.01，A與 C之間f2=37.24，B 與 C 之間 f2=58.75，說明壓力對釋放度有影響，但是隨著壓力增加，其對釋放速率的影響減小。

2.5 處方工藝的優(yōu)化

2.5.1 正交設計 在前期單因素考察的基礎上確定了進行正交試驗的影響因素及水平［10］，選擇對藥物釋放影響較大的3個因素，即HPMC的規(guī)格種類、HPMC的用量以及壓力作為影響因素A、B、C，每個因素分別取3個水平，以MCC為填充劑使片重保持恒定。根據(jù)L9(34)正交表確定處方組成，按照制備工藝制備緩釋片。正交試驗的因素水平見表1。

表1 因素水平表

參考中國藥典2010版二部附錄XIXD緩控釋制劑指導原則的規(guī)定，采用綜合評分法，同時參考美國藥典對琥珀酸美托洛爾緩釋片在1、4、8、20 h四個點的體外釋放度的要求確定四個點釋放標準:1 h累計釋放百分率為10%;4 h累計釋放百分率為30%;8 h累計釋放百分率為50%;20 h累計釋放百分率應該大于80%，故總分的計算公式為:Y=Q20－［(Q1－10)2+(Q4－30)2+(Q8－50)2］1/2，其中［(Q1 －10)2+(Q4 －30)2+(Q8 －50)2］1/2，以綜合評分Y值與釋放度指標共同描述其體外釋放情況，綜合考察指標Y值越大，藥物緩釋越接近理想。

2.5.2 方差分析與結論 極差R反映各因素對指標的影響程度，R值越大表明影響越明顯。可見3種因素的影響程度為:A＞C＞B，即HPMC規(guī)格＞壓力＞HPMC用量，表3結果表明，HPMC的規(guī)格對琥珀酸S-美托洛爾緩釋片釋放度的影響有統(tǒng)計學意義。各因素的最佳組合為A3B2C2，最佳處方工藝為K15M和K100M規(guī)格HPMC混合骨架，用量比1∶1，質量占總質量40%，MCC為填充劑，采用濕法制粒，壓力控制在9 kg左右。

表2 正交設計試驗結果

表3 方差分析(α=0.05)

2.6 琥珀酸S-美托洛爾骨架緩釋片釋藥模型擬合采用零級釋藥方程、一級釋藥方程、Higuchi、Ritger-Peppas釋藥方程對自制的琥珀酸S-美托洛爾緩釋片累積釋放率進行數(shù)學擬合［11］，根據(jù)擬合方程各時間點的累計釋放率與實測值進行比較，計算相關系數(shù)r，相關系數(shù)r越接近1越佳，擬合結果見表4。

當 n＜0.45時為 Fick擴散，n＞0.89時為骨架溶蝕，由結果可知琥珀酸S-美托洛爾緩釋片Ritger－Peppas模型擬合結果最優(yōu) n=0.546 6，0.45 ＜n＜0.89為非Fick擴散即擴散與骨架溶蝕協(xié)同作用。

表4 琥珀酸S-美托洛爾緩釋片釋藥模型擬合結果

3 討論

緩釋制劑的釋放特征受緩釋材料HPMC等影響，其相對分子質量越大黏度也越大，側鏈溶脹越快，就越能形成高強度的凝膠，從而使藥物釋放減慢［11］。研究發(fā)現(xiàn)單一規(guī)格的HPMC不能滿足本研究釋放要求，故采用混合骨架材料，利用低黏度HPMC形成水化層速度快的特點控制前期的釋放，配合形成水化層速度較慢的高黏度HPMC，控制藥物后期釋放，達到處方設計要求。

在制備親水凝膠骨架片過程中所用的壓力也會影響藥物的釋放，在一定范圍內(nèi)隨著壓力的增加，骨架的松密度增大，孔隙度減小，HPMC分子受束縛而無法伸展形成凝膠層，導致釋放減慢。但是隨著壓力的增加這種影響將變得有限，因為HPMC一旦形成均勻連續(xù)的凝膠層，壓力和孔隙度對聚合物溶脹和藥物釋放的影響將不再顯著。本研究將制片壓力控制在9 kg左右最為合適。

琥珀酸S-美托洛爾是藥效更高、副作用更小的單一對映體手性藥物，研制的琥珀酸S-美托洛爾24 h骨架緩釋片與進口片體外釋放相似，藥物釋放以非Fick擴散為主［12］，緩釋特征理想、處方合理、工藝穩(wěn)定可行。

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