丁 斌，劉阿敏，李德剛，狄潘潘，李曉祥

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230038;2.安徽省新星藥物開發(fā)有限責(zé)任公司，安徽合肥 230088)

美托洛爾為選擇性β1受體阻滯劑，是用于治療高血壓等心血管疾病的經(jīng)典藥物［1］，其包括兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體S-美托洛爾與R-美托洛爾，S-美托洛爾與 β1受體的親和力是 R-美托洛爾的500倍［2］，S-美托洛爾具有心臟選擇性，即使高劑量也不會(huì)對(duì)β2受體產(chǎn)生阻滯作用，與其他藥物幾乎無藥物相互作用?？垢哐獕核幬锞忈屩苿┡c普通制劑相比可以減少服藥次數(shù)，長(zhǎng)時(shí)間維持合適的血藥濃度避免出現(xiàn)峰谷現(xiàn)象［5］，提高藥物的安全性、有效性。國(guó)內(nèi)研究美托洛爾緩釋片均為消旋體，目前還沒有S-美托洛爾緩釋片產(chǎn)品上市，也沒有相關(guān)研究報(bào)道。骨架緩釋片技術(shù)成熟、工藝簡(jiǎn)單、釋藥合理，將琥珀酸S-美托洛爾制成24 h骨架緩釋片，必將為臨床提供一種更加有效、安全的抗高血壓緩釋制劑。

1 儀器與材料

1.1 藥品與試劑 琥珀酸S-美托洛爾原料(安徽省新星藥物開發(fā)有限責(zé)任公司制備，批號(hào):20130402，含量:99.91%，純度:99.74%)，琥珀酸S-美托洛爾對(duì)照品(安徽省新星藥物開發(fā)有限責(zé)任公司制備，批號(hào):20130103，含量:99.90%，純度:99.92%)，羥丙基甲基纖維素(HPMC，規(guī)格 K15M、K100M，上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司)，微晶纖維素、可壓性淀粉、乳糖、微粉硅膠、硬脂酸鎂(安徽山河藥用輔料股份有限公司)，試劑均為分析純。

1.2 儀器 高效液相色譜儀(SPD-10AVP檢測(cè)器、LC-10ATVP泵，日本島津)，ZRS-8GD型智能溶出試驗(yàn)儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)，AB135-S型電子天平(德國(guó)梅特勒公司)，DP30型單沖壓片機(jī)(北京國(guó)藥龍立科技有限公司)，片劑硬度測(cè)定儀(上海黃海藥檢儀器廠)，UV-2450型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津)。

2 方法與結(jié)果

2.1 琥珀酸S-美托洛爾24 h緩釋片的制備 原料、骨架材料及填充劑分別過100目篩，按處方量稱取、混勻，濕法制粒，以90%的乙醇溶液制備軟材，過24目篩制粒，于60℃干燥，30目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂和微粉硅膠，混勻，采用8 mm淺凹沖模壓片，壓力控制在9 kg左右。

2.2 琥珀酸S-美托洛爾含量的測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品的配置 精密稱取已干燥的琥珀酸S-美托洛爾標(biāo)準(zhǔn)品52 mg，置于100 mL容量瓶中，用pH=6.8的磷酸緩沖溶液溶解并定容，搖勻，精密量取1 mL定容至10 mL得濃度為52 mg·L－1的對(duì)照品溶液，備用。

2.2.2 波長(zhǎng)的選擇 取上述配制的對(duì)照品溶液，以pH=6.8的磷酸緩沖溶液為空白溶液，按照中國(guó)藥典UV法(紫外分光光度法)測(cè)定項(xiàng)下操作，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描吸收?qǐng)D譜見圖1。

由圖譜可知在222和280 nm附近有最大吸收，但是由于在222 nm處為末端吸收，故選擇280 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。按處方比例稱取輔料，同法操作，在此波長(zhǎng)下輔料無吸收干擾。

2.2.3 色譜條件 參考美國(guó)藥典關(guān)于琥珀酸美托洛爾的標(biāo)準(zhǔn)，最終選擇色譜柱:Luna C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈—磷酸鹽緩沖液(pH=3)20∶80，流速:1.0 mL·min－1，柱溫:35℃，波長(zhǎng):280 nm。

2.2.4 檢測(cè)限、定量限的測(cè)定 取上述13.2 mg·L－1濃度的對(duì)照液，并將其逐步稀釋進(jìn)樣，峰高為基線噪音10倍的濃度為最低定量限濃度，峰高為基線噪音3倍的濃度為最低檢測(cè)限濃度。結(jié)果表明，最低檢測(cè)限濃度為0.021 mg·L－1，最低定量限濃度為 0.072 mg·L－1。

2.2.5 線性范圍 精密稱取對(duì)照品13.2 mg置于100 mL容量瓶中，加溶出介質(zhì)至刻度，搖勻，得濃度132 mg·L－1的儲(chǔ)備溶液。分別精密量取 0.05、0.25、0.5、0.75、1.0、1.2 mL 于 10 mL 容量瓶中，加溶出介質(zhì)定容后分別進(jìn)樣200 μL，以峰面積(A)對(duì)進(jìn)樣量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:A=50 739C+897.94(R2=0.999 6、r=0.999 8)，結(jié)果表明琥珀酸 S-美托洛爾在 0.66 ～15.8 mg·L－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 系統(tǒng)精密度試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液(13.2 mg·L－1)在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得RSD(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差)=0.44%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液(13.2 mg·L－1)，室溫放置分別于 0、2、4、6、8、12、24、48 h進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算得峰面積RSD=1.2%，表明溶液在48 h穩(wěn)定性良好。

2.2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱取對(duì)照品 0.66、10.56、15.84 mg(相當(dāng)于對(duì)照品質(zhì)量的 5%、80%、120%)分別置于100 mL量瓶中加介質(zhì)定容，再分別從中精密量取1 mL于10 mL量瓶中加介質(zhì)稀釋到刻度，各配制3份，搖勻，進(jìn)樣，結(jié)果表明回收率為 100.19%，RSD=0.77%。

2.3 琥珀酸S-美托洛爾釋放度檢測(cè)法 取上述方法制備的緩釋片，參照釋放度測(cè)定法(中國(guó)藥典2010版二部附錄 XD第一法)采用槳法:50 r·min－1，溫度:(37 ±0.5)℃，釋放介質(zhì)為 pH=6.8 的磷酸緩沖液，于 0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h取樣10 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，并及時(shí)補(bǔ)充同等體積介質(zhì)，取續(xù)濾液備用。采用HPLC法測(cè)定釋放量，用外標(biāo)法計(jì)算累計(jì)釋放度［6－7］。

2.4 影響琥珀酸S-美托洛爾釋放因素考察 本研究采用相似因子法對(duì)釋放度曲線進(jìn)行相似性判斷，相似因子系數(shù)f2可反映釋放度差異，f2在50～100之間說明兩曲線相似，f2=100說明曲線重合，相似因子系數(shù)f2越小，釋放曲線間差異越大，相似因子系數(shù)計(jì)算公式:

2.4.1 不同規(guī)格HPMC對(duì)釋放度的影響 分別取相同粒度不同規(guī)格的HPMC(K15M和K100M)以及K15M和K100M的混合骨架材料(質(zhì)量比1∶1)，用量均占總質(zhì)量40%，分別制備緩釋片，取6片測(cè)定釋放度，釋放曲線如圖2。

采用相似因子法對(duì)釋放曲線兩兩之間進(jìn)行相似性判定，K15M組為曲線A，混合骨架組為曲線B，K100M為曲線C，A與 B之間 f2=43.14，A與 C之間 f2=32.49，B 與 C 之間 f2=51.92 結(jié)果表明不同規(guī)格的HPMC對(duì)釋放影響較大，低黏度HPMC釋放較快，易造成前期突釋，高黏度釋放不完全，20 h僅釋放77%。

2.4.2 混合HPMC比例對(duì)釋放度的影響 取K15M和K100M的混合骨架材料，質(zhì)量比分別為2∶1、1∶1、1∶2 制備緩釋片，釋放曲線如圖3。

采用相似因子法對(duì)釋放曲線兩兩之間進(jìn)行相似性判定，K15M與K100M 質(zhì)量比2∶1組 A，1∶1組為曲線為曲線B，1∶2組為曲線C，A與B之間f2=46.98，A 與 C 之間 f2=37.25，B 與 C 之間 f2=57.54，由結(jié)果可知骨架材料混合比例不同對(duì)釋放度影響較大，高黏度HPMC含量過高會(huì)導(dǎo)致前期釋放較慢后期釋放不完全。

2.4.3 HPMC用量對(duì)釋放度的影響 取K15M和K100M的混合骨架材料(質(zhì)量比1∶1)，用量分別占總處方質(zhì)量20%、40%、60%制備緩釋片，釋放曲線如圖4。

由結(jié)果可知不同含量HPMC對(duì)釋放度影響較大，A曲線20%量與B曲線40%量、C曲線60%量的 f2分別為43.73 和39.57，B 與C 的 f2=69.57 說明兩片劑釋放行為相似，由圖4可知一定范圍內(nèi)隨著HPMC含量提高釋放速率明顯減小，但是HPMC的含量增大到一定程度后，進(jìn)一步增大HPMC含量，藥物的釋放速率減慢程度趨緩。

2.4.4 填充劑種類對(duì)釋放度的影響 以乳糖、微晶纖維素(MCC)、預(yù)膠化淀粉作為填充劑用量均為片劑的50%制備緩釋片，釋放曲線如圖5。

其中乳糖組為曲線A，預(yù)膠化淀粉組為曲線B，MCC組為曲線C，A與B之間f2=44.36，A與C之間 f2=52.57、B 與 C 之間 f2=72.89，預(yù)膠化淀粉組與乳糖組差異明顯，乳糖組釋放較快，MCC組與預(yù)膠化淀粉組無明顯差異，但是預(yù)交化淀粉組輔料蓬松，片劑壓力較小，綜合考慮選擇MCC作為填充劑效果最好。

2.4.5 壓力對(duì)釋放度的影響 選擇混合骨架材料(質(zhì)量比1∶1)以及MCC為填充劑考察壓力對(duì)釋放度影響［8］，采用6、9、12 kg 壓力壓片，釋放曲線如圖6。

其中6 kg組為曲線A，9 kg組為曲線B，12 kg組為曲線 C，A與 B之間 f2=46.01，A與 C之間f2=37.24，B 與 C 之間 f2=58.75，說明壓力對(duì)釋放度有影響，但是隨著壓力增加，其對(duì)釋放速率的影響減小。

2.5 處方工藝的優(yōu)化

2.5.1 正交設(shè)計(jì) 在前期單因素考察的基礎(chǔ)上確定了進(jìn)行正交試驗(yàn)的影響因素及水平［10］，選擇對(duì)藥物釋放影響較大的3個(gè)因素，即HPMC的規(guī)格種類、HPMC的用量以及壓力作為影響因素A、B、C，每個(gè)因素分別取3個(gè)水平，以MCC為填充劑使片重保持恒定。根據(jù)L9(34)正交表確定處方組成，按照制備工藝制備緩釋片。正交試驗(yàn)的因素水平見表1。

表1 因素水平表

參考中國(guó)藥典2010版二部附錄XIXD緩控釋制劑指導(dǎo)原則的規(guī)定，采用綜合評(píng)分法，同時(shí)參考美國(guó)藥典對(duì)琥珀酸美托洛爾緩釋片在1、4、8、20 h四個(gè)點(diǎn)的體外釋放度的要求確定四個(gè)點(diǎn)釋放標(biāo)準(zhǔn):1 h累計(jì)釋放百分率為10%;4 h累計(jì)釋放百分率為30%;8 h累計(jì)釋放百分率為50%;20 h累計(jì)釋放百分率應(yīng)該大于80%，故總分的計(jì)算公式為:Y=Q20－［(Q1－10)2+(Q4－30)2+(Q8－50)2］1/2，其中［(Q1 －10)2+(Q4 －30)2+(Q8 －50)2］1/2，以綜合評(píng)分Y值與釋放度指標(biāo)共同描述其體外釋放情況，綜合考察指標(biāo)Y值越大，藥物緩釋越接近理想。

2.5.2 方差分析與結(jié)論 極差R反映各因素對(duì)指標(biāo)的影響程度，R值越大表明影響越明顯?？梢?種因素的影響程度為:A＞C＞B，即HPMC規(guī)格＞壓力＞HPMC用量，表3結(jié)果表明，HPMC的規(guī)格對(duì)琥珀酸S-美托洛爾緩釋片釋放度的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各因素的最佳組合為A3B2C2，最佳處方工藝為K15M和K100M規(guī)格HPMC混合骨架，用量比1∶1，質(zhì)量占總質(zhì)量40%，MCC為填充劑，采用濕法制粒，壓力控制在9 kg左右。

表2 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析(α=0.05)

2.6 琥珀酸S-美托洛爾骨架緩釋片釋藥模型擬合采用零級(jí)釋藥方程、一級(jí)釋藥方程、Higuchi、Ritger-Peppas釋藥方程對(duì)自制的琥珀酸S-美托洛爾緩釋片累積釋放率進(jìn)行數(shù)學(xué)擬合［11］，根據(jù)擬合方程各時(shí)間點(diǎn)的累計(jì)釋放率與實(shí)測(cè)值進(jìn)行比較，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，相關(guān)系數(shù)r越接近1越佳，擬合結(jié)果見表4。

當(dāng) n＜0.45時(shí)為 Fick擴(kuò)散，n＞0.89時(shí)為骨架溶蝕，由結(jié)果可知琥珀酸S-美托洛爾緩釋片Ritger－Peppas模型擬合結(jié)果最優(yōu) n=0.546 6，0.45 ＜n＜0.89為非Fick擴(kuò)散即擴(kuò)散與骨架溶蝕協(xié)同作用。

表4 琥珀酸S-美托洛爾緩釋片釋藥模型擬合結(jié)果

3 討論

緩釋制劑的釋放特征受緩釋材料HPMC等影響，其相對(duì)分子質(zhì)量越大黏度也越大，側(cè)鏈溶脹越快，就越能形成高強(qiáng)度的凝膠，從而使藥物釋放減慢［11］。研究發(fā)現(xiàn)單一規(guī)格的HPMC不能滿足本研究釋放要求，故采用混合骨架材料，利用低黏度HPMC形成水化層速度快的特點(diǎn)控制前期的釋放，配合形成水化層速度較慢的高黏度HPMC，控制藥物后期釋放，達(dá)到處方設(shè)計(jì)要求。

在制備親水凝膠骨架片過程中所用的壓力也會(huì)影響藥物的釋放，在一定范圍內(nèi)隨著壓力的增加，骨架的松密度增大，孔隙度減小，HPMC分子受束縛而無法伸展形成凝膠層，導(dǎo)致釋放減慢。但是隨著壓力的增加這種影響將變得有限，因?yàn)镠PMC一旦形成均勻連續(xù)的凝膠層，壓力和孔隙度對(duì)聚合物溶脹和藥物釋放的影響將不再顯著。本研究將制片壓力控制在9 kg左右最為合適。

琥珀酸S-美托洛爾是藥效更高、副作用更小的單一對(duì)映體手性藥物，研制的琥珀酸S-美托洛爾24 h骨架緩釋片與進(jìn)口片體外釋放相似，藥物釋放以非Fick擴(kuò)散為主［12］，緩釋特征理想、處方合理、工藝穩(wěn)定可行。

［1］牛小偉，許 涵，賀生亮，等.卡維地洛與美托洛爾比較治療原發(fā)性高血壓效果的系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志，2013，13(8):963－970.

［2］Sharma P，Contractor P，Guttikar S，et al.Development of a sensitive and rapid method for quantitation of(S)-(－)-and(R)－(+)－metoprolol in human plasma by chiral LC-ESI-MS/MS［J］.Journal of Pharmaceutical Analysis，2014，4(1):63 － 79.

［3］姜海東，由麗娜，馬秋野.倍他樂克聯(lián)合通心絡(luò)膠囊治療冠心病心絞痛臨床研究［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17(8):1392 －1393.

［4］Desai PB，Srivastava AK.Adsorptive stripping differential pulse voltammetric determination of metoprolol at Nafionon-CNT-nano-composite film sensor［J］.Sensors and Actuators，2013，1(76):632 －638.

［5］趙 靜，韓衛(wèi)星，胡華青.中老年高血壓患者動(dòng)態(tài)血壓的晝夜節(jié)律分析［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17(12):2089 －2090.

［6］李小芳，舒 予，劉 玲，等.穿心蓮總內(nèi)酯骨架緩釋片的制備及釋放度測(cè)定［J］.中成藥，2014，36(3):634 －637.

［7］蔡紅梅.鹽酸文拉法辛緩釋膠囊含量測(cè)定及釋放度試驗(yàn)研究［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29(4):364 －365.

［8］陳 志，李傳響.制片壓力對(duì)不同廠家尼群地平片溶出度的影響［J］.安徽醫(yī)藥，2014，18(7):1220 －1221.

［9］桂 彬，林巧平，許向陽，等.影響親水凝膠骨架系統(tǒng)中藥物釋放因素［J］.藥學(xué)進(jìn)展，2012，36(5):216 －223.

［10］楊滿琴，謝若男，劉德春，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選十一味活血酊醇提工藝［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17(6):937 －938.

［11］杜 聰，賈曉輝，沈 青.HPMC水凝膠溶脹性能的影響因素研究［J］.纖維素科學(xué)與技術(shù)，2011，19(1):47 －51.

［12］梁澤華，尹麗娜，張雅雯，等.積雪草總苷緩釋片體外釋藥模型考察［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37(2):13 －14.