趙 揚(yáng)，李 瑋，闞家義，桂雙英

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012;2.安徽食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽合肥 230051)

地紅霉素屬第二代類紅霉素大環(huán)內(nèi)酯類藥物，該藥物克服了紅霉素在低pH下的不穩(wěn)定性［1］，其腸溶片于1995年FDA批準(zhǔn)在美國(guó)銷售。2005年在國(guó)內(nèi)上市，現(xiàn)已納入國(guó)家基本藥物［2］。有文獻(xiàn)報(bào)道［3］單劑量口服國(guó)產(chǎn)地紅霉素(試驗(yàn)片)和進(jìn)口地紅霉素(參比劑)，得到國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口地紅霉素具有生物等效性。國(guó)內(nèi)地紅霉素腸溶片現(xiàn)有9個(gè)生產(chǎn)廠家。中國(guó)藥典未收載地紅霉素及其制劑，美國(guó)藥典36版中收載了地紅霉素原料和地紅霉素腸溶片，EP8.0收載了地紅霉素原料。因此國(guó)內(nèi)各企業(yè)執(zhí)行不同的國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒標(biāo)準(zhǔn)。目前主要采用高效液相色譜法測(cè)定地紅霉素的含量［4-8］。本文綜合7個(gè)不同廠家的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)不同批號(hào)的樣品實(shí)驗(yàn)，最終確定了適宜的地紅霉素腸溶片主藥含量的測(cè)定方法。

在水分的檢測(cè)項(xiàng)目下，其中 YBH23982005、YBH40212005、YBH07012009、YBH12442006 標(biāo)準(zhǔn)并沒有規(guī)定水分的含量測(cè)定，為此考察水分測(cè)定的必要性。參考 USP［9］水分測(cè)定項(xiàng)下 5.0%，本實(shí)驗(yàn)對(duì)3個(gè)廠家的地紅霉素腸溶片進(jìn)行了檢查。

1 儀器與試藥

TitroLine KF卡爾費(fèi)休氏滴定儀(D55122 Mainz);高效液相色譜儀:戴安 ULTIMATE 3000 HPG-3400SD;分析天平:德國(guó)sartorius ME235S。

地紅霉素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);地紅霉素腸溶片;甲醇和乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 水分測(cè)定 在23℃，相對(duì)濕度35%環(huán)境下，此環(huán)境對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響不大［10］。取不同批號(hào)地紅霉素腸溶片細(xì)粉適量，按照水分測(cè)定法(中國(guó)藥典2010年版二部附錄VIII M第一法A)測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 地紅霉素腸溶片水分含量

2.2 地紅霉素含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為 Eclipse XDB-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);乙腈—磷酸鹽緩沖液(取1.41 g磷酸氫二鉀與6.91 g磷酸二氫鉀，加水1 000 mL 溶解后，過(guò)濾，即得)—甲醇(44∶37∶19)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)205 nm，柱溫40℃。

2.2.2 樣品的前處理 取不同廠家不同批號(hào)的地紅霉素腸溶片，首先測(cè)定地紅霉素的含量，然后拆去包裝，處理?xiàng)l件是樣品平均裸露在溫度70℃，相對(duì)濕度75%的變溫箱中，放置5 d后，取出。

2.2.3 方法學(xué)的考察 (1)專屬性:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白溶劑與輔料在5 min前出峰，不影響樣品測(cè)定。

(2)穩(wěn)定性:本實(shí)驗(yàn)采用了丙酮、四氫呋喃、甲醇、乙腈、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑，考慮其溶解性與穩(wěn)定性因素，選擇乙腈∶甲醇(7∶3)為溶劑，稱取地紅霉素對(duì)照品適量，稀釋到2.0 g·L-1，分別于0、1、2、4、6、8 h 進(jìn)樣 20 μL 測(cè)定，結(jié)果表明 8 h 內(nèi)，16R-地紅霉素的峰面積 RSD為5.06%，而16R與16S的總峰面積RSD為1.26%。

(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性:精密取地紅霉素對(duì)照品適量，用乙腈∶甲醇(7∶3)溶劑溶解稀釋制成0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g·L-1的溶液，按高效液相色譜法測(cè)定，分別得到線性回歸方程為Y=14.754X+0.0674(r2=0.999 9)。

(4)回收:精密稱取地紅霉素 15、20、25 mg，按處方比例加入空白輔料，分別用乙腈∶甲醇(7∶3)溶劑溶解稀釋制成1.5、2.0 和2.5 g·L-1。按高效液相色譜法測(cè)得16R與16S-地紅霉素峰面積按外標(biāo)法計(jì)算測(cè)得量和回收率。結(jié)果表明，三個(gè)劑量的回收率分別為 99.5%、99.9%、100.1%。

2.2.4 測(cè)定 采用不除包衣進(jìn)行地紅霉素腸溶片中地紅霉素的含量測(cè)定［11］。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于地紅霉素50 mg)，置于25 mL容量瓶中，加乙腈∶甲醇(7∶3)混合液超聲使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，立即取濾液20μL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖(圖1～3);另取地紅霉素適量，同法配制成2.0 g·L-1的溶液。按外標(biāo)法將16R地紅霉素與16S地紅霉素的峰面積合并計(jì)算。含量結(jié)果見表2。

表2 樣品在高溫高濕處理前后地紅霉素含量

2.3 數(shù)據(jù)分析結(jié)果 統(tǒng)計(jì)方法:使用SPSS17.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定性資料采用相對(duì)數(shù)進(jìn)行描述;定量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行描述，組間比較采用成組設(shè)計(jì)t檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)對(duì)水分與地紅霉素腸溶片含量下降值進(jìn)行相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

統(tǒng)計(jì)結(jié)果:同水分的樣品，經(jīng)過(guò)相同的處理，含量下降值存在明顯的差異，對(duì)樣品處理前后的數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，可知處理后地紅霉素腸溶片含量(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)低于處理前(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.288，P ＜0.001)。再對(duì)樣品的水分與含量下降值進(jìn)行相關(guān)分析，水分與含量下降值間無(wú)相關(guān)性(r=-0.278，P=0.265)。

3 討論

建立HPLC法測(cè)定地紅霉素的主藥含量，快速準(zhǔn)確。通過(guò)相關(guān)分析結(jié)果顯示，地紅霉素腸溶片中水分的高低并不影響其主藥穩(wěn)定性，其穩(wěn)定性可能與生產(chǎn)工藝有很大關(guān)系［12-13］，建議國(guó)內(nèi)各企業(yè)在生產(chǎn)的過(guò)程中，根據(jù)腸溶片的性質(zhì)，嚴(yán)格控制其他工藝的處方比例;針對(duì)國(guó)內(nèi)各企業(yè)執(zhí)行不同的國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒標(biāo)準(zhǔn)中水分的檢測(cè)項(xiàng)目下，建議地紅霉素腸溶片檢測(cè)項(xiàng)目下水分≤5%。

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