杜紅芳，劉 圣，耿魁魁，何夢(mèng)璇

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥 230038;2.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院，安徽 合肥 230001)

生脈注射液由紅參、麥冬和北五味子組成，具有益氣養(yǎng)陰，復(fù)脈固脫之功效，臨床上用于氣陰兩虧，脈虛欲脫的心悸、氣短、四肢厥冷、汗出、脈欲絕及心肌梗死、心源性休克、感染性休克等具有上述證候者。隨著生脈注射液在臨床上應(yīng)用越來(lái)越廣泛，不良反應(yīng)報(bào)道也越來(lái)越多［1］。主要不良反應(yīng)有皮疹、惡心、嘔吐、腹瀉、心悸、口干、頭暈、頭痛、顏面潮紅等。其不良反應(yīng)的發(fā)生常與適應(yīng)證、濃度、溶媒、滴速等密切相關(guān)，其中與溶媒相關(guān)的不良反應(yīng)達(dá)到22%［2－3］，故臨床醫(yī)師在臨床用藥時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)使用，保證合理用藥，以減少不良反應(yīng)的發(fā)生。生脈注射液說(shuō)明書(shū)用法用量規(guī)定，一次20～60 mL，用5%葡萄糖注射液(5%GS)250～500 mL稀釋?zhuān)颊甙橛刑悄虿』蛐柩a(bǔ)充電解質(zhì)時(shí)，臨床經(jīng)常將其與0.9%氯化鈉注射液(0.9%NS)和葡萄糖氯化鈉注射液(GNS)配伍使用，且靜脈用藥集中調(diào)配后不能及時(shí)用于患者，室溫下常需存放約4 h。為了保證臨床用藥安全，提高成品輸液質(zhì)量，本文分別用5%GS、10%葡萄糖注射液(10%GS)、0.9%NS、GNS和乳酸鈉林格注射液(SLR)調(diào)配生脈注射液為成品輸液，室溫(25℃)下8 h內(nèi)觀察5種成品輸液的性狀、pH、不溶性微粒數(shù)及五味子醇甲的含量變化，為生脈注射液調(diào)配后的成品輸液質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A HT島津高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器，四元低壓泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，LabSolutions Version 5.51色譜工作站);FA2004B電子天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司);PHS-3C型電子pH計(jì)(上海雷磁儀器廠);GWF-5JS微粒分析儀(天河醫(yī)療儀器有限公司)。

1.2 試藥 生脈注射液(雅安三九藥業(yè)有限公司，規(guī)格:50 mL，批號(hào):131008050);五味子醇甲對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司，規(guī)格:20 mg，批號(hào):20130905);5%GS(批號(hào):14010892)、10%GS(批號(hào):13091698)、0.9%NS(批號(hào):14023092)、GNS(批號(hào):14011695)，均由安徽豐原藥業(yè)股份有限公司提供;SLR(中國(guó)大冢制藥有限公司，批號(hào):4D88G4);甲醇為色譜純;水為純化水。

2 方法及結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取五味子醇甲對(duì)照品1.0 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制備成 100 mg·L－1的儲(chǔ)備液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取5瓶生脈注射液(規(guī)格:50 mL)，分別用100 mL 5%GS、10%GS、0.9%NS、GNS和SLR調(diào)配為成品輸液(成品1～5)。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［3-5］色譜柱:Inertsil ODS-SP(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇—水(57∶43);流速:1 mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm;柱溫:35℃;進(jìn)樣量:20μL。按上述色譜條件，分別注入五味子醇甲對(duì)照品溶液(4 mg·L－1)，成品輸液及空白輸液，五味子醇甲對(duì)照品出峰時(shí)間為9.250 min，理論塔板數(shù)按五味子醇甲計(jì)不低于3 000，陰性對(duì)照處未見(jiàn)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 用移液槍精密移取貯備液100、200、400、600、800、1 000 μL 分別置于10 mL 容量瓶中，依次用甲醇定容至刻度，得 1、2、4、6、8、10 mg·L－1的對(duì)照品溶液。按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=49 031X－648.52，r=0.999 8。結(jié)果表明，五味子醇甲質(zhì)量濃度在1～10 mg·L－1范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 取“2.3.1”項(xiàng)下 2、4、6 mg·L－1的對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，同一濃度連續(xù)進(jìn)樣3次，RSD分別為0.47%，0.35%，0.21%。

2.3.3 回收率試驗(yàn) 取已知濃度的生脈注射液4 mL置于10 mL的容量瓶中，精密加入100 mg·L－1的對(duì)照品溶液 380μL，分別用 5%GS、10%GS、0.9%NS、GNS和 SLR 定容至刻度，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣。每種輸液平行操作6次，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 穩(wěn)定性考察

2.4.1 外觀及pH檢測(cè) 在室溫條件下，分別于0、2、4、6、8 h測(cè)定5種成品輸液的 pH，并觀察其外觀變化情況，結(jié)果表明，在8 h內(nèi)外觀均呈淡黃色，pH均在6～7之間，且符合2010版《中國(guó)藥典》輸液標(biāo)準(zhǔn)(pH4～9)的規(guī)定，即生脈注射液用5種溶媒調(diào)配后的成品輸液在8 h內(nèi)外觀及pH均無(wú)明顯變化，表明外觀及pH穩(wěn)定性良好，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 成品輸液外觀及pH檢測(cè)結(jié)果

2.4.2 不溶性微粒檢測(cè) 在室溫條件下，分別于0、2、4、6、8 h 測(cè)定 5 種成品輸液的不溶性微粒數(shù)，不溶性微粒檢測(cè)方法同《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄IX R不溶性微粒檢查法(光阻法)。標(biāo)示裝量為25 mL或25 mL以上的靜脈用注射液，除另有規(guī)定外，取成品輸液，用水將輸液袋外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，先倒出部分輸液沖洗開(kāi)啟口及取樣杯，再將輸液倒入取樣杯中，靜置2 min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上。開(kāi)啟攪拌，使溶液混勻(避免氣泡產(chǎn)生)，依法測(cè)定4次，每次取樣不少于5 mL，第1次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)3次測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。結(jié)果表明，生脈注射液與5%GS、10%GS、0.9%NS、GNS 調(diào)配的成品輸液，4 h 內(nèi)不溶性微粒均符合《中國(guó)藥典》2010年版一部標(biāo)準(zhǔn)，但與SLR調(diào)配的成品輸液中≥10μm不溶性微粒數(shù)超出該標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 成品輸液不溶性微粒檢測(cè)結(jié)果/?！L－1

2.4.3 含量測(cè)定 取5種成品輸液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件于0、2、4、6、8 h 分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，代入線性回歸方程計(jì)算五味子醇甲的含量，同時(shí)以0 h的含量為100%分別計(jì)算5種成品輸液在2、4、6、8 h的相對(duì)含量，結(jié)果表明，5種成品輸液在8 h內(nèi)含量無(wú)明顯變化，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 各成品輸液中五味子醇甲的相對(duì)含量變化(±s)

表4 各成品輸液中五味子醇甲的相對(duì)含量變化(±s)

注:成品1～5分別為5%GS、10%GS、0.9%NS、GNS和SLR與生脈注射液調(diào)配的成品輸液。

時(shí)間/h 成品1/% 成品2/% 成品3/% 成品4/% 成品5/%0 100 100 100 100 100 2 99.27 ±0.21 97.40 ±0.80 100.21 ±0.35 103.07 ±0.19 103.58 ±0.38 4 98.58 ±0.60 97.31 ±0.36 98.48 ±0.56 100.50 ±0.35 100.03 ±0.51 6 98.27 ±0.38 97.78 ±0.65 100.36 ±0.73 103.73 ±0.42 100.97 ±0.62 8 98.61 ±0.42 98.07 ±0.29 99.85 ±0.22 97.37 ±0.67 98.63 ±0.37

3 討論

生脈注射液的性狀為淡黃色澄明液體，用5種輸液調(diào)配后的成品輸液，在進(jìn)行外觀及pH檢測(cè)時(shí)，無(wú)明顯的變化。

靜脈輸液中微粒過(guò)多會(huì)造成局部血管堵塞，供血不足，產(chǎn)生靜脈炎和水腫、肉牙腫、過(guò)敏反應(yīng)、熱源樣反應(yīng)等［6－7］?！吨袊?guó)藥典》2010年版一部規(guī)定標(biāo)示裝量為100 mL或100 mL以上的靜脈用注射液，除另有規(guī)定外，每1 mL中含10μm及10μm以上的微粒不得過(guò)25粒，含25μm及25μm以上的微粒不得過(guò)3粒［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用5%GS、10%GS、0.9%NS及GNS調(diào)配的成品輸液在4 h內(nèi)不溶性微粒數(shù)符合該標(biāo)準(zhǔn)。但與SLR調(diào)配的成品輸液≥10μm不溶性微粒數(shù)超出該標(biāo)準(zhǔn)。各成品輸液隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，其不溶性微粒數(shù)增加，8 h后均超過(guò)《中國(guó)藥典》2010年版一部之規(guī)定。導(dǎo)致不溶性微粒不合格的原因有很多，一方面可能是由于中成藥成分復(fù)雜，一些成分如色素、鞣質(zhì)、淀粉、蛋白質(zhì)等以膠態(tài)形式存在于藥液中，另一方面可能是因?yàn)樗幬锱c輸液調(diào)配后發(fā)生氧化、聚合等反應(yīng)［9］，其次一些生物堿、皂苷在調(diào)配后由于pH值改變而析出，這些因素都可能導(dǎo)致不溶性微粒大大增加［10］。

由于HPLC具有高效、高靈敏度、速度快等優(yōu)點(diǎn)，故本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定生脈注射液中五味子醇甲的含量。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)多次實(shí)驗(yàn)摸索流動(dòng)相系統(tǒng)及比例，最終確定流動(dòng)相為甲醇∶水(57∶43)，此時(shí)的分離效果較好，出峰時(shí)間及峰面積值均較為理想。根據(jù)《藥品注射劑使用指南》2005年版有關(guān)規(guī)定，在靜脈注射液中大于10% 的有效成分被分解，則認(rèn)為該藥品與輸液不宜配伍。五味子醇甲在5%GS、10%GS、0.9%NS、GNS 及 SLR 配伍液中 8 h含量下降均未超出10%。說(shuō)明五味子醇甲在該五種輸液中穩(wěn)定。

此次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明，生脈注射液采用5%GS、10%GS、0.9%NS和GNS調(diào)配后成品輸液的穩(wěn)定性均較好，但建議臨床調(diào)配后4 h內(nèi)使用。

中藥注射液是中藥劑型現(xiàn)代化的產(chǎn)物，是我國(guó)中醫(yī)藥文化的組成部分，是現(xiàn)代中醫(yī)藥創(chuàng)新的成果，已經(jīng)成為臨床疾病治療的獨(dú)特手段，正在發(fā)揮著不可替代的作用。

中藥注射劑在活血化淤、改善微循環(huán)方面起到了西藥不可替代的作用，但是由于中藥注射劑成分比較復(fù)雜，多為復(fù)方制劑，穩(wěn)定性差［11］，而有關(guān)應(yīng)用基礎(chǔ)研究薄弱，臨床使用常出現(xiàn)不良反應(yīng)［12］。且中藥注射劑的成品輸液缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)成品輸液的性狀、pH值、不溶微粒數(shù)、藥品含量等沒(méi)有規(guī)范要求，導(dǎo)致直接給患者使用的成品輸液質(zhì)量無(wú)法控制，給患者用藥帶來(lái)嚴(yán)重安全風(fēng)險(xiǎn)。我國(guó)應(yīng)盡快制訂更加嚴(yán)格的靜脈用藥成品輸液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，臨床上中藥注射液調(diào)配后的成品輸液，只有在通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)后，方可用于患者［13］。

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