孫 曉，郭耀武，劉 越，王國(guó)海

(1.陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西咸陽(yáng) 712046;2.陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西西安 710065)

蛇菰是具有地方特色的民間草藥。據(jù)《本草綱目》記載，蛇菰又稱“葛花菜”、“葛乳”，李時(shí)珍曰“諸名山皆有之，惟太和山采取，云乃葛之精華也。秋霜浮空，如芝、菌涌生地，其色赤脆，蓋蓋蕈類也”［1］。蛇菰屬植物為全寄生植物，寄主多分布在海拔500～2 600 m的多種林木，植株大多在中秋前后露出地面，生長(zhǎng)季節(jié)性強(qiáng)，生長(zhǎng)期短，資源稀少［2-3］。文獻(xiàn)記載多分布于江西、湖北、湖南、廣西、四川、云南、臺(tái)灣、福建等省區(qū)。本文研究所采的宜昌蛇菰，是首次在秦嶺北坡發(fā)現(xiàn)。文獻(xiàn)報(bào)道蛇菰屬植物具有保肝補(bǔ)肝［4］，益腎壯陽(yáng)［5］，止血生肌［6］，調(diào)經(jīng)活血，清解酒毒之功效［7］，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其還具有抗疲勞，抗衰老［8-9］，抗氧化活性［10］。本文對(duì)蛇菰屬宜昌蛇菰的生藥學(xué)特征做了系統(tǒng)觀察;同時(shí)采用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分析法對(duì)其體外抗氧化活性進(jìn)行研究［11］，對(duì)指導(dǎo)宜昌蛇菰的藥用研究具有積極意義。

1 材料與試劑

宜昌蛇菰，2013年9月采于陜西秦嶺北坡周至縣境內(nèi)，經(jīng)郭耀武主任藥師鑒定為宜昌蛇菰;水合氯醛、稀甘油均為分析純;維生素C標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):100425-201103)，購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;DPPH，Sigma-Aldrich公司;水(純化水)，石油醚，乙酸乙酯，正丁醇，無(wú)水乙醇等，均為分析純。

德國(guó)賽多利斯Sartorius BP系列天平;奧林巴斯雙目生物顯微鏡。UV2550-紫外分光光度計(jì)，日本島津公司;電熱套;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國(guó)Heidolph公司。

2 宜昌蛇菰生藥學(xué)研究

2.1 藥材性狀 宜昌蛇菰，植株矮小成圓柱狀，頂端膨大類圓形，根莖褐紅色，表面粗糙外被鱗苞片，紅色?；ù菩郛愔辏刍ɑū涣哑?片;聚藥雄蕊，花藥3個(gè);質(zhì)地較脆，易折斷，氣微，味甘、苦。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 莖橫切面 表皮細(xì)胞單列，類圓形體積較小，排列緊密。表皮內(nèi)側(cè)幾乎全部為基本薄壁組織，無(wú)皮層、中柱和髓部的分化。薄壁細(xì)胞呈類圓形或橢圓形，直徑35～90 μm，排列較疏松。外韌型維管束散在，形成層不明顯，油細(xì)胞散在于薄壁細(xì)胞中。見(jiàn)圖1。

2.2.2 鱗葉橫切面 彎曲呈新月形。表皮細(xì)胞1列，排列緊密。葉肉組織無(wú)柵欄組織和海綿組織的分化，薄壁細(xì)胞類圓形，直徑43～129 μm，維管束散偏向于上表皮一側(cè)，橫切面觀呈現(xiàn)類似等面葉的特征，這可能與植株生長(zhǎng)在林下陰濕環(huán)境有關(guān)，區(qū)別與一般雙子葉植物異面葉特征。見(jiàn)圖2。

2.2.3 根部切面 根部呈不規(guī)則團(tuán)塊，與寄主緊密連接。切面可見(jiàn)寄主的組織，薄壁細(xì)胞類圓形，維管束散在，無(wú)明顯特征規(guī)律。

3 宜昌蛇菰各部位不同溶劑提取物抗氧化活性測(cè)定比較

3.1 樣品處理 藥材晾干，手工分成根、莖葉、花三部分，各自粉碎，用75%乙醇回流提取3次，每次2 h，提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無(wú)醇味，得宜昌蛇菰乙醇提取物水溶液［12］。各部位水溶液依次用石油醚萃取至無(wú)色得到石油醚層萃取液，乙酸乙酯萃取至無(wú)色得到乙酸乙酯層萃取液，正丁醇萃取至無(wú)色得到正丁醇層萃取液。將各萃取液合并后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至成浸膏狀，分別轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)皿中，置烘箱中干燥，干燥后得到各固體待測(cè)樣品，保存于干燥器中備用。

精密稱定各待測(cè)樣品50 mg，維生素C標(biāo)準(zhǔn)品50 mg，分別用無(wú)水乙醇溶解定容至50 mL容量瓶中，配制成質(zhì)量濃度為1 g·L-1的儲(chǔ)備溶液。

DPPH是穩(wěn)定的自由基，當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于與其單電子配對(duì)而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因此廣泛用于定量測(cè)定生物試樣和食品的抗氧化能力［13-14］。精密稱取DPPH 100 mg，無(wú)水乙醇溶解并定容至100 mL棕色容量瓶，配制成質(zhì)量濃度為1 g·L-1的DPPH儲(chǔ)備試液。無(wú)水乙醇稀釋到所需各個(gè)濃度，并做吸收曲線，結(jié)果表明DPPH在517 nm處有最大吸收。在0.005～0.150 g·L-1間線性良好，線性方程:Y=15.893 93X+0.000 01，r2=0.999 97。

3.2 各部位提取物抗氧化性活性測(cè)定 將各待測(cè)樣品儲(chǔ)備液1 g·L-1分別用無(wú)水乙醇稀釋到所需各濃度，分別精密吸取2 mL各濃度待測(cè)樣品溶液，分別加入到2 mL質(zhì)量濃度為0.08 g·L-1的DPPH試液中，室溫避光反應(yīng)10 min，于517 nm平行測(cè)三次取平均值，得到各個(gè)樣品不同濃度的溶液吸光度Ai;同法以無(wú)水乙醇為空白加入到DPPH試液中，測(cè)得空白吸光度A0;同法用無(wú)水乙醇代替DPPH試液與樣品反應(yīng)測(cè)得樣品本地吸光度Aj。同法用維生素C代替樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。得到各個(gè)數(shù)據(jù)求出DPPH清除率，并進(jìn)一步計(jì)算其自由基清除率IC50值。見(jiàn)表1。

表1 宜昌蛇菰各部位提取物對(duì)DPPH的清除率/%

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與小結(jié) 各濃度實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明宜昌蛇菰各部位提取物對(duì)DPPH的清除效果隨濃度增大而呈增大趨勢(shì)，但當(dāng)樣品濃度到達(dá)一定濃度后，對(duì)DPPH清除率雖然也隨濃度增大而增加，但是逐漸趨于平緩。同一溶劑條件，宜昌蛇菰花、莖葉、根等三部位對(duì)DPPH清除作用無(wú)明顯差異。宜昌蛇菰同一部位用不同溶劑萃取，所得提取物對(duì)DPPH清除效果有明顯差異，乙酸乙酯提取物活性和維生素C相似，正丁醇提取物活性小于維生素C，乙酸乙酯提取物活性大于正丁醇提取物活性。

4 討論

秦嶺產(chǎn)宜昌蛇菰的莖與鱗葉橫切面顯示其具有初生構(gòu)造的特征，莖橫切面表皮以內(nèi)為基本薄壁組織，無(wú)皮層、中柱和髓部的分化，維管束不規(guī)則散在，莖特征與單子葉植物莖的顯微構(gòu)造類似，可能與其生長(zhǎng)周期較短，僅保留初生生長(zhǎng)有關(guān);葉肉組織中無(wú)海綿組織和柵欄組織的分化，這些均區(qū)別于雙子葉植物異面葉特征，可能與其陰暗潮濕的生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)。借助于這些結(jié)構(gòu)特征，對(duì)以后宜昌蛇菰的品種鑒定提供參考依據(jù)。

秦嶺產(chǎn)宜昌蛇菰具有明顯的體外抗氧化活性，且各部位活性相當(dāng)，故提示其藥用部位應(yīng)為全株入藥。不同溶劑間的抗氧化活性比較有所差異，本實(shí)驗(yàn)的抗氧化活性成分多聚集在乙酸乙酯層，提示提取時(shí)應(yīng)選擇合適溶劑，盡可能完全溶出所需成分。

［1］米長(zhǎng)忠，周衛(wèi)華，彭英福，等.湘西產(chǎn)筒鞘蛇菰生態(tài)環(huán)境及寄主植物初探［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，31(11):38-39.

［2］陳吉炎，李 聰，王雪芹，等.蛇菰屬藥用植物的種類與研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(8):2032-2034.

［3］陳吉炎，李 聰，張路路，等.疏花蛇菰的生藥鑒別［J］.中藥材，2010，33(9):1395-1397.

［4］周衛(wèi)華，石慧娟，楊梅松竹，等.蛇菰水提物對(duì)大鼠酒精性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012，10(32):4438-4440.

［5］覃大保，米長(zhǎng)忠，楊 力，等.筒鞘蛇菰壯陽(yáng)作用的研究［J］.中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2014，4(4):45-46.

［6］侯欽云，戴 忠，程顯隆，等.5中蛇菰的化學(xué)成分比較研究［J］.藥物分析雜志，2009，29(5):697-701.

［7］陸應(yīng)彩，彭 霞，臺(tái)海川，等.傣藥思茅蛇菰薄層色譜鑒別［J］.中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2011，11(11):38.

［8］何 玲，高 輝，李春艷.筒鞘蛇菰多糖抗疲勞作用研究［J］.懷化學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，30(11):43-45.

［9］侯文斌，周麗麗，周衛(wèi)華.蛇菰水提物對(duì)自然衰老小鼠的抗衰老作用研究［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2012，21(3):33.

［10］王 慧，張紅岐，鄔昊洋，等.筒鞘蛇菰提取物及松柏苷的抗氧化作用研究［J］.三峽大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，31(3):99-101.

［11］劉長(zhǎng)龍，雷 慧，趙其秀，等.楊樹芽提取物清除DPPH自由基的作用［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17(7):1091-1093.

［12］楊黎江，路金榮，王曉娟，等.蛇菰多糖的提取及測(cè)定［J］.昆明學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，32(3):44-46.

［13］鄧 靖，莫正昌，汲廣全，等.蛇菰提取物體外抗氧化活性研究［J］.食品科學(xué)，2010，31(5):23-25.

［14］成利娟，蘇 涌，楊 翠，等.小麥胚芽油體內(nèi)外抗氧化作用的研究［J］.安徽醫(yī)藥，2013，17(8):1289-1291.