徐殿紅 孫永成,2 蕭 偉,2 陶永華,2 秦建平,2 陳利平

溫度對(duì)龍血竭酚類提取物純化工藝的影響

徐殿紅1孫永成1,2蕭 偉1,2陶永華1,2秦建平1,2陳利平1

目的 評(píng)價(jià)溫度對(duì)龍血竭酚類提取物純化過(guò)程中成分及性狀的影響。方法 采用高效液相色譜法、粉末堆積密度檢測(cè)方法，以有效成分轉(zhuǎn)移率及提取物堆密度為指標(biāo)，考察純化過(guò)程中堿溶解溫度以及酸沉溫度對(duì)龍血竭酚類提取物的指標(biāo)成分及性狀的影響。結(jié)果 龍血竭酚類提取物純化過(guò)程中堿溶解、酸沉溫度均以選擇65 ℃為最佳。結(jié)論 選擇優(yōu)化的純化溫度，制備得到龍血竭酚類提取物各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率較高，堆密度及性狀符合要求。

溫度；龍血竭酚類提取物；純化；堆密度

龍血竭是百合科龍血樹(shù)屬植物劍葉龍血樹(shù)Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen的含脂木材經(jīng)提取得到的樹(shù)脂，具有活血散瘀、定痛止血、斂瘡生肌等功效，主要含有黃酮類、皂苷類、甾醇類、萜類和其他化合物[1]。藥理研究結(jié)果表明，龍血竭黃酮類成分（屬酚類化合物）具有明顯的抗血栓、抑制血小板聚集、抗心肌和腦缺血、改善血液流變學(xué)等作用。黃酮類化合物因分子中多有酚羥基而呈酸性，故可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。本文在前期研究確定對(duì)龍血竭提取濃縮干燥后的干膏采用0.35% NaOH溶液溶解、溶液用10% HCl溶液沉淀方式純化的基礎(chǔ)上，研究對(duì)堿溶解酸沉淀時(shí)的溫度對(duì)純化效果的影響，優(yōu)選最佳堿溶酸沉溫度[2]。

1 材料與儀器

1.1 材料 龍血竭提取干膏粉（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)130401）；7,4'-二羥基黃酮（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111787-201002）；龍血素A（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111660-200301）；龍血素B（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111558-201006）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。1.2 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；METTLER TOLEDO AB204-S電子分析天平；METTLER TOLEDO pH計(jì)；JJ-1B恒速?gòu)?qiáng)力電動(dòng)攪拌器；HY-08高速粉碎機(jī)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相乙腈（A）-1%冰醋酸（B），梯度洗脫，0～10 min，25%～44% A，10～40 min，44% A；流速1 ml/min；柱溫40 ℃；龍血素A、龍血素B檢測(cè)波長(zhǎng)278 nm，7,4'-二羥基黃酮檢測(cè)波長(zhǎng)319 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密量取龍血素A、龍血素B、7,4'-二羥基黃酮20.09、24.93、18.51 mg，分別加入 100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得混合對(duì)照品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.2、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分別加入10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y），以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X）計(jì)算回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照品線性范圍、回歸方程及相關(guān)系數(shù)表

2.4 最佳堿溶解溫度考察

2.4.1 供試品溶液的制備 稱取10.5 g NaOH，放置燒杯中，加水溶解至3 000 g，同法配制6份，分別加熱至35、45、55、65、75、85 ℃；另取龍血竭提取干膏粉600 g，平均分成6份，分別投入到上述6份不同溫度的NaOH溶液中，攪拌30 min使其溶解，濾過(guò)，放置至室溫，備用。另取堿溶液2 g，精密稱定，加入10 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4.2 取2.4.1項(xiàng)下制備的供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，供試品中龍血素A、龍血素B、7,4'-二羥基黃酮含量見(jiàn)表2。

表2 不同溫度堿溶液中龍血素A、龍血素B、7,4'-二羥基黃酮轉(zhuǎn)移率(%)

2.4.3 堿溶液固含物測(cè)定 分別取堿溶液20 g，精密稱定，置預(yù)先恒重后的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105 ℃干燥至恒重，計(jì)算干膏率，35 ℃時(shí)堿溶液干膏率為77.29%、45 ℃時(shí)堿溶液干膏率為72.25%、55 ℃時(shí)堿溶液干膏率為71.70%、65 ℃時(shí)堿溶液干膏率為69.16%、75 ℃時(shí)堿溶液干膏率為65.93%、85 ℃時(shí)堿溶液干膏率為60.92%。

2.5 最佳酸沉溫度考察

2.5.1 供試品溶液的制備 稱取10.5 g NaOH，放置燒杯中，加水溶解至3 000 g，同法配制6份，水浴加熱至65 ℃；另取龍血竭提取干膏粉600 g，平均分成6份，分別投入到上述NaOH溶液中，攪拌30 min使溶解，濾過(guò)，濾液在溫度為75、65、55、45、35、25 ℃條件下，加入10% HCl，調(diào)pH 1～2，靜置24 h，去掉上清液，觀察沉淀物性狀，沉淀離心（5000 r/min），收集沉淀物，水洗至中性，減壓干燥、粉碎。取提取物20 mg，精密稱定，放置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.5.2 取2.5.1項(xiàng)下制備的供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件檢測(cè)，供試品中龍血素A、龍血素B、7,4'-二羥基黃酮含量見(jiàn)表3。

表3 不同溫度酸沉提取物中龍血素A、龍血素B、7,4'-二羥基黃酮轉(zhuǎn)移率(%)

2.5.3 堆密度測(cè)定 不同溫度酸沉提取物堆密度檢測(cè)結(jié)果顯示，溶解溫度為35 ℃時(shí)其堆密度為0.56、45 ℃時(shí)其堆密度為0.51、55 ℃時(shí)其堆密度為0.46、65 ℃時(shí)其堆密度為0.43、75 ℃時(shí)其堆密度為0.42、85 ℃時(shí)其堆密度為0.39。

3 結(jié)論

3.1 由最佳堿溶解溫度考察結(jié)果可知，龍血竭提取干膏粉在 65 ℃堿溶液中溶解時(shí)，各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率最高，70 ℃稍次之；干膏率隨溫度上升呈遞減趨勢(shì)。考慮到盡可能保證各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率，并最大限度去除雜質(zhì)，因此，選擇龍血竭提取干膏粉最佳堿溶解溫度為65 ℃。

3.2 由最佳酸沉溫度考察結(jié)果可知，龍血竭干膏粉堿溶液在25～65 ℃酸沉?xí)r，各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率相差不大，但所得沉淀物性狀及堆密度差異較大，結(jié)合制劑生產(chǎn)時(shí)堆密度的需求，選擇酸沉?xí)r堿溶液溫度為65 ℃。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)選擇在不同溫度下對(duì)龍血竭提取干膏粉進(jìn)行堿溶解、酸沉，結(jié)果表明，在溫度為65 ℃條件下堿溶解、酸沉所得到的龍血竭酚類提取物各指標(biāo)成分轉(zhuǎn)移率較高，堆密度符合要求。

龍血竭提取干膏粉在 35～65 ℃堿溶液中溶解時(shí)，溶液呈紅棕色，沉淀呈深紅棕色略微發(fā)紫的粉末狀，在75～85 ℃堿溶液中溶解時(shí)，溶液呈紅棕色，沉淀呈深紅棕色略微發(fā)紫的黏稠膠體狀；酸沉?xí)r，溶液溫度在55～75 ℃時(shí)，沉淀物呈顆粒狀，略有黏性，25～45 ℃時(shí)，沉淀物呈泥漿狀，特別細(xì)膩，考慮可能與龍血竭藥材樹(shù)脂類的理化性質(zhì)有關(guān)。

[1] 屠鵬飛,陶晶,胡迎慶,等.龍血竭黃酮類成分研究[J].中國(guó)天然藥物,2003,1(1):27-29.

[2] 屠鵬飛,王鈺芳,邵杰,等.龍血竭中黃酮類成分提取工藝研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(6):30-32.

Temperature on the Dragon's Blood Phenol Extraction and Purification Process

Xu Dianhong Sun Yongcheng Xiao Wei Tao Yonghua Qin Jianping Chen Liping

Objective Temperature on the dragon's blood phenol extraction and purification process of composition and the influence of the shape.Methods Using HPLC method,powder bulk density detection method,in order to transfer rate and extract effective components bulk density as an index,purification process of alkali dissolving temperature and temperature of dragon's blood phenolic acid extract the influence of the purity and properties.Results Dragon's blood phenol extraction and purification process,acid alkali dissolve all choose to sink temperature 65 ℃.Conclusion Temperature purifying selection optimization,prepared from phenolic extracts including exhaust all indexes higher transfer rate,bulk density and capsule filling volume stability and meet the requirements.

Temperature;Dragon's blood phenolic extracts;Purification;Bulk density

R943;TQ460.6

A

1673-5846(2015)04-0016-02

1江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222047

2中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇連云港 222047