陳佩東， 薛 露， 嚴 輝， 張 麗， 丁安偉

（南京中醫(yī)藥大學江蘇省方劑高技術研究重點實驗室江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇南京210023）

厚樸 “發(fā)汗”工藝的研究

陳佩東， 薛 露， 嚴 輝， 張 麗*， 丁安偉

（南京中醫(yī)藥大學江蘇省方劑高技術研究重點實驗室江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇南京210023）

目的 研究厚樸中主要成分及水分的含有量在不同 “發(fā)汗”（堆放和自然干燥）工藝下的變化。方法 以20年樹齡的厚樸干皮為研究對象，以厚樸酚及和厚樸酚為評價指標，采用HPLC-MS法分析其主要成分。結果 厚樸中厚樸酚及和厚樸酚的總含有量為1.93%，“發(fā)汗”8 d后增至4.55%。覆膜水微蒸 “發(fā)汗”時，兩者含有量最高，并且水分顯著下降。樣品經HPLC-MS分析，鑒定出8個主要成分。結論 厚樸的最佳 “發(fā)汗”工藝為水蒸15 min后，以塑料薄膜包裹，“發(fā)汗”8 d。

厚樸；“發(fā)汗”；厚樸酚；和厚樸酚；水分；HPLC-MS

厚樸為木蘭科木蘭屬植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils或凹葉厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮，具有燥濕消痰，下氣除滿的功效［1］，其主要成分為新木脂素類［2］、生物堿類［3］和萜類［4］，具有鎮(zhèn)痛［5］、抗痙攣［6］、 抗抑郁［7］、抗感染［8］、解熱［9］及細胞毒性［10］等活性。厚樸加工需作 “發(fā)汗”（堆放和自然干燥）處理，經 “發(fā)汗”后，其中的木脂素類成分增加［11-12］，并且能提高藥材的干燥程度［13］，但相關機理尚未明確，故目前沒有統(tǒng)一的 “發(fā)汗”方法和工藝。由于新木脂素化合物厚樸酚、和厚樸酚是厚樸中的主要成分，因此本實驗通過考察不同 “發(fā)汗”工藝對厚樸中這兩種成分含有量及水分的影響，結合HPLCMS分析，用于探討最佳的 “發(fā)汗”工藝，為厚樸的加工方法和 “發(fā)汗”機理研究提供科學依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 2695 HPLC色譜儀，包括DAD檢測器、Empower色譜工作站（美國Waters公司）；AY220電子分析天平 （日本島津公司）；MS-105DU分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；DHG-9023A電熱鼓風干燥箱 （上海精宏實驗設備有限公司）；TGL-16C高速離心機 （上海安亭科學儀器廠）。

AB SCIEX Triple TOFTM5600 HPLC-MS系統(tǒng)、島津LC-20A快速液相，包括LC-20 ADXR泵、SIL20AXR自動進樣器（日本島津公司）；Analyst TF 1.6、Peak View分析軟件（美國AB公司）。

1.2 試劑 厚樸酚 （批號20131104）、和厚樸酚（批號20140123）對照品 （江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院）。甲醇為色譜純 （江蘇漢邦科技有限公司，批號20140509）；超純水 （自制）；其他試劑均為分析純。

1.3 藥材 厚樸于2014年4月17日采自安徽省六安市霍山縣漫水河鄉(xiāng)，由當?shù)厮庌r根據不同生長年限 （5、10、20年）采收，經南京中醫(yī)藥大學鑒定教研室劉圣金副教授鑒定為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.etWils的皮及根皮。

2 方法與結果

2.1 “發(fā)汗”樣品制備 取20年樹齡的厚樸新鮮樹皮適量，切成30 cm短段，交叉置于60 cm鋁鍋內，加蓋蒸或煮，“發(fā)汗”時堆放高度為30 cm，青草覆蓋厚度為10 cm，塑料薄膜覆蓋面積為1 m2。將樣品蒸15 min左右后，堆放在陰濕處，以青草覆蓋， “發(fā)汗”至內表面呈紫褐色或棕褐色，標號 “草蒸”；以塑料薄膜覆蓋，“發(fā)汗”至內表面呈紫褐色或棕褐色時，標號 “膜蒸”。另取樣品煮10 min左右后，堆放在陰濕處，以青草覆蓋，“發(fā)汗”至內表面變成紫褐色或棕褐色，標號 “草煮”；以塑料薄膜覆蓋，“發(fā)汗”至內表面變成紫褐色或棕褐色，標號 “膜煮”。接著，將 “發(fā)汗”后的樣品分別于60℃恒溫下干燥，打粉，過三號篩。

2.2 樣品測定

2.2.1 供試液的制備 精密稱取各厚樸樣品粉末（過3號篩）0.2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸泡24 h，過濾，精密量取續(xù)濾液5 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 對照液的制備 精密稱取厚樸酚、和厚樸酚對照品適量，加甲醇分別制成每1 mL含厚樸酚40μg、和厚樸酚20μg的溶液，即得。

2.2.3 色譜分析條件 Agilent Extend C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，1.7μm）；流動相為水（A）-甲醇 （B）（22：78），等度洗脫；體積流量1 mL/min；柱溫30℃；進樣量4μL；檢測波長294 nm。

2.2.4 質譜條件 電噴霧離子源 （ESI），動態(tài)背景扣除 （DBS）和觸發(fā)信息關聯(lián)采集模式 （IDA）；正負離子模式下采集；霧化器 （GS1）55 psi；輔助加熱器（GS2）55 psi；氣簾氣（Curtain Gas）40 psi；離子源溫度 （TEM）500℃；噴霧電壓（IS）-4 500 V；去簇電壓 （DP）-80 V；碰撞能量（CE）10 V；掃描范圍m/z100～1 200。

2.2.5 “發(fā)汗”工藝研究 根據 《中國藥典》2010年版厚樸中厚樸酚、和厚樸酚含有量的測定方法，按 “2.2.1”項下方法制備供試品溶液，分別進樣4μL，記錄峰面積，每份溶液連續(xù)進樣2次，以峰面積平均值為指標，按標準曲線法計算含有量。

首先，對不同樹齡厚樸鮮皮中這兩種成分含有量進行測定，結果見表1。由表可知，其與樹齡有關，在20年樹齡皮中最高，并且和厚樸酚顯著低于厚樸酚。

表1 不同年份厚樸中和厚樸酚、厚樸酚的含有量 （n=3）Tab.1 Contents of honokioI and magnoIoI in differen t years of Magnolia officinalis（n=3）

將20年樹齡鮮皮水煮后堆積，以薄膜覆蓋的方式進行 “發(fā)汗”，每2天測定一次木脂素含有量，結果見表2。由表可知，“發(fā)汗”開始后，木脂素含有量逐漸增加，在第8天時達到最高，而且基本穩(wěn)定，故 “發(fā)汗”時間定為8 d。

表2 不同 “發(fā)汗”時間對厚樸中和厚樸酚、厚樸酚含有量的影響（n=3）Tab.2 Effectsof different“Fahan”time on the contentsof honokioIand magnoIoI in Magnolia officinali（n= 3）

另取鮮厚樸皮，按 “2.1”項下方法 “發(fā)汗”

8 d，測定木脂素的含有量，結果見表3。由表可知，樣品 “發(fā)汗”前以水蒸為佳，而 “發(fā)汗”時以覆蓋塑料薄膜為佳。

表3 不同 “發(fā)汗”方法對厚樸中和厚樸酚、厚樸酚含有量的影響（n=3）Tab.3 Effects of different“Fahan”methods on the contents of honokioI and magnoIoI in Magnolia officinalis（n=3）

最后，稱取鮮厚樸皮適量，蒸15 min或煮10 min，分2組進行 “發(fā)汗”處理，一組用塑料薄膜覆蓋，而另一組用青草覆蓋，再分別取厚樸堆上、中、下層三塊厚樸，在蒸或煮后、 “發(fā)汗”2、4、6、8 d時稱重，計算水分含有量。結果，其中水分含有量的平均值為59.25%，并且煮或蒸后均明顯增加，但隨著 “發(fā)汗”進行，厚樸皮重量減少了33.7%～39.1%，表明水分逐步下降。其中，“膜煮”后平均減少35.40%， “草蒸”后平均減少36.08%，下降程度均較明顯。

2.2.6 “發(fā)汗”后厚樸液質分析 本實驗對 “膜蒸”后的樣品進行了HPLC-MS分析，經高分辨質譜分子量和文獻對照，鑒定了其中8個主要成分，見圖1和表4。

圖1 厚樸負離子模式HPLC-MS總離子流圖（254 nm）Fig.1 HPLC-M S totaI ion current chromatogram of M agnolia officinalis in the negative ion m ode（254 nm）

表4 厚樸主要成分Tab.4 M ain constituents in Magnolia officinalis

3 討論

研究和改進藥材加工方式，提高藥材品質，使其更有利于臨床應用，是厚樸研究的重要內容?！鞍l(fā)汗”是藥材加工的重要環(huán)節(jié)，可促使其中水分發(fā)散、同系物在相關活性酶作用下轉化，提高藥物品質［22］。本實驗顯示，不同年份新鮮厚樸干皮的水分都接近60%，沒有表現(xiàn)出太大差異，但堆積“發(fā)汗”后，水分顯著下降，同時木脂素含有量明顯增加，可能與苯丙氨酸等氨基酸轉化酶的作用有關［23］，“發(fā)汗”過程能促進桂皮酸途徑生物轉化，生成木脂素類成分，從而使厚樸酚與和厚樸酚的含有量大幅度提高［24］?！鞍l(fā)汗”后的樣品經HPLCMS檢測，發(fā)現(xiàn)除厚樸的主要成分木脂素和生物堿外，還存在木脂素苷，包括含兩分子糖的化合物

Magnoloside A-6-O-glucoside（即Magnoloside B），說明厚樸 “發(fā)汗”過程中并沒有產生大量糖的水解酶。通?？刹捎们嗖莞采w進行 “發(fā)汗”，而本實驗以塑料薄膜為覆蓋物，價格適中，并且更具可操作性。綜上所述，厚樸經水蒸15 min后，以薄膜覆蓋 “發(fā)汗”8 d時所含厚樸酚與和厚樸酚的含有量最高，這可為今后厚樸藥材加工和 “發(fā)汗”機理研究提供依據。

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“Fahan”technoIogy of Magnolia officinalis

CHEN Pei-dong， XUE Lu， YAN Hui， ZHANG Li*， DING An-wei

（Nanjing University ofGhineseMedicine；Jiangsu Provincial Key Laboratory for High Technology Research of Traditional Ghinese Medicine Formulae；Jiangsu Provincial Gollaborative Innovation Genter of Ghinese Medicinal Resources Industrialization，Nanjing 210023，Ghina）

AIM To study the content changes ofmain constituents and water in Magnolia officinalis with different“Fahan”（herbs piled and naturally dried）technologies.METHODS The twenty-year-old M.Officinalis was taken as research object along with magnolol and honokiol as evaluation indices，themain constituents in this plantwere then analyzed by HPLC-MS.RESULTS The contents of magnolol and honokiol in M.Officinalis reached 1.93%and then increased to 4.55%after“Fahan”for eight days，“Fahan”with appreciably steaming and covered with plastic film approached the highest，and the content of water was significantly decreased.Eight chemical constituents were analyzed by HPLC-MS.CONCLUSION The optimal“Fahan”technology of M.officinalis is that after being steamed for15 minutes，this plant is covered with plastic film and“Fahan”for 8 days.

Magnolia officinalis；“Fahan”；magnolol；honokiol；water；UPLC-MS

R283

A

1001-1528（2015）11-2469-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.029

2015-04-07

江蘇省中藥資源產業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心重點項目（ZDXMHT-1-3）

陳佩東 （1970—），男，博士，副教授，從事中藥炮制和中藥質量標準研究。Tel：13851948464，E-mail：chenpeidong1970@ 163.com

*通信作者：張 麗（1971—），女，博士，從事中藥分析、中藥炮制研究。Tel：（025）85811524，E-mail：zhangliguanxiong@163.com