李 菲， 王伯初， 祝連彩

（重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，生物流變科學(xué)與技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400044）

熊膽粉與家禽膽粉中氨基酸和微量元素的比較分析

李 菲， 王伯初*， 祝連彩

（重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，生物流變科學(xué)與技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶400044）

目的 分別測定熊膽粉與雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉中氨基酸及微量元素的含有量，并進(jìn)行比較分析。方法 將新鮮的動(dòng)物膽汁制備成膽粉，再分別用氨基酸分析儀和原子吸收分光光度計(jì)測定其中的氨基酸和微量元素。結(jié)果 5類膽粉中游離氨基酸的含有量均較低，水解氨基酸的含有量依次為熊膽粉＜肉雞膽粉＜烏雞膽粉＜鵝膽粉＜鴨膽粉，其中熊膽粉為29.16 mg/g，而鵝膽粉為149.87 mg/g。它們均含有18種中無機(jī)元素，其中Ca、Na、P、K、Mg的含有量相對(duì)較高，而且其在熊膽粉中的含有量明顯低于其他家禽膽粉。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)可為從家禽膽粉中尋找熊膽粉替代品提供了一定的理論依據(jù)。

氨基酸；微量元素；熊膽粉；雞膽粉；鴨膽粉；鵝膽粉

熊膽是傳統(tǒng)名貴中藥［1-2］，《本草綱目》記載，熊膽味苦，性寒，歸肝、膽、心經(jīng)，無毒，能清熱、平肝、利膽、明目、殺蟲。熊膽粉是黑熊Selenretos thibetanus Cuvier的引流膽汁干燥品［3-4］；雞膽味苦，性寒，主治百日咳、慢性支氣管炎、中耳炎、痔瘡等，在臨床上已有應(yīng)用［5-8］；鴨膽與雞膽相似［5］，主含?；蛆Z去氧膽酸 （TCDCA）［7］，有利膽、溶解膽結(jié)石，促進(jìn)脂肪消化吸收、止咳祛痰平喘、降血脂、抗高血壓及抗菌等作用；鵝膽具有解熱毒、治初期痔瘡等功效，而從中醫(yī)角度看，鵝膽和熊膽的性味相同、功效相近［9］。研究表明，動(dòng)物膽汁的主要藥理作用來自于膽汁酸，但是非膽汁酸成分也有著不可忽略的地位，雖然關(guān)于膽汁酸成分已有很多文獻(xiàn)報(bào)道，但鮮有對(duì)非膽汁酸成分的研究。人們發(fā)現(xiàn)，氨基酸和微量元素在中藥藥效中起到一定作用［10-12］，但不同動(dòng)物膽粉中其研究報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)對(duì)熊膽粉、雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉中氨基酸和微量元素的種類及含有量進(jìn)行比較分析，為進(jìn)一步探討其藥理作用、開發(fā)熊膽粉、尋找相關(guān)替代品提供參考。

1 儀器與材料

1.1 材料與試劑 烏雞膽、肉雞膽、鴨膽、鵝膽 （重慶白市驛禽加工廠）；熊膽粉 （四川省新野生物制藥公司，批號(hào)20130411），經(jīng)鑒定，均符合 《中國藥典》2010年版規(guī)定。鹽酸、硝酸、三氯醋酸、高氯酸等均為優(yōu)級(jí)純 （國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為雙蒸水 （自制）。

1.2 儀器 L-8900日立氨基酸分析儀、色譜柱 （4.6 mm×60 mm，3μm）、專用離子交換樹脂 （日本株式會(huì)社日立制作所）；SHMADZU AA-6300C原子吸收分光光度計(jì)，波長為570、440 nm（700 nm參比）、M15524空心陰極燈（日本島津公司）。

2 方法

2.1 樣品處理 將新鮮的烏雞膽、肉雞膽、鴨膽、鵝膽用75%乙醇局部消毒后，剖膽取汁，盛入不銹鋼圓盆內(nèi)，-40℃下冰箱冷凍24 h，再放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)干燥48 h，即得烏雞膽粉、肉雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉，置于干燥器中保存。

2.2 氨基酸的測定

2.2.1 游離氨基酸的測定 樣品中加入5%～10%三氯醋酸，超聲（200W、25 KHz）10 min，7 000～10 000 r/min離心15min，澄清液用蒸溜水定量，0.45μm濾膜過濾，上機(jī)分析，重復(fù)3次，結(jié)果見表1。

2.2.2 水解氨基酸的測定 將樣品置于水解管內(nèi)，加入6 mol/L HCl，減壓狀態(tài)下封管，于110℃水解爐中加熱分解22 h，減壓干燥，除去HCl，加入0.02 mol/L HCl稀釋定量，0.45μm過濾器過濾，上機(jī)分析，每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，結(jié)果見表2。

2.3 微量元素的測定 稱取各膽粉樣品約200 mg，置于10 mL比色管中，加入硝酸：高氯酸 （4：1，V/V）的消化混合酸1 mL，160℃下在恒溫消化器中消化24 h至清澈液體，冷卻，蒸餾水定容，上機(jī)分析，每個(gè)樣品重復(fù)測定3次，結(jié)果見表3。

3 結(jié)果

3.1 氨基酸測定 熊膽粉與烏雞膽粉、肉雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉所含氨基酸的種類一致，均為17種。其中，游離狀態(tài)氨基酸的含有量均較低，依次為熊膽粉（0.107 g/100 g）＜肉雞膽粉（0.499 g/100 g）＜烏雞膽粉（1.029 g/100 g）＜鵝膽粉（1.738 g/100 g）＜鴨膽粉（1.908 g/100 g），熊膽

粉中僅存在痕量的酪氨酸、谷氨酸，鴨膽粉中其含有量最高，鵝膽粉次之，而且主要為精氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、丙氨酸。另外，肉雞膽粉中游離氨基酸的含有量低于烏雞膽粉，這也是烏雞營養(yǎng)價(jià)值高于肉雞的原因之一。

表1 游離氨基酸測定結(jié)果（n=3）

表2 水解氨基酸測定結(jié)果（n=3）

表3 微量元素測定結(jié)果（n=3）

從水解氨基酸的總量來看，熊膽粉（2.916 g/100 g）＜肉雞膽粉（10.802 g/100 g）＜烏雞膽粉（10.842 g/100 g）＜鴨膽粉（11.953 g/100 g）＜鵝膽粉（14.987 g/100 g）。其中，熊膽粉中主要為胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、亮氨酸；肉雞膽粉和烏雞膽粉中水解氨基酸的含有量和種類均相似，無顯著性差異；鵝膽粉中谷氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸的含有量較高；鴨膽粉中以丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸為主。

3.2 微量元素測定 熊膽粉、烏雞膽粉、肉雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉中均包含了18種微量元素，包括具有生物活性的必需元素Ca、Na、P、K、Mg，必需微量元素Fe、Cu、Zn、Mn、Cr、Co、Ni，非必需和有害微量元素Pb、Cd、Be、Pr、Sr、Ba。其中，熊膽粉中以K（174.336 mg/kg）含有量最高，P、Ca、Na次之，有害金屬元素Pb、Cd、Be、Pr、Sr、Ba最低，而且明顯低于其他幾種膽粉樣品；烏雞膽粉中含有豐富的P、K、Ca（276.432、219.091、116.11 mg/kg），而且明顯高于鴨膽粉、鵝膽粉、熊膽粉；肉雞膽粉中微量元素的含有量與烏雞膽粉較接近，Ca、P、Mg、Zn略低于烏雞膽粉，K（171.587 mg/kg）遠(yuǎn)低于烏雞膽粉，有害微量元素Pb、Cd、Be、Pr、Sr、Ba高于烏雞膽粉，所以烏雞的營養(yǎng)價(jià)值比肉雞高；鴨膽粉以K（248.573 mg/kg）含有量最高，P（165.461 mg/kg）次之；鵝膽粉K（291.193 mg/kg）的含有量高于其他幾種膽粉樣品，Zn（24.649 mg/kg）遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于烏雞膽粉、肉雞膽粉、鴨膽粉、熊膽粉。綜上所述，熊膽粉中微量元素的含有量明顯低于其他幾種膽粉樣品，烏雞膽粉、肉雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉微量元素的種類與含有量較接近，而有害金屬元素Pb、Cd、Be、Pr、Sr、Ba明顯高于熊膽粉，但都低于 《中國藥典》對(duì)中藥重金屬含有量的限定標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié)論

熊膽粉是傳統(tǒng)名貴中藥，近年來由于其在肝病、流感、眼疾治療中的效果得到越來越多的臨床確認(rèn)，故需求遠(yuǎn)大于供應(yīng)，尋找天然熊膽粉的替代品已成為必然。雞膽、鴨膽、鵝膽自古也是入藥成分，并且相對(duì)于其他動(dòng)物膽汁更容易獲得，同時(shí)提供量也很大。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)熊膽粉、雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉中氨基酸和微量元素的種類和含有量進(jìn)行測定和對(duì)比分析，可為進(jìn)一步開發(fā)利用雞膽粉、鴨膽粉、鵝膽粉打下了理論基礎(chǔ)，也為從家禽膽粉中尋找熊膽粉的替代品提供了科學(xué)依據(jù)。

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R284.1

B

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10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.052

2014-07-14

國家新藥創(chuàng)制重大專項(xiàng) （2014ZX09301306-007）

李 菲（1989—），女，碩士，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘A(chǔ)成分分析。Tel：18875039891，E-mail：lifei_lucky@163.com

*通信作者：王伯初（1962—），男，教授，研究方向?yàn)樯镏扑幑こ毯吞烊凰幬铩el：（023）65112840，E-mail：wangbc2000@126.com