楊璐瑜 張核子 張付瑤 葉宗博 張茵 胡利平

(1.廣東華曦法醫(yī)物證司法鑒定所 廣東深圳 518000;2.昆明醫(yī)科大學 云南昆明 650500)

短串聯重復序列(short tandem repeats,STR)是人類的一類重要遺傳標記,因其多態(tài)性豐富,擴增片斷長度短,廣泛地應用于親子鑒定中。但是,STR 基因座在遺傳的過程中發(fā)生突變的概率較高,因此在鑒定過程中是個不容忽視的問題,要值得注意。筆者在工作中遇一例較罕見的母親發(fā)生二步突變的羊水檢材鑒定,現報道如下。

1 案例資料

1.1 案情簡介

李某(孕17周+),自然受孕,未確定腹中胎兒父親是否為其老公,特委托本鑒定所鑒定是否存在親子關系。

1.2 檢驗方法

胎兒羊水5ml、男方帶毛囊毛發(fā)2根、女方血樣備用。采用Chelex-100 法分別提取DNA。經PowerPlexR21 (普洛麥格生物技術有限公司)、AGCU EX22(無錫中德美聯生物技術有限公司)復合擴增系統以及Investigator ArgusRX-12(德國QIAGEN公司)擴增系統進行擴增,擴增產物在ABI3500型DNA測序儀上電泳,由GeneMapper ID X1.3軟件進行結果分析。

2 結果

2.1 22個常染色體STR基因座分型結果

同時應用PowerPlexR21和AGCU EX22復合擴增系統,胎兒與孕婦在D5S818位點的分型結果一致,不符合遺傳規(guī)律。結果見表1。

表1 22個常染色體STR基因座分型結果

2.2 12個位點X-STR基因座分型結果

分析12位點X-STR基因座檢測結果,胎兒的X-STR分型均能從孕婦及可疑父的分型中找到來源,符合X染色體遺傳規(guī)律,結果見表2。

2.3 STR親權指數,累計親權指數及親權概率的計算

親權指數(paternity index,PI)、累積親權指數(cumulative paternity index,CPI)及相對父權概率(relative chance of paternity,RCP)的計算按文獻報道的方法計算,計算所使用的相關等位基因分布頻率數據來自文獻［1-2］和司法部司法鑒定科學技術研究所2014年親權鑒定能力驗證資料中的相關數據,以及無錫中德美聯生物技術有限公司所提供的頻率表。經統計分析,本例22個STR總CPI值為3.32×1012,累積親子關系概率(RCP)為99.9999999999%,超過了認定父權的標準,因此可以確定可疑父是胎兒的生物學父親。

3 討論

羊水中含有豐富的胎兒細胞成分,是很好的生物學檢材,在本案例中,用兩個不同廠家的擴增試劑對相同樣本進行檢驗,結果一樣,而且孕婦為自然妊娠,因此胎兒與孕婦的親子關系是確定的,因此可以確定胎兒在D5S818位點發(fā)生母源性突變,父權指數應按照符合遺傳規(guī)律的方法計算。增加的12位點X-STR的基因座未發(fā)現不符合遺傳規(guī)律地情況,進一步驗證了孕婦與胎兒之間的親子關系。X染色體特異性的STR作為特殊的遺傳標記具有重要的應用價值,是常染色體STR分型的重要補充方。現有的資料表明,STR突變是DNA 復制滑動的結果或DNA復制的錯誤修復而造成的,STR突變是符合逐步突變模式(Stepwise Mutation Model,SMM)的,即每次突變只改變一個重復單位,兩個或更多個重復單位的變化是在前一次突變基礎上發(fā)生的,也就是多步突變是逐步形成的。STR基因座90%的突變?yōu)橐徊酵蛔兗?個重復單位的加或減,大于10個重復單位的基因座突變相比重復單位小于10的較多;一般的規(guī)律是突變來自父方是來自母方的0.7-14倍,多數基因座為3-6倍。本案例中的突變是由11到13,發(fā)生了兩步突變,并且是母系來源的,國內尚未見報道。因此,在今后的鑒定工作中,在出現可能是突變的情況時,要注意以下幾點:①應該用不同批次相同的試劑盒以及不同廠家的試劑盒進行重復驗證,保證分型的正確;②如果是二聯體,在補充親生母親的樣本的同時增加STR位點。③必要時可進行測序來驗證是否為真的突變。

表2 12個位點X-STR基因座分型結果

[1]周娟娟,洪素云.中國漢族人群15個因座遺傳多態(tài)性研究及法醫(yī)學應用[J].中國免疫學雜志,2004,(12):841-842．

[2]黃霞,王芳,王蓉感,等.重慶地區(qū)漢族人群15個STR基因座遺傳多態(tài)性研究[J].重慶醫(yī)學,2008,37(1):58-60．