賈海燕，李丕寶

（山東省交通醫(yī)院，濟(jì)南 250000）

環(huán)氧化酶（COX）是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素初始步驟的關(guān)鍵限速酶。目前國內(nèi)外大量研究［1］表明，COX對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有顯著促進(jìn)作用。COX包括COX-1和COX-2兩種同工酶，其中COX-1為一種結(jié)構(gòu)型酶，而COX-2作為某種誘導(dǎo)型酶存在［2］。細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是防止腫瘤轉(zhuǎn)移的主要屏障，而降解COX的最重要的酶類叫做基質(zhì)金屬蛋白酶類（MMPs），腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移均與MMP活性上調(diào)有關(guān)。在多種基質(zhì)金屬蛋白酶中，有一種能夠水解基底膜主要成分Ⅳ型膠原的基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2），其主要在COX的降解和血管生成中發(fā)揮作用，目前研究［3］表明MMP-2在惡性腫瘤的發(fā)生及腫瘤轉(zhuǎn)移中起到重要作用。2011年5月 ～2013年6月，我們觀察了腎透明細(xì)胞癌組織中COX-2、MMP-2的表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011～2013年山東省交通醫(yī)院收治的腎透明細(xì)胞癌患者67例，男37例，女30例;年齡36～82（54.0±18.5）歲。均經(jīng)手術(shù)及病理證實，且術(shù)前均未行放、化療。臨床分期:Ⅰ期14例，Ⅱ期22例，Ⅲ期25例，Ⅳ期6例。TNM分期:T1期19例，T2期24例，T3期19例，T4期5例。腫瘤分化程度:高分化20例，中分化35例，低分化12例。手術(shù)留取腎透明細(xì)胞癌組織67例份（觀察組），另取癌旁正常腎組織24例份（對照組）。

1.2 組織COX-2、MMP-2檢測 采用免疫組化SP法。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋并切片（厚度4 μm），4℃冰箱保存。石蠟切片常規(guī)脫蠟、脫水，雙蒸水沖洗3 min;COX-2以及MMP-2染色組采用熱抗原修復(fù)法暴露抗原，滴加3%過氧化氫10 min，用PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min;兩組分別加入正常血清，15 min后分別滴加一抗COX-2和MMP-2（抗體滴度為1∶100），37℃孵育約1 h，4℃冰箱內(nèi)過夜;用PBS沖洗3次后，滴加生物素標(biāo)記的二抗，37℃孵育20 min，PBS沖洗3次;各切片加入鏈霉素抗生素—過氧化物酶溶液，37℃孵育20 min，PBS沖洗3次，每次3 min;最后蘇木精復(fù)染之前進(jìn)行DAB顯色，0.1%鹽酸酒精分化在進(jìn)行梯度酒精脫水，二甲苯溶液使之透明后再用中性樹膠封片。陽性對照為病理確診的腎透明細(xì)胞癌陽性切片，陰性對照為PBS溶液。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):COX-2染色陽性信號定位于細(xì)胞質(zhì)，胞質(zhì)可被染成棕黃色或者棕褐色顆粒。MMP-2染色陽性信號亦定位于細(xì)胞質(zhì)，著色與COX-2類似。計數(shù)10個高倍視野，若陽性細(xì)胞數(shù)＜10%計為-，陽性細(xì)胞數(shù)在10% ～25%計為+，陽性細(xì)胞數(shù)在25% ～50%計為++，陽性細(xì)胞數(shù)＞50%計為+++。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗;相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組COX-2、MMP-2表達(dá)比較 觀察組及對照組COX-2陽性率分別為64.18%、25.00%，兩組比較，P＜0.05;MMP-2 陽性率分別為 56.7%、0，兩組比較，P＜0.05。

2.2 COX-2、MMP-2表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見表1。由表1可知，COX-2、MMP-2表達(dá)均與腎透明細(xì)胞癌腫瘤分級、臨床分期有關(guān)（P均 ＜0.05）。

表1 COX-2、MMP-2表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 腎透明細(xì)胞癌組織中COX-2與MMP-2表達(dá)的相關(guān)性 腎透明細(xì)胞癌組織中COX-2與MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.857，P＜0.01）。

3 討論

作為環(huán)氧化酶的兩個同工酶之一，COX-2在大多數(shù)細(xì)胞和組織中是作為某種誘導(dǎo)型因子出現(xiàn)，COX-2具有促進(jìn)細(xì)胞生長、防止凋亡發(fā)生、增加細(xì)胞黏附、引起血管生成等作用，越來越多的研究集中在COX-2與腫瘤的關(guān)系上［4，5］。Khan 等［6］在由犬科動物構(gòu)造的腎細(xì)胞癌模型體內(nèi)發(fā)現(xiàn)COX-2高表達(dá)，還發(fā)現(xiàn)在腎細(xì)胞癌進(jìn)展調(diào)節(jié)方面COX-2發(fā)揮了關(guān)鍵作用。而隨后多項研究［7，8］表明，COX-2 可能與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究顯示，觀察組COX-2陽性率高于對照組，且COX-2表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌腫瘤分級、臨床分期有關(guān)，提示COX-2在腎透明細(xì)胞癌的分化、浸潤及轉(zhuǎn)移中有重要的作用。

文獻(xiàn)［9］報道，COX作為人體阻礙腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的天然屏障，腫瘤細(xì)胞如向外侵襲，必須穿透ECM才能離開血液循環(huán)、侵入淋巴循環(huán)。ECM主要結(jié)構(gòu)是Ⅳ型膠原，MMP-2是一種依賴鋅離子的水解蛋白酶，是降解Ⅳ型膠原最重要的酶類。MMP-2通過降解ECM、促進(jìn)腫瘤新生血管形成等方式參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，所以MMP-2是評價惡性腫瘤進(jìn)展程度的重要標(biāo)志［10］，也是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的至關(guān)重要的蛋白酶。本研究顯示，觀察組MMP-2陽性率高于對照組，且MMP-2表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌腫瘤分級、臨床分期有關(guān)，表明其在腎透明細(xì)胞癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用。

腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是一個多因子共同參與形成的復(fù)雜的生理過程。本研究發(fā)現(xiàn)，腎透明細(xì)胞癌組織中COX-2與MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)，提示COX-2與MMP-2在腎透明細(xì)胞癌臨床侵襲與轉(zhuǎn)移過程中起到了共同促進(jìn)作用;但其機(jī)制與機(jī)理并不十分明確，有待于進(jìn)一步研究。臨床已經(jīng)應(yīng)用COX-2抑制劑如非甾體抗炎藥或者更有效地選擇性COX-2抑制劑用于治療腎惡性腫瘤，均取得積極的效果，MMP-2抑制劑在惡性腫瘤的預(yù)防以及臨床應(yīng)用中的研究也在進(jìn)行，聯(lián)合應(yīng)用二者于惡心腫瘤尤其是腎透明細(xì)胞癌有可能成為新的惡性腫瘤治療方式，但是如何協(xié)同二者以達(dá)到最佳的預(yù)防與治療效果仍需要進(jìn)一步研究與探索。

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