吳英娟

（天津市第四中心醫(yī)院，天津 300140）

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一，病理過程與腫瘤的增殖、侵襲性相關(guān)，針對腫瘤的增殖和侵襲性進行的基因治療非常有意義［1］，但目前有效的治療基因尚不清楚。增殖細胞核抗原（PCNA）是細胞中的一種核蛋白，與細胞的增殖狀態(tài)密切相關(guān)，可作為反映腫瘤細胞增殖程度與判斷預后的指標［2］。高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）屬于高遷移率族蛋白家族，是一種非組蛋白染色體蛋白，主要在胚胎發(fā)育早期表達，而在高度分化的組織中幾乎不表達。HMGB-1被證實與多種腫瘤的惡性程度、侵襲性和預后相關(guān)［3］。本研究觀察了宮頸癌組織中HMGB-1、PCNA的表達變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年5月 ～2014年6月天津市第四中心醫(yī)院收治的宮頸癌患者70例，年齡22～74（42.6±13.2）歲;所有患者均經(jīng)病理證實，且術(shù)前均未進行放化療及其他針對腫瘤的治療。病理類型:局限型34例，浸潤型36例;分化程度:低分化37例，高中分化33例;浸潤深度:T1+T2 14例，T3+T4 56例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例;按FIGO分類標準［4］，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期28例，Ⅲ+Ⅳ期42例。手術(shù)留取70例份宮頸癌組織（宮頸癌組）、70例份宮頸癌癌旁組織（癌旁組），另取正常宮頸組織20例份（正常組）。

1.2 組織HMGB-1、PCNA檢測 采用免疫組化法。收集石蠟包埋的組織標本，切片（厚4～5 μm），通過10 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）高壓加熱法對宮頸癌組織以及正常宮頸組織切片進行抗原修復，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。經(jīng)10%山羊血清封閉1 h，滴加一抗（兔抗人PCNA單克隆抗體與兔抗人 HMGB-1單克隆抗體，稀釋濃度均為1∶20），置入4℃孵箱過夜，與辣根酶標記的二抗反應（北京中杉橋生物公司），DAB顯色，蘇木精復染胞核，脫水，封片，置于倒置顯微鏡下觀察并拍照。PBS代替一抗作為陰性對照，已知抗體陽性標本陽性對照。結(jié)果判定標準:HMGB-1陽性染色信號呈棕色細小顆粒，均位于細胞質(zhì)。PCNA蛋白分布于細胞核內(nèi)，呈棕黃色乃至棕褐色顆粒。每一張切片選取連續(xù)的10個高倍視野（400×），每個視野計數(shù)200個細胞，分別統(tǒng)計其中的所有陽性細胞，計算陽性細胞百分比。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組HMGB-1、PCNA陽性率比較 宮頸癌組、癌旁組、正常組HMGB-1陽性率分別為95.7%（67/70）、22.9%（16/70）、5.0%（1/20），兩兩比較，P均＜0.05;PCNA 陽性率分別為 90.0%（63/70）、65.0%（45/70）、45.0%（9/20），兩兩比較，P均 ＜0.05。

2.2 HMGB-1、PCNA表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果見表1。由表1可知，HMGB-1表達與宮頸癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，PCNA表達與宮頸癌腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)（P均＜0.05）。

表1 HMGB-1、PCNA表達與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 宮頸癌組織中PCNA、HMGB-1表達的相關(guān)性宮頸癌組織中PCNA與HMGB-1表達呈正相關(guān)（r=6.82，P＜0.05）。

3 討論

宮頸癌嚴重威脅婦女健康，是僅次于乳腺癌的常見惡性腫瘤，其具有惡性程度高、病死率高的特點。近幾年雖然有報道宮頸癌發(fā)病率和病死率均有顯著降低的情況，但是出現(xiàn)了年輕化趨勢，35歲以下婦女患有宮頸癌的比率顯著上升，因而宮頸癌的早期診斷以及早期治療對于這些患者來說非常重要［5］。探索與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子生物因素及預測腫瘤轉(zhuǎn)移與浸潤的潛在風險是當今這個領(lǐng)域的研究熱點。目前認為，惡性腫瘤的典型特征為腫瘤侵襲性及轉(zhuǎn)移，一些細胞調(diào)節(jié)因子及生物活性介質(zhì)在其中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。大量臨床試驗表明，高表達侵襲性生物因子的患者預后較差。因此，尋找一個宮頸癌新的基因治療作用靶點顯得尤為重要。

PCNA是一種S期細胞核內(nèi)大量表達的核蛋白之一，在 DNA的合成調(diào)控中發(fā)揮至關(guān)重要的作用［6］。PCNA水平在DNA合成周期的改變與細胞增殖過程一致，是一種衡量腫瘤惡性程度與增殖能力的可靠指標。有研究［7，8］證實，PCNA 參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而細胞無限增殖被認為是腫瘤發(fā)生機制之一，腫瘤細胞的增殖活性與腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移和預后密切相關(guān)［9］。因此，檢測腫瘤組織中PCNA水平有助于預后判斷。有研究［10，11］表明，正常胃黏膜組織中PCNA不表達，而胃癌組織中PCNA高表達，分化程度越低，水平越高。已有學者利用免疫組化法檢測PCNA在腦膠質(zhì)瘤、肺癌、宮頸癌、乳腺癌等組織中的表達及其與臨床病理分級的關(guān)系，并對患者預后進行判斷;但宮頸癌組織中PCNA的表達與臨床分期、病理分級以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系尚不清楚。本研究顯示，宮頸癌組PCNA陽性率高于癌旁組及正常組，且PCNA表達與宮頸癌腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，這表明PCNA隨著腫瘤病理級別的增高，陽性率明顯升高，其表達隨腫瘤分級呈遞增趨勢。上述結(jié)果與王暉等［12］和辛海等［13］的結(jié)論一致。

HMGB-1是30年前發(fā)現(xiàn)的一種細胞因子，主要存在于真核細胞內(nèi)，在結(jié)構(gòu)上高度保守的單鏈多肽，約有215個氨基酸殘基，其在DNA重組、復制、修復和基因轉(zhuǎn)錄的過程中起重要作用［14］。關(guān)于HMGB-1在腫瘤中的作用報道逐漸增多，隨著深入研究，其在缺血再灌注損傷、自身免疫性疾病、休克中的不同作用也被探索。有研究［15］表明，HMGB-1參與了腫瘤的增殖、生長、浸潤與轉(zhuǎn)移，但關(guān)于它的研究尚處于探索階段，有待進一步研究。HMGB-1還與胰腺癌、結(jié)腸癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等腫瘤的臨床分期和不同預后的結(jié)局有相關(guān)性［16，17］。近年大量研究［18～21］證實，HMGB-1 與胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌的侵襲和淋巴、血液轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。HMGB-1在多種腫瘤和未成熟細胞中表達，趨化作用可被其誘導產(chǎn)生，參與腫瘤細胞轉(zhuǎn)移。但是關(guān)于HMGB-1與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系以及具體的作用體制目前尚不明確。本研究顯示，宮頸癌組HMGB-1陽性率高于癌旁組及正常組，且與宮頸癌腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)。目前，對于HMGB-1促進腫瘤發(fā)展的機制尚不清楚，我們認為可能與HMGB-1通過 Ras、MAPK途徑，促使 MAPKs磷酸化，進而激活核轉(zhuǎn)錄因子 κB（NF-κB），而 NF-κB 是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，存在于真核細胞中，其與基因上啟動子區(qū)的固定核苷酸序列結(jié)合啟動基因轉(zhuǎn)錄，從而完成細胞增殖與分化、腫瘤形成與轉(zhuǎn)移等一系列重要生物學功能［22］。

［1］包穎，劉明，朱金福，等.液基細胞學和高危型HPV DNA檢測在宮頸癌篩查中的相關(guān)性［J］.中國實用醫(yī)藥，2012，7（18）:60-61.

［2］陸曉峰，陳剛.胃癌組織中PCNA、COX-2、p53及EGFR的表達及其與預后的關(guān)系［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（41）:39-41.

［3］李俊華，鐘山，郭暉，等.腎臟缺血再灌注損傷過程中天然免疫分子高遷移率族蛋白B1釋放變化［J］.中華實驗外科雜志，2010，27（1）:1809-1811.

［4］鄭巧榮，崔金全.宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中TS、PCNA的表達及其意義［J］.中國婦幼保健，2011，26（7）:1083-1085.

［5］應倩，夏慶民，鄭榮壽，等.中國2009年宮頸癌發(fā)病與死亡分析［J］.中國腫瘤，2013，22（8）:612-616.

［6］周靜.病灶組織HPV、PCNA和nm23檢測在宮頸癌分型中的價值［J］.中國老年學雜志，2013，33（7）:1545-1546.

［7］李斐，陳謙學，劉寶輝，等.神經(jīng)生長因子和增殖細胞核抗原在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及意義［J］.武漢大學學報（醫(yī)學版），2015，36（3）:386-415.

［8］趙巍.子宮內(nèi)膜癌患者癌組織中PCNA和CD34蛋白表達的實驗研究［J］.中國婦幼保健，2015，30（12）:1906-1907.

［9］沈翀，勞山，陳罡.腫瘤細胞增殖標志物蛋白功能及意義的研究進展［J］.微創(chuàng)醫(yī)學，2009，4（3）:273-275.

［10］郭晰.PCNA和nm23在宮頸癌中的表達及其臨床意義［J］.臨床醫(yī)藥實踐，2008，6（1）:373-375.

［11］Kayaselcuk F，Zorludemir S，Gumurduhu D，et al.PCNA and Ki 67 in centralnervous system tumors:correlation with the histologicaltype and grade［J］.J Neurooncol，2002，57（2）:115-121.

［12］王暉，羅春芳，蘆玉蘭，等.應用組織芯片技術(shù)研究MMP-9和PCNA在宮頸癌組織中的表達及其意義［J］.中國組織化學與細胞化學雜志，2010，19（5）:457-462.

［13］辛海，耿明，陳誦芬.宮頸癌及其癌前病變組織中p16INK4a和PCNA的表達及臨床意義［J］.中華腫瘤防治雜志，2007，14（20）:1563-1567.

［14］龐曉奡，張瑤，魏恒，等.高遷移率族蛋白1在宮頸癌中的表達及作用［J］.中國醫(yī)科大學學報，2014，43（12）:1075-1083.

［15］劉輝，姚詠明，丁麗華，等.活化T細胞核因子-2可介導高遷移率族蛋白B1促進 IL-2轉(zhuǎn)錄表達［J］.中華實驗外科雜志，2010，27（10）:1425-1428.

［16］Sheng X，Du X，Zhang X，et al.Clinical value of serum HMGB1 levels in early detection of recurrent squamous cell carcinoma of uterine cervix:comparison with serum SCCA，CYFRA21-1，and CEA levels［J］.Croat Med J，2009，50（5）:455-464.

［17］Jiao Y，Wang HC，F(xiàn)ans J.Growth suppression and radio sensitivity increase by HMGB1 in breast cancer［J］.Acta Pharmacol Sin，2007，28（12）:1957-1967.

［18］蘇衛(wèi)民，畢明宏.HMGB1/MMP9在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義［J］.臨床肺科雜志，2012，17（8）:1463-1465.

［19］張世棟，徐美林.HMGB1和NF-κBp65在非小細胞肺癌組織中的表達及意義［J］.山東醫(yī)藥，2011，51（8）:17-19.

［20］高寶全，李延青，李文捷，等.胰腺癌HMGB1表達及其與血行轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究［J］.中華胰腺病雜志，2008，8（5）:308-311.

［21］賀小燕，王海琳，陳曉紅，等.HMGB1在卵巢癌中的表達及臨床意義［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2011，11（4）:695-697.

［22］徐姍，姚詠明，董寧，等.高遷移率族蛋白B1誘導的樹突狀細胞對T淋巴細胞增殖及功能性極化的影響［J］.中華實驗外科雜志，2008，25（1）:42.