辛佳蔚，章軍建，劉昌云，楊英，羅玲

雌激素受體β基因多態(tài)性與漢族高齡女性高脂血癥的相關(guān)性研究

辛佳蔚1，章軍建2，劉昌云1，楊英2，羅玲1

目的：探討雌激素受體β（ERβ）基因多態(tài)性與中國漢族絕經(jīng)后女性高脂血癥之間的相關(guān)性。方法：檢測59例高脂血癥絕經(jīng)后婦女（高脂血組）及59例無高脂血癥的同齡女性（對(duì)照組）的ERβrs944050的單核苷酸多態(tài)性，分析其與高脂血癥的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果：ERβ的SNPrs944050的等位基因A、G頻率在高脂血組和對(duì)照組分別為0.500、0.500、0.669、0.331?；蛐皖l率分布符合Hardy-Weinberg平衡。SNP rs944050，A/A、G/G與G/A+G/G之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.02）。SNPrs944050的等位基因G升高高脂血癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)（OR= 2.03，95%可信區(qū)間為1.20～3.43）。結(jié)論：在中國漢族絕經(jīng)后婦女中，ERβ基因SNPrs944050的單核苷酸多態(tài)性與高脂血癥相關(guān)。

高脂血癥；雌激素受體β；相關(guān)性；多態(tài)性；婦女

大量研究證明，高脂血癥作為一種重要的脂代謝異常疾病，是腦血管病的重要危險(xiǎn)因素[1]。人體血脂代謝既受先天遺傳因素影響，也受后天飲食習(xí)慣、生活方式等因素影響，雌激素已被證明具有顯著的心腦血管保護(hù)作用?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，雌激素的生物學(xué)效應(yīng)主要通過雌激素受體（estrogen receptor，ER）介導(dǎo)[2]，并可改善人體脂代謝，延緩動(dòng)脈粥樣硬化損傷[3]。因此，ER基因多態(tài)性及由此引起的ER表達(dá)的改變可能會(huì)與雌激素的血脂保護(hù)作用相關(guān)。為此，本研究通過檢測湖北地區(qū)漢族絕經(jīng)后婦女高脂血癥患者和無高血脂的絕經(jīng)后婦女的ERβrs944050位點(diǎn)的基因多態(tài)性，探討ERβ基因多態(tài)性在中國漢族絕經(jīng)后婦女中與高脂血癥的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年9月至2015年1月于武漢大學(xué)中南醫(yī)院就診的高脂血癥漢族絕經(jīng)后婦女59例為高脂血組，平均年齡（71.08±0.86）歲。另選擇59例無高脂血癥的年齡匹配的漢族女性為對(duì)照組，平均年齡（71.44±1.28）歲。所有入選者均為自然人群，無血緣關(guān)系。排除繼發(fā)性（包括藥物相關(guān)性）及家族性高脂血癥、絕經(jīng)過早、卵巢切除及應(yīng)用激素替代治療（hormone replacement therapy，HRT）者。高脂血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《2007年中國成人血脂異常防治指南》制定標(biāo)準(zhǔn)[4]，甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（low densith lipoprotein-cholesterol，LDL-C）和/或總膽固醇（total cholesterol，TC）升高（TG≥1.76mmol/L、LDL-C≥3.37mmol/L、TC≥5.18mmol/L）。所有入組者在首次就診及明確是否存在高脂血癥時(shí)均未服用他汀類降脂藥物或其他影響血脂水平的藥物，診斷后則允許服用他汀類降脂藥物。

1.2 主要試劑

離心柱型血液基因組DNA提取試劑盒、DNA染料[天根生化科技（北京）有限公司]；Taq酶、ExTaq酶、dNTPs、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) [日本寶生物工程（大連）有限公司]。擴(kuò)增引物委托上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.3 方法

記錄2組糖尿病及身體質(zhì)量指數(shù)（bodymass index，BM I）值。

1.3.1 DNA提取及檢測 將20μL蛋白酶K溶液加入全血標(biāo)本混勻，加入200μL緩沖液 GB，混勻，56℃放置10m in。加200μL無水乙醇，混勻。將所得上部溶液加入吸附柱CB3，依次分別加入500μL緩沖液GD，700μL漂洗液PW，500μL漂洗液PW，將吸附柱CB3放回收集管中，最后轉(zhuǎn)入1.5m L離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加200μL脫緩沖液TB，室溫放置2m in，12 000rpm離心2min，棄去廢液，室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干漂洗液。用l%瓊脂糖凝膠在120 V電壓條件下電泳，檢測全血標(biāo)本基因組DNA是否完整。

1.3.2 PCR體外擴(kuò)增目的基因 在Biorad iCycler PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增程序如下：預(yù)變性2min，變性30 s（94℃），退火30 s（62℃），延伸1min（72℃），共循環(huán)35次，終延伸10m in（72℃），擴(kuò)增產(chǎn)物在4℃條件下保存。將其在1%的瓊脂糖膠上電泳分離，對(duì)目的條帶（700 bp）進(jìn)行切膠。使用DP209-離心柱型-普通DNA凝膠回收試劑盒對(duì)切膠后的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化回收。

1.3.3 測序及結(jié)果分析 基因測序采取雙脫氧法進(jìn)行，儀器為ABI3730測序儀，測序結(jié)果分析采用Bioedit Sequence AlignmentEditor軟件進(jìn)行。

1.3.4 血脂測定 所有受試者均于清晨8:00采空腹血，血標(biāo)本采用 Olympus AU-1000全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血清TC、TG、高密度脂蛋白（high densith lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、LDL-C測定，每次測定均選用高、中、低3種質(zhì)控樣品分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS17.0軟件分析數(shù)據(jù)，分析檢驗(yàn)對(duì)象是否屬于Hardy-Weinberg平衡群體，χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組間糖尿病、原發(fā)性高血壓和超重患者比較

2組糖尿病患者數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.08）；高脂血組的原發(fā)性高血壓患者比例和超重（BM I值≥23 kg/m2）患者比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.04，P=0.01），見表1。

表1 2組相關(guān)危險(xiǎn)因素比較[n(%)]

2.2 2組間基因型頻率比較

高脂血組和對(duì)照組SNP rs944050基因型頻率和基因頻率的分布均符合Hardy-Weinberg平衡，是遺傳平衡群體，具有群體代表性。2組SNP rs944050的基因型分布存在顯著差異（P=0.02）；rs944050位點(diǎn)以A/G基因型較多，SNP rs944050的A/A基因型與G/G+A/G基因型之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.05），見表2。

表2 2組基因型頻率比較[n(%)]

2.3 2組間等位基因頻率比較

2組SNP rs944050的等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.01）；每個(gè)G等位基因使患高脂血癥的風(fēng)險(xiǎn)升高2.03倍（P=0.01）；對(duì)照組有33.1%的患者發(fā)生此類突變，高脂血組中突變的比例達(dá)50.0%，見表3。

表3 2組間等位基因頻率比較[n(%)]

3 討論

當(dāng)前研究發(fā)現(xiàn)，人體內(nèi)存在兩種雌激素受體，ERα和ERβ，其位于受體N端的主要功能域（AF-1），并在結(jié)構(gòu)和功能上有很大差異[5]。研究已證實(shí)，ERα基因多態(tài)性與血脂代謝有著明顯的相關(guān)性[6]。在血管平滑肌細(xì)胞中，雌激素主要通過ER的介導(dǎo)發(fā)揮其對(duì)血脂代謝的調(diào)節(jié)作用。然而，除了ERα外，ERβ也在血管平滑肌細(xì)胞中有著優(yōu)勢表達(dá)[7]，且已被廣泛證明與血管性癡呆、冠心病等多種疾病密切相關(guān)[8,9]，而高脂血癥正是這些疾病的重要危險(xiǎn)因素之一。因此，ERβ基因多態(tài)性也極有可能影響到個(gè)體對(duì)高血脂的易患性。

本研究通過分析59例中國無高脂血癥的漢族絕經(jīng)后婦女和59例高脂血癥婦女的ERβ基因多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)高脂血組SNPrs944050有50.0%的患者發(fā)生了A→G突變，而對(duì)照組中此類突變的比例僅33.1%，每個(gè)G等位基因使中國漢族女性高脂血癥患病率風(fēng)險(xiǎn)升高2.03倍（P= 0.01）。目前，SNP rs944050影響高脂血癥患病率的機(jī)制尚不清楚。ERβ基因多態(tài)性被認(rèn)為是影響受體表達(dá)及功能的重要因素，SNP rs944050的突變可能影響ERβ轉(zhuǎn)錄過程中RNA的正常剪接或與其相關(guān)的多態(tài)性的改變，影響其轉(zhuǎn)錄活性，從而最終影響受體的表達(dá)和功能[10]。SNP rs944050影響ERβ受體功能的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步探討，需要更多基因水平的研究來進(jìn)行證實(shí)。筆者基于現(xiàn)有證據(jù)推測，SNP rs944050突變極可能影響ERβmRNA轉(zhuǎn)錄和翻譯效率，改變受體相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而最終影響ERβ受體與雌激素結(jié)合的活性。

本研究表明，ERβ基因多態(tài)性可能是導(dǎo)致高脂血癥的危險(xiǎn)因素之一。單核苷酸多態(tài)性分析可能有助于雌激素功能的研究，并可能成為預(yù)測高脂血癥的一種有效方法，進(jìn)而可為高脂血癥的早期診治提供有力的理論指導(dǎo)。后續(xù)大樣本的臨床和基礎(chǔ)研究有助于對(duì)其中可能的機(jī)制做進(jìn)一步闡述。

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（本文編輯：王晶）

Association of Estrogen Receptor β Gene Polymorphisms with Hyperlipoidemia in Elder Women

XIN Jia-wei,ZHANG Jun-jian,LIU Chang-yun,YANG Ying,LUO ling.Department of Neurology,Fujian Medical University Union Hospital,Fuzhou 350001,China

Objective: To explore a potential association between the estrogen receptor β (ERβ) gene polymorphisms and hyperlipoidemia in postmenopausal women. Methods: The relationship of the polymorphism (rs944050) with hyperlipoidemia was examined in 59 postmenopausal women with hyperlipoidemia (hyperlioidemia group) and 59 healthy age-matched controls(control group). Results: In both the hyperlipoidemia group and control group, the ERβ allelic frequencies of A and G were 0.500,0.500,0.669,and 0.331 respectively. The distributions of the genotype of the polymorphism rs944050 was in Hardy-Weinberg equilibrium. A statistical difference between the wild-type genotype and heterozygous and homozygous variant genotypes was observed (P=0.02). The variant allele G of rs944050 in the ERβ gene increased the risk of hyperlipoidemia (OR=2.03, 95%CI=1.20～3.43). Conclusion: The polymorphism rs944050 in the ERβ gene is associated with an increased risk of hyperlipoidemia in Chinese Han postmenopausal women.

hyperlipoidemia; estrogen receptor β; association; polymorphisms; women

R741;R741.02

A DOI 10.3870/sjsscj.2015.06.009

1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 福州350001 2.武漢大學(xué)中南醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 武漢 430071

福建省自然科學(xué)基金青年基金 （No.2015J05154）；福建省社會(huì)發(fā)展引導(dǎo)性（重點(diǎn)）項(xiàng)目（No.2013Y0042）

2015-09-11

章軍建 wdsjkx@163.com； 劉昌云 13365910778@163.com