李愛朵 趙建華 杜俊芳 秦劍平 李增開 李新春

（1，陜西省榆林市神木縣畜牧獸醫(yī)技術推廣站 719300； 2，陜西省絨山羊工程技術研究中心 719000）

補硒-VE及授精方法對薩?？搜虺瑪?shù)排卵和受精率的影響

李愛朵1趙建華1杜俊芳1秦劍平1李增開1李新春2*

（1，陜西省榆林市神木縣畜牧獸醫(yī)技術推廣站 719300； 2，陜西省絨山羊工程技術研究中心 719000）

選擇做胚胎移植供體120只薩?？四秆?，采用2因素4重復試驗，在飼養(yǎng)管理和激素處理相同的條件下，進行補加亞硒酸鈉-VE和不同輸精方式試驗，研究其對供體母羊排卵和受精率的影響。結果表明：肌注亞硒酸鈉-VE的試驗組受體母羊，每只平均沖胚11.5枚，顯著高于對照組（8.9枚）（p＜0.01），且組內各重復間差異不顯著（p＞0.05），可見，在缺硒地區(qū)在配種前給母羊補充硒-VE對其排卵有明顯的影響；采用內窺鏡子宮角輸精法，受精率97.02%，而采用常規(guī)子宮頸口輸精法，受精率82.57%，二者差異顯著（p＜0.05），說明內窺鏡子宮角輸精法，是一種效果很好的人工授精輸精方法。

薩?？四秆?；繁殖；胚胎移植；亞硒酸鈉VE注射液；內窺鏡子宮角輸精法；常規(guī)輸精法；超數(shù)排卵；受精率；試驗

胚胎移植技術在家畜的育種繁育中應用很普遍，而且越來越商業(yè)化。為了增加純種薩福克肉羊的數(shù)量，神木縣從2010年起就引進該技術對薩福克肉羊進行胚胎移植。但是移植供體羊排卵數(shù)量少、受體受精率低是制約這項技術推廣的瓶頸。為此我們分析了影響供體母羊超數(shù)排卵的諸多因素，比如有供體羊的體況、年齡、胎次、季節(jié)，前期的營養(yǎng)水平，超排處理選用的激素類型、劑量以及配種的方法等。在微量營養(yǎng)方面， 《動物營養(yǎng)學》、 《動物營養(yǎng)與代謝病防治》等教程描述，硒缺乏明顯影響繁殖性能，對家畜繁殖的影響主要表現(xiàn)在公畜精液不良，母畜受胎率低下甚至不孕，妊娠畜會出現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎等現(xiàn)象[1,2]。吳森研究，添加適量硒可使超數(shù)排卵試驗羊黃體飽滿，回收胚胎數(shù)和可利用胚胎數(shù)均顯著提高，超數(shù)排卵情況較好。補硒在一定程度上提高了母羊的超排效果[3]。神木縣屬于硒缺乏地區(qū)，本次試驗擬探討補充外源硒和VE對超排的影響，在體況、年齡、胎次和季節(jié)、超排處理選用的激素及劑量等因素盡可能一致的情況下，給供體試驗羊使用微量元素硒和VE注射液與不使用的羊對比，同時探討選用內窺鏡人工授精法與普通子宮角輸精法的不同效果。

1 材料和方法

1.1 試驗的時間和地點

本次試驗從2013年的8月20日開始，在神木縣爾林兔鎮(zhèn)的神木縣西農畜牧科技示范牧場（以下簡稱為一場）、瑞章農林牧發(fā)展有限公司（以下簡稱為二場）、神木縣沃源農業(yè)有限公司（以下簡稱為三場）和中雞鎮(zhèn)的神木縣旺升農民專業(yè)合作社（以下簡稱為四場）開展試驗。

1.2 試驗材料

1.2.1 供體羊

供體母羊的選擇：選健康無病、有正常的產(chǎn)羔記錄，膘情適中的2～4.5周歲的純種薩?？四秆?20只，所有供體羊120只全來自神木縣西農畜牧科技示范牧場，將所選的供體羊隨機分成4組投放到四大羊場由專人飼喂，以備試驗用；配種公羊的選擇：純種薩福克公羊，要求2周歲以上，體況健壯，膘情較好，有豐富的配種經(jīng)驗。這次配種用的公羊均來自神木縣西農畜牧科技示范牧場，共4只，由神木縣西農畜牧科技示范牧場飼養(yǎng)，以備配種用。

受體羊1000只（實際施行胚移手術的955只），由進行試驗的4個場提供，主要為肉羊雜交個體和購買的小尾寒羊雜交個體，體格較大，健康無病。

1.2.2 同期發(fā)情藥物、微量元素和VE

同期發(fā)情所用藥物：促卵泡素（FSH）、促排 3號（LRH-A3）由寧波第二激素廠生產(chǎn)；氯前列醇鈉注射液（PG）由寧波三生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；孕酮陰道海綿栓由西北農林科技大學研制。

微量元素硒和VE：用亞硒酸鈉VE注射液（以下簡稱“硒-VE”），由哈爾濱摩天農科獸藥有限公司生產(chǎn)。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗設計

試驗設計為2因素4個重復（場）試驗，將120只試驗羊隨機分成8組，分到4個羊場，即1-Ⅰ，1-Ⅱ；2-Ⅰ，2-Ⅱ；3-Ⅰ，3-Ⅱ；4-Ⅰ，4-Ⅱ。硒-VE因素試驗：每場-Ⅱ為試驗組，-Ⅰ為對照組，試驗組補加硒-VE，對照組不補，其他條件一致；輸精方法試驗：1-Ⅰ，1-Ⅱ；2-Ⅰ，2-Ⅱ為試驗組，采用內窺鏡子宮角人工輸精法，3-Ⅰ，3-Ⅱ；4-Ⅰ，4-Ⅱ為對照組，采用常規(guī)子宮頸口人工輸精法。

1.3.2 試驗期飼養(yǎng)管理

將選出進行胚胎移植的供、受體羊和其它的羊分開，逐只進行B超檢查，采血化驗布病，分別單獨組群；每一場的供體母羊隨機分成Ⅰ、Ⅱ組，每組15只，飼喂相同的粗飼料和精飼料。粗飼料是青貯玉米、沙打旺和紫花苜蓿干草，自由采食；精飼料（玉米78%、菜粕4%、豆粕12%、食鹽1%）。每只羊補飼0.6kg/日。專人飼養(yǎng)，加強飼養(yǎng)管理。

1.3.3 供體羊補加硒-VE的處理

從2013年8月21日（配種前15d）開始，對每場的Ⅱ組供體羊（作為試驗組）開始注射硒-VE，直至配種結束，劑量為每天3ml/只，方法是每天上午一次性分點肌肉注射。Ⅰ組供體羊作為對照組，不注射任何藥物，其他飼養(yǎng)管理與試驗組相同只。

1.3.4 對供體羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵、配種以及胚胎收集

對每場的供體羊Ⅰ、Ⅱ組同時處理，一場是從8月22號開始肌注PG，每只1ml，以后每隔兩天分別處理二場，三場，四場；注射PG后2d開始觀察發(fā)情，并對發(fā)情情況做了記錄；發(fā)情2d后開始置栓，12d后去栓，去栓后對正常發(fā)情的供體羊肌注FSH，每只2.5ml，每12h注射1次，連續(xù)用3d，然后進入配種階段。供體羊發(fā)情8h后開始配種，每8h配種一次，對首次配種的發(fā)情母羊肌注促排3號，每只10μl，供體羊前期處理結果見表1、2。

表1 供體羊同期發(fā)情處理記錄表

表2 供體羊超排處理記錄表

供體羊發(fā)情后開始肌注促排3號，每只10μl，發(fā)情8h后開始配種，所有的供體羊都進行人工配種。為了比較內窺鏡子宮角輸入法與常規(guī)人工授精的效果，對一、二場的羊采用內窺鏡法進行子宮角輸精法配種，此種方法是在供體羊發(fā)情8h后通過手術只配種一次。具體操作是將配種羊保定在手術臺上，局部麻醉，用手術刀在羊下腹部兩淺窩距離中線2cm處各打開一個1～1.5cm的小口，內窺鏡放入右邊刀口里觀察子宮角，用腸鉗放入左邊的刀口取出一側的子宮角，用1ml的注射器將稀釋好的精液注入子宮角0.5ml，輸完后將子宮角放回原處，然后找出另一側的子宮角用同樣的方法輸入后再放回原處，最后將傷口縫合；而三、四場的羊采用常規(guī)人工輸精法配種。此法就是將配種羊保定在輸精架上，利用羊的輸精槍將裝好的精液通過陰道進入子宮頸口輸入子宮，用此種方法每只羊每8h配種一次，一個情期共配種3次。

供體羊在配種后6～6.5d開始沖胚，在沖胚手術前24h停食并做好手術前的準備。一場供體羊在9月17日手術沖胚，以后每隔兩天進行其它場的沖胚手術。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗采用Excel軟件對試驗數(shù)據(jù)進行預處理，然后DPS7.05數(shù)據(jù)處理軟件進行顯著性檢驗[4]。試驗數(shù)據(jù)和分析結果均以 “平均數(shù)±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 補充硒-VE對胚移供體母羊排卵效果

此次試驗原設計處理并沖胚的供體羊總共是120只，結果四場Ⅰ組有一只供體羊沒有沖胚，所以實際沖胚胎的供體羊是119只，總回收卵1212枚。其中補充 “硒-VE”組供體羊60只，共回收卵689枚，每只平均11.5±3.5枚，且組內各場之間差異不顯著（p＞0.05）；對照組供體羊59只，總回收卵523枚，每只平均8.9±2.9枚，且組內各場之間差異不顯著（p＞0.05）。Ⅰ、Ⅱ組回收卵均數(shù)之間差異極顯著（p＜0.01），詳見表3。

表3 補硒對供體羊沖胚數(shù)的影響

2.2 內窺鏡子宮角輸精法與常規(guī)人工輸精法效果比較

一、二場采用內窺鏡子宮角輸精法，總回收卵604枚，受精卵586枚，受精率97.02%，而三、四場用常規(guī)人工輸精法，總回收卵608枚，受精卵502枚，受精率82.57%，二者差異顯著（p＜0.05）。

3 討論與結論

3.1 使用硒-VE對胚移供體母羊排卵的影響

影響母羊同期發(fā)情排卵的因素很多，遺傳因素可能是最主要因素，不同品種羊的同期發(fā)情率差異較大，同一品種的同期發(fā)情主要受環(huán)境因素、激素水平和飼養(yǎng)管理等的影響[5-6]。在本試驗中，使用硒-VE組供體母羊排卵率極顯著高于不使用該注射液的，說明硒-VE對母羊卵巢和卵泡發(fā)育有著明顯的影響，可能是由于硒和VE不僅提供了供體母羊作為營養(yǎng)所必需的微量元素、維生素，還影響到多種繁殖激素水平，進而影響了受體羊的排卵效果[7]。

3.2 輸精部位和方法對供體母羊排卵受精率的影響

內窺鏡子宮角輸精與子宮頸口輸精相比，輸精次數(shù)只有1次，而子宮頸口輸精2～3次；在同等密度和活力的條件下，子宮角輸精的精液量比陰道子宮頸口輸精少；由于精液被直接輸入子宮角內，沒有了精子通過子宮頸管特殊構造阻攔因素而減少輸入精子，減少了精子在子宮內的運行距離和時間，縮短精子與卵子相遇距離和時間，促進和提高了精卵結合[8]，所以母羊卵子受胎率顯著高于子宮頸口輸精。內窺鏡人工輸精法節(jié)省了公羊；雖然操作麻煩一點，但輸精次數(shù)減少，減少了工作量。

3.3 結論

在其他條件相同的情況下，使用硒-VE對提高薩福克供體母羊的超數(shù)排卵數(shù)量和胚胎發(fā)育有顯著的效果，值得在生產(chǎn)中應用推廣；使用內窺鏡人工輸精法供體母羊的卵子受精率顯著高于常規(guī)子宮頸口人工輸精法，在生產(chǎn)中也值得提倡。

[1]楊鳳（主編）.動物營養(yǎng)學[M].北京:中國農業(yè)出版社,2009.

[2]張乃生（主編）.畜禽營養(yǎng)代謝病防治[M].吉林:金盾出版社, 2005.

[3]吳森,陳福財,王燕燕,等.補硒對薩?？搜蜓寮に厮胶统判Ч挠绊慬J].中國農學通報,2011,27（23）:32-35.

[4]唐啟義.DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)[M].北京:科學出版社,2010.

[5]劉引區(qū),李愛朵,趙建華,等.神木縣薩福克羊胚胎移植效果分析[J].中國畜禽種業(yè),2012,26（9）:55-56.

[6]鄧凱偉,陳鳳曾,等.影響受體羊同期發(fā)情調控的因素[J].河南畜牧獸醫(yī),2007,28（7）:10-11.

[7]陳福財,張磊,王燕燕,等.外源Se對胚胎移植受體母羊黃體發(fā)育和血清激素水平的影響[J].家畜生態(tài)學報,2012,33（4）:43-46.

[8]張劍,張銀國,等.盤羊雜交一代羊子宮角輸精對提高受胎效果的研究[J].2014（5）:23-25.

陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計劃項目資助（2014KTDZ02-01-01）。

李愛朵（1976-），女，陜西省神木縣人，畜牧師，主要從事畜牧技術推廣。

*通訊作者：李新春（1953-），男，陜西省佳縣人，教授，主要從事養(yǎng)羊技術教學與科研推廣工作。