陳立 肖萍 趙志恒 張維強(qiáng) 穆紅

肝臟移植是治療終末期肝病的有效手段。近年來，隨著免疫抑制劑、外科技術(shù)和器官保存技術(shù)的快速發(fā)展，肝移植技術(shù)也正逐漸走向成熟。研究［1，2］表明，肝移植術(shù)后的移植肝功能不良及并發(fā)癥是進(jìn)行再次移植甚至死亡的重要原因之一。目前，臨床對肝移植術(shù)后移植肝臟的監(jiān)測的實驗室指標(biāo)主要依賴于生物化學(xué)和免疫學(xué)檢測方法所覆蓋的肝功能和肝損傷的常規(guī)項目，而選擇用血清蛋白電泳監(jiān)測肝功能恢復(fù)狀況及并發(fā)癥發(fā)生的相關(guān)報道甚少。由于血清蛋白電泳檢測方法的特點是可以將所有血清蛋白組分無疏漏、一次性地顯現(xiàn)在圖譜上，而血清蛋白大部分經(jīng)肝臟合成和分解，極少部分為其他系統(tǒng)代謝，因此，采用蛋白電泳分析血清蛋白各組分的表達(dá)可不同程度地反映移植肝臟的功能恢復(fù)及機(jī)體應(yīng)激等信息。本文研究通過采用血清蛋白電泳的方法檢測肝臟移植患者首次就診及移植后約1年時血清蛋白各組分，對血清蛋白電泳用于肝臟移植術(shù)后肝臟功能恢復(fù)及并發(fā)癥出現(xiàn)的監(jiān)測價值做一分析，總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2013年3月至2013年6月期間因肝臟功能衰竭而接受肝移植手術(shù)的患者33例。其中男25例，女8例，年齡38～56歲。原發(fā)?。阂腋胃斡不?1例，丙肝肝硬化7例，酒精性肝硬化3例，原發(fā)性肝癌2例。

1.2 標(biāo)本采集 分別采集患者首次就診及肝移植術(shù)后10－14個月復(fù)診時空腹靜脈血3 ml。血標(biāo)本室溫靜置1－2 h后，以離心半徑15 cm，3000 r／min離心10 min分離血清，用于血清蛋白電泳，檢測各蛋白組分并進(jìn)行圖譜分析。

1.3 主要儀器與試劑 采用法國Sebia公司HYDRASYS電泳系統(tǒng)及原裝配套試劑。瓊脂糖凝膠：含瓊脂糖 0.8 g／L，pH＝9.1～9.3 tris－巴比妥緩沖液；緩沖液：pH＝8.9～9.5 tris－巴比妥緩沖液；氨基黑染液：pH＝2的4 g／L氨基黑溶液；10%的乙酸；脫色液：0.1%冰醋酸。

1.4 方法 開機(jī)預(yù)熱10 min，點樣加血清10μl，電泳（20℃，電壓與時間的乘積33 Vh），染色、脫色、干燥步驟按照儀器所設(shè)HYDRAGEL 7 PROTEIN程序自動執(zhí)行，570 nm掃描。

1.5 電泳結(jié)果生物參考區(qū)間 白蛋白：60.0%～71.0% ；α1：1.4%～2.9% ；α2：7.0%～11.0% ；β：8.0%～13.0%；γ：9.0%～16.0%。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，移植前后血清各蛋白組分的比較采用配對t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝臟衰竭患者肝移植前后血清蛋白電泳各蛋白組分含量結(jié)果比較 肝臟移植后白蛋白組分含量明顯高于移植前，而γ球蛋白組分含量明顯低于移植前，且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）；α1、α2、β球蛋白組分含量移植前后差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05），見表1。

2.2 肝臟衰竭患者肝移植前后血清蛋白電泳各組分含量及峰形異常分析 移植前有9例譜帶呈現(xiàn)β－γ橋；移植后γ球蛋白含量異常例數(shù)明顯低于移植前，另有2例患者移植后出現(xiàn)寡克隆帶，見表2。

3 討論

表1 肝臟衰竭患者肝移植前后血清蛋白電泳結(jié)果比較（%）

表2 肝臟衰竭患者肝移植前后血清蛋白電泳各組分含量及蛋白帶分析

近年來，國內(nèi)外有關(guān)肝移植術(shù)后肝功能恢復(fù)及并發(fā)癥的臨床研究較為廣泛，但通過實驗室血清蛋白電泳組分分析的方法研究肝移植預(yù)后的文章卻為少見［1－4］。李彥等［5，6］發(fā)表的肝移植患者血清蛋白電泳組分比較的文章主要是針對肝移植術(shù)后出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng)時血清低豐度蛋白表達(dá)的變化，而本文研究通過血清蛋白電泳來分析肝移植術(shù)前、術(shù)后蛋白組分含量變化及異常圖譜，從而了解肝臟功能的恢復(fù)情況，并通過觀察急性時相反應(yīng)蛋白及寡克隆蛋白成分分析術(shù)后并發(fā)癥的出現(xiàn)。本文研究所采用的電泳檢測方法具有可同時、全面系統(tǒng)的分析血清蛋白各組分的特點，結(jié)果分析如下。

3.1 白蛋白組分變化 白蛋白帶是血清蛋白電泳唯一的單組份蛋白帶，由肝實質(zhì)細(xì)胞合成，相對分子質(zhì)量為 66.4×103，等電點 4～5.8，是肝移植術(shù)后監(jiān)測移植肝臟功能的良好指標(biāo)。李彥等［5，6］的雙向電泳研究為防止低豐度蛋白成分被掩蓋，去除了白蛋白后進(jìn)行電泳，導(dǎo)致不能對肝臟合成白蛋白的功能進(jìn)行分析。本文研究所采用的電泳方法中白蛋白峰的位置完全分離于其他組分的單克隆蛋白峰，不存在干擾及掩蓋的問題。本文研究結(jié)果顯示，移植后白蛋白含量顯著高于移植前，且含量小于參考區(qū)間下線者由27例減少至6例，提示移植后肝臟合成白蛋白功能恢復(fù)良好。

3.2 α、β區(qū)帶蛋白組分變化分析 α1區(qū)帶球蛋白組分包括：（1）α1－抗胰蛋白酶，是一種具有蛋白酶抑制作用的急性時相反應(yīng)蛋白，相對分子質(zhì)量為55×103，等電點 4.8。（2）α1－酸性糖蛋白，相對分子質(zhì)量為 40×103，等電點 2.7～3.5，是主要的急性時相反應(yīng)蛋白。（3）α1－脂蛋白，相對分子質(zhì)量 200×103，在肝功能嚴(yán)重障礙時明顯降低。（4）甲胎蛋白，原發(fā)性肝癌特異性蛋白。α2區(qū)帶球蛋白組分：（1）結(jié)合珠蛋白，在血漿中與游離的血紅蛋白結(jié)合，是一種急性時相反應(yīng)蛋白，相對分子質(zhì)量為85～400×103，等電點4.1。（2）α2－巨球蛋白，是血漿中相對分子質(zhì)量最大的蛋白質(zhì)，由肝細(xì)胞與單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)合成，相對分子質(zhì)量為 625～800×103，等電點 5.4。（3）銅藍(lán)蛋白：是一種含銅的α2糖蛋白，相對分子質(zhì)量為120～160×103，等電點4.4，也屬于一種急性時相反應(yīng)蛋白。β區(qū)帶蛋白組分：（1）轉(zhuǎn)鐵蛋白是血清中主要的含鐵蛋白質(zhì)，相對分子質(zhì)量為77×103，等電點5.7。（2）血紅素結(jié)合蛋白：相對分子質(zhì)量為 57×103，和游離血紅素有特異結(jié)合能力，是機(jī)體保存鐵元素的一種方式。（3）β－脂蛋白：相對分子質(zhì)量為 3000×103，由肝細(xì)胞合成，主要功能是運輸脂類。（4）C3，C4：補(bǔ)體成分，屬急性時相反應(yīng)蛋白，肝臟疾病時由于肝細(xì)胞損害導(dǎo)致合成減少。（5）β2－微球蛋白，相對分子質(zhì)量為 11.8×103，炎癥及腫瘤時，濃度可升高。

臨床研究［1－3］證實，肝移植后出現(xiàn)排異等急性并發(fā)癥時機(jī)體可觀察到基因和蛋白水平的表達(dá)變化。由上所述，α1、α2、β 區(qū)帶蛋白組分主要是肝臟合成的時相反應(yīng)蛋白，所以肝移植患者血清蛋白電泳α1、α2、β區(qū)的低相說明肝臟合成功能的衰竭，如移植后出現(xiàn)異常高相，則可提示急性排異反應(yīng)或術(shù)后并發(fā)癥的出現(xiàn)。本文研究結(jié)果顯示，雖然表2中移植后α、β區(qū)帶各組分含量異常例數(shù)較移植前均有所變化，但由表1可見，α、β區(qū)帶各蛋白組分含量移植前后差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，根據(jù)區(qū)帶組分蛋白的主要臨床意義分析可排除急性并發(fā)癥的存在。

3.3 γ區(qū)蛋白組分的量、圖譜形態(tài)變化分析 γ區(qū)帶球蛋白組分：（1）IgG，抗體組分之一，相對分子質(zhì)量 160×103，等電點 6.0～7.3。肝硬化時 IgG 彌散性增高。（2）IgA，抗體組分之一，相對分子質(zhì)量 170×103，肝硬化時IgA明顯升高。（3）IgM，抗體組分之一，相對分子質(zhì)量 900×103，肝病初期 IgM 可增加。（4）C－反應(yīng)蛋白：相對分子質(zhì)量 120×103，等電點 6.2，是急性時相的敏感指標(biāo)。

γ區(qū)的主要蛋白組分為經(jīng)肝臟分解代謝的免疫球蛋白，當(dāng)肝功能嚴(yán)重衰竭如肝硬化晚期時可出現(xiàn)β－γ橋。本文研究結(jié)果顯示，移植前γ區(qū)蛋白組分含量明顯高于移植后，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），并且有9例出現(xiàn) β－γ橋，移植后消失，提示移植后肝功能恢復(fù)良好。但是有2例移植后在均勻的γ區(qū)帶出現(xiàn)寡克隆蛋白帶，可提示患者在移植后出現(xiàn)淋巴系統(tǒng)的異常增生。移植后淋巴細(xì)胞增生性疾病是實體器官移植后一種少見的致命性并發(fā)癥。20世紀(jì)90年代國外首先報道，隨著移植人數(shù)的增加病例逐年增多，臨床表現(xiàn)為非特異性，其發(fā)病機(jī)制與免疫抑制劑的使用、病毒感染有關(guān)，早期診斷及治療有可能改善預(yù)后［3－6］。本文研究中出現(xiàn)的2例移植后寡克隆帶患者，需進(jìn)一步檢查并加強(qiáng)血清蛋白電泳的監(jiān)測，以明確診斷。

綜上所述，分析肝臟移植患者移植前后血清蛋白電泳各組分變化具有監(jiān)測移植肝臟合成功能恢復(fù)及是否出現(xiàn)移植后并發(fā)癥的價值。

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