朱華強(qiáng)

（解放軍107醫(yī)院心內(nèi)科，山東 煙臺(tái) 264002）

?臨床交流?

冠心病患者血小板miR-223和miR-96差異表達(dá)與氯吡格雷反應(yīng)性的關(guān)聯(lián)研究

朱華強(qiáng)

（解放軍107醫(yī)院心內(nèi)科，山東 煙臺(tái) 264002）

目的 探討冠心病患者血小板RNA miR-223與miR-96差異表達(dá)水平及其與氯吡格雷反應(yīng)性間的關(guān)系。方法 不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）患者36例，根據(jù)血小板反應(yīng)指數(shù)（PRI）分組，PRI＜56%為A組，≥56%為B組，各18例。檢測(cè)兩組患者的血小板聚集率、血小板miR-223及miR-96表達(dá)，并分析其與血小板聚集率及PRI間的關(guān)系。結(jié)果 A組的miR-223表達(dá)顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩組miR-96表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；miR-223與PRI呈顯著負(fù)相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而miR-96表達(dá)與PRI之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論 冠心病患者的血小板miR-223低表達(dá)與氯吡格雷治療后血小板反應(yīng)性顯著相關(guān)，對(duì)于個(gè)體化抗血小板治療具有指導(dǎo)意義。

冠心?。谎“宸磻?yīng)性；氯吡格雷抵抗

血小板活化聚集是冠心病的主要病理生理基礎(chǔ)，臨床研究表明，在阿司匹林聯(lián)合肝素治療的同時(shí)，加用氯吡格雷能夠進(jìn)一步提高療效。但即便應(yīng)用氯吡格雷后，仍有部分患者再發(fā)冠狀動(dòng)脈事件[1]。故在冠心病治療中，氯吡格雷抵抗成為臨床研究的重要內(nèi)容。本研究探討了冠心病患者微小血小板RNA miR-223與miR-96表達(dá)水平及其與氯吡格雷反應(yīng)性間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年1月～2014年1月我院收治的UAP患者36例，均在采血前24 h口服阿司匹林300 mg+氯吡格雷300 mg，術(shù)后按照100 mg/次、75 mg/次雙重抗血小板治療。根據(jù)PRI水平分組，PRI＜56%為A組，≥56%為B組。A組18例，男10例，女8例，年齡36～75歲，平均年齡（63.2±2.7）歲；B組18例，男8例，女10例，年齡40～72歲，平均年齡（64.1±2.9）歲。兩組性別與年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

患者均于入院后次日晨取空腹外周靜脈血15 mL，抗凝后于室溫下以200 g離心10 min，留取PRP然后以1500 g離心10min。以1%EDTA和0.1%BAS混合液1 mL沖洗，再次離心，重復(fù)3次提純。常規(guī)進(jìn)行除白細(xì)胞純化血小板，采用TRizol試劑提取血小板總RNA，獲得上層水相后繼續(xù)提取，最終獲得miRNA。采用基座模式進(jìn)行RNA濃度測(cè)定，并進(jìn)行RNA變性電泳，檢測(cè)純化血小板中的白細(xì)胞水平及miRNA水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 血小板聚集率

A組的血小板聚集率平均為（36.71±15.26）%，顯著高于B組的（52.21±13.15）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 miR-223及miR-96表達(dá)

所有樣本的miR-223及miR-96均獲得擴(kuò)增，且其溶解曲線呈現(xiàn)單峰。A組miR-223表達(dá)顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），兩組miR-96表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。擴(kuò)增產(chǎn)物采用瓊脂糖凝膠電泳分析均表現(xiàn)為單一擴(kuò)增條帶。

表1 兩組miR-223及miR-96表達(dá)比較（±s，2-（△Ct））

表1 兩組miR-223及miR-96表達(dá)比較（±s，2-（△Ct））

組別 n miR-223 miR-96 A組 18 0.952±0.085 0.941±0.084 B組 18 0.493±0.073 0.855±0.081

2.3 miR-223、miR-96表達(dá)與血小板聚集率以及PRI的關(guān)系

采用Spearman相關(guān)性分析表明，miR-223及miR-96表達(dá)均與血小板聚集率之間無(wú)明顯相關(guān)性（r=0.0341、0.1475，P＜0.05）；miR-223與PRI呈顯著負(fù)相關(guān)性（r=-0.4129，P＜0.05），而miR-96表達(dá)與PRI差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=-0.0184，P＞0.05）。

3 討 論

ACC/AHA提出經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療指南中指出，對(duì)于血小板聚集率＜50%者，應(yīng)考慮將氯吡格雷的維持劑量由75 mg提高至150 mg。認(rèn)為對(duì)于抗血小板療效不理想的患者，予以個(gè)體化抗栓治療是科學(xué)合理的，但盲目地加大氯吡格雷維持劑量則不合理[2]。因此，評(píng)估患者的血小板功能，從而前瞻性地評(píng)價(jià)氯吡格雷反應(yīng)性及療效非常必要。

miRNA在血小板基因調(diào)控過(guò)程中具有關(guān)鍵性作用，miRNA基因效應(yīng)調(diào)節(jié)能夠獲得特異性的療效，或?yàn)榧膊〉闹委熖峁└鼮橛行У耐緩健７治霾煌膊顟B(tài)下患者的miRAN表達(dá)譜差異，能夠篩選出特異性及靈敏度更高的miRAN，為疾病的診斷與基因治療提供標(biāo)志物或者靶標(biāo)[3-4]。本研究對(duì)UAP患者采用氯吡格雷治療，檢測(cè)了治療后不同血小板活性條件下miRNA的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果顯示，血小板中存在miR-223及miR-96，且在高反應(yīng)性狀態(tài)下呈現(xiàn)表達(dá)下調(diào)。尤其是miR-223表達(dá)下調(diào)非常明顯，與PRI之間呈顯著負(fù)相關(guān)性，與劉繼文等[5]報(bào)道一致。miR-96雖然在高反應(yīng)狀態(tài)下也呈現(xiàn)表達(dá)下調(diào)，但下調(diào)并不明顯，且其與PRI之間并無(wú)明顯相關(guān)性。

綜上所述，miR-223與miR-96能夠作為血小板活性評(píng)估的潛在標(biāo)志物，miR-223低表達(dá)與冠心病患者的血小板高反應(yīng)性顯著負(fù)相關(guān)，其相對(duì)差異表達(dá)對(duì)于臨床個(gè)體化地評(píng)估患者的血小板活性反應(yīng)，指導(dǎo)臨床治療。

[1] 何凌云.氯吡格雷對(duì)糖代謝異常冠心病患者血小板P選擇素表達(dá)的影響及與預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)刊,2011,46(11):54-55.

[2] 劉 潔,楊 進(jìn),銀劍斌,等.氯吡格雷抵抗患者的臨床指標(biāo)、血小板抑制率及P選擇素的比較分析[J].臨床薈萃,2013,28(7):818-821.

[3] 高清江,呂 璐,王 梅,等.冠狀動(dòng)脈介入治療術(shù)后三聯(lián)抗血小板治療對(duì)冠心病合并糖尿病患者的影響[J].臨床薈萃,2014,29(12):1334-1338.

[4] 楊 帆,王 紅,譚保平,何柳平.抗血小板治療對(duì)糖尿病患者冠狀動(dòng)脈支架術(shù)后血小板CD62P的影響[J]. 中華實(shí)用診斷與治療雜志,2013,4:330-332.

[5] 劉繼文,程曉曙,楊人強(qiáng),等.急性冠脈綜合征患者抗血小板藥物療效和對(duì)氯吡格雷的反應(yīng)性[J].中國(guó)循環(huán)雜志,2008,23(3):189-192.

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ISSN.2095-6681.2015.01.007.02