周永紅張皓胡懷強(qiáng)

（1山東省青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青島266021；2中國(guó)人民解放軍濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，濟(jì)南250031）

化濁行血顆粒對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化模型大鼠血管內(nèi)皮功能的影響※

周永紅1張皓1胡懷強(qiáng)2*

（1山東省青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青島266021；2中國(guó)人民解放軍濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，濟(jì)南250031）

目的研究化濁行血顆粒對(duì)食餌性AS模型大鼠血脂、ET-1、NO的影響，探討中藥治療AS作用機(jī)制。方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按質(zhì)量隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組和藥物組，每組12只，采用高脂飼料法建立大鼠食餌性AS模型。藥物組給予化濁行血顆粒水溶液，正常對(duì)照組、模型組分別給予等容量的蒸餾水，連續(xù)干預(yù)8周后檢測(cè)各組TC、TG、HDL-C、LDL-C、ET-1、NO。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，模型組TC、TG、LDL-C明顯增高（P＜0.05），HDL-C基本一致；藥物組與模型組比較，TC、TG、LDL-C明顯降低（P＜0.05），HDL-C明顯增高（P＜0.05）；ET-1、NO三組間均有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)論化濁行血顆粒可調(diào)控血脂，并保護(hù)血管內(nèi)皮。

化濁行血顆粒；動(dòng)脈粥樣硬化；內(nèi)皮素；一氧化氮

以動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）為主要病理基礎(chǔ)的慢性疾病嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康，已經(jīng)成為我國(guó)的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題［1］，防治AS具有重要的健康效應(yīng)和經(jīng)濟(jì)效應(yīng)［2］。內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生與發(fā)展的重要始發(fā)因素［3］，ET-1和NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的關(guān)鍵因子，參與了動(dòng)脈粥樣硬化的過(guò)程。為此本文觀察了化濁行血顆粒對(duì)食餌性AS大鼠血清血脂、ET-1、NO的影響，以期揭示中藥復(fù)方治療AS的可能機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠36只，體重250～300 g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可號(hào)：SCXK（魯）20090001（山東省科學(xué)技術(shù)廳發(fā)），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)號(hào)1205215（山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)發(fā)），檢疫后備用，自由攝食進(jìn)水。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物飼養(yǎng)及取材均遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和保護(hù)的有關(guān)規(guī)定。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物化濁行血顆粒，主要由荷葉、焦山楂、決明子、制水蛭、酒大黃、赤芍、路路通、虎杖、何首烏等組成，由山東魯信藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：2012031701），并按照成人劑量的20倍（12 g/ kg/d）將其制成水溶液，濃度為1.2 g/ml（即1 ml/ 100g），置于4℃冰箱中備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)買(mǎi)后，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w，1 w后按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組和藥物組，每組大鼠各12只。因灌胃致吸入性肺炎模型組死亡2只、藥物組死亡1只。

1.2.2 造模方法參照文獻(xiàn)［4］建立大鼠食餌性AS模型，AS大鼠（包括藥物組和模型組）喂食高脂飼料（配方：3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料），同時(shí)在喂食開(kāi)始時(shí)一次性腹腔注射維生素D 60萬(wàn)IU/kg。對(duì)照組按照體重給予同等體積的生理鹽水。連續(xù)喂12周。1.2.3 給藥方法造模后，藥物組灌胃給予化濁行血顆粒水溶液，劑量為12 g生藥/kg/d（相當(dāng)于70 kg成人每日10倍用量）；正常對(duì)照組、模型組分別給予等容量的蒸餾水，連續(xù)8周。

1.2.4 動(dòng)物處理與取材給藥結(jié)束后禁食8 h，100 g/L水合氯醛腹腔注射（300 mg/kg）麻醉動(dòng)物，于下腔靜脈采取靜脈血，并分離血清用于檢測(cè)。

1.2.5 檢測(cè)指標(biāo)與方法TC、TG、HDL-C、LDL-C，用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)；內(nèi)皮素（endothelin-1，ET-1）檢測(cè)試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供；硝酸還原酶法測(cè)定一氧化氮（nitrogen oxide，NO）水平，試劑盒由南京建成生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有資料數(shù)據(jù)用SAS8.1版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。組間比較用單因素方差分析，所用計(jì)量資料均采用（x±s）（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。P為雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1.1 化濁行血顆粒對(duì)各組大鼠血脂的影響見(jiàn)表1。

表1 化濁行血顆粒對(duì)各組大鼠血脂的影響（mmol/L，x±s）

2.2 化濁行血顆粒對(duì)各組大鼠血清ET-1、NO的影響見(jiàn)表2。

表2 化濁行血顆粒對(duì)AS模型大鼠內(nèi)皮功能的影響（x±s）

3 討論

隨著社會(huì)發(fā)展、生活水平的提高，人們飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣、工作方式及環(huán)境等各方面的變化，疾病譜系也隨之發(fā)生改變，動(dòng)脈粥樣硬化已成為引發(fā)心腦血管疾病的重要病因病機(jī)。王新陸教授基于當(dāng)今時(shí)病特點(diǎn)，提出了血濁理論，認(rèn)為血液受體內(nèi)外各種致病因素影響，失卻其清純狀態(tài)，或喪失其循行規(guī)律，影響其生理功能，因而擾亂臟腑氣機(jī)的病理現(xiàn)象［5］。高血壓、糖尿病、高脂血癥、高尿酸、高同型半胱氨酸血癥不僅是動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，也是均屬血濁的范疇［6］，血濁是基于中醫(yī)基礎(chǔ)理論提出的病理現(xiàn)象，不僅是各種現(xiàn)代疾病的重要病理基礎(chǔ)，形成之后又能作為繼發(fā)性致病因素，加重其病理變化，血濁的病理特點(diǎn)符合動(dòng)脈粥樣硬化形成與發(fā)展，可見(jiàn)血濁是AS的病理樞紐。清化血濁可調(diào)整臟腑功能狀態(tài)，增強(qiáng)臟腑功能，使氣旺血和，血脈暢通，瘀祛新生，氣化復(fù)常，痰濁得消，經(jīng)絡(luò)得通，為AS的基本治法?；瘽嵝醒w粒主要由荷葉、焦山楂、決明子、制水蛭、酒大黃、赤芍、路路通、虎杖、何首烏等藥物組成，一可化濁，清化血中濁邪，恢復(fù)血液的清純精專(zhuān)狀態(tài)；二可行血，及時(shí)改善血濁帶來(lái)的血行障礙以及脈道紊亂狀態(tài)［7］，充分體現(xiàn)了清化血濁的治療方法。該方是本課題組使用多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方，在治療AS方面有較好的療效［8］。

脂肪浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)是動(dòng)脈粥樣硬化形成的主要機(jī)制之一。血脂在AS形成和發(fā)展過(guò)程中扮演著重要的角色，是導(dǎo)致AS和心腦血管疾病的重要原因［9］。通過(guò)降低血中TC、TG、LDL-C的水平，減少脂質(zhì)在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面沉積和侵襲，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移，減緩AS的進(jìn)展，并使粥樣硬化斑塊回縮。本文觀察了化濁行血顆粒對(duì)AS模型大鼠血脂的影響。結(jié)果顯示，模型組與正常對(duì)照組比較，血清TC、TG、LDL-C均明顯增高，說(shuō)明經(jīng)過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)可導(dǎo)致大鼠的高脂血癥。藥物組與正常對(duì)照組比較，血清TC、TG、LDL-C無(wú)顯著性差異，而HDL-C明顯增高；藥物組與模型組比較，血清TC、TG、LDL-C明顯降低、HDL-C增高，說(shuō)明經(jīng)過(guò)化濁行血顆粒治療，可有效控制模型大鼠血脂水平，并能有效升高HDL-C水平，這可能是化濁行血顆?？刂蒲?，干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的機(jī)制之一。

血管內(nèi)皮在調(diào)節(jié)血管穩(wěn)態(tài)中起關(guān)鍵作用，血管內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化的早期病理表現(xiàn)。內(nèi)皮素（ET-1）和一氧化氮（NO）是由血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的血管活性物質(zhì)，在維持著正常的血管內(nèi)皮功能中具有重要作用。ET-1是一種強(qiáng)效、效應(yīng)持久的內(nèi)皮源性血管收縮肽，具有十分廣泛的生物活性，能促進(jìn)血小板、炎細(xì)胞的積聚，引起巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，平滑肌細(xì)胞遷徙和增殖［10］，是血栓形成、炎癥發(fā)生的重要細(xì)胞因子，血漿ET-1水平與AS的嚴(yán)重程度呈明顯的正相關(guān)關(guān)系［11］。研究結(jié)果顯示，化濁行血顆粒干預(yù)的藥物組中ET-1含量較模型組中明顯降低，由此可見(jiàn)，化濁行血顆?？梢砸种艵T-1的表達(dá)，這可能是其治療AS的機(jī)制之一。

NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的重要血管舒張因子，是以L精氨酸為底物在不同類(lèi)型一氧化氮合酶（NOS）催化作用下合成，具有抑制血小板凝聚和黏附因子的表達(dá)阻斷單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，抑制T等收縮血管物質(zhì)的分泌調(diào)節(jié)血管張力，抑制低密度脂蛋白（LDL-C）的氧化，進(jìn)而抑制AS的進(jìn)展［12］，NO參與AS形成、發(fā)展的各個(gè)環(huán)節(jié)［13］。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，藥物組NO含量較模型組明顯增高，說(shuō)明化濁行血顆?？纱龠M(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO，從而抑制動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化形成、發(fā)生發(fā)展，保護(hù)血管內(nèi)皮。

［1］Heron M，Hoyert DL，MurphySL，et al.Deaths:final data for 2006［J］.Natl Vital Stat Rep，2009，57（14）:1-134.

［2］蔣立新，李希，李靜，等.中國(guó)動(dòng)脈粥樣硬化性缺血性腦卒中患者他汀類(lèi)藥物應(yīng)用現(xiàn)狀調(diào)查［J］.中華流行病學(xué)雜志，2010，（8）:925-928.

［3］Ross R，Glomset JA.Atherosclerosis and the arterial smooth muscle cell:proliferation of smooth muscle is a key event in the genesis of the lesion of atherosclerosis［J］．Science，1973，180（93）:1332-1339．

［4］楊鵬遠(yuǎn)，芮耀誠(chéng)，焦亞斌.動(dòng)脈粥樣硬化大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕ⅲ跩］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，24（7）：802-804.

［5］王新陸.論“血濁”與“治未病”［J］.天津中醫(yī)藥，2008，25（3）：177-180.

［6］王新陸.關(guān)于血濁理論在現(xiàn)代疾病譜系中作用與地位的探討［J］.天津中醫(yī)藥，2011，28（5）：355-357.

［7］王新陸.腦血辨證［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2002，110.

［8］胡懷強(qiáng)，周永紅，曹秉振，等.化濁行血丸治療頸動(dòng)脈粥樣硬化癥的臨床研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29（2）：66-68.

［9］Schafers M，Schober O，Hermann S.Matrix metalloproteinase as imaging targets for inflammatory activity in atherosclerotic plaques［J］.J Nucl Med，2010，51（5）:663.

［10］潘雪峰，董華進(jìn)，宮澤輝.內(nèi)皮素與心血管功能研究的最新進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊(cè)，2007，34，（1）：12-16．

［11］張紅珍，李麗.內(nèi)皮素、一氧化氮與動(dòng)脈粥樣硬化及缺血性心腦血管疾病關(guān)系探討［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2004，2（3）：171-172.

［12］潘會(huì)君，唐寧，華曉東，等.中藥調(diào)控一氧化氮合酶-一氧化氮系統(tǒng)的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（12）：202-205．

［13］Blanco M，Castellanos M，Rodrí guez-Yá ez M，et al.High blood pressure and inflammation are associated with poor prognosis in lacunar infarctions［J］. Cerebrovasc Dis，2006，22（2-3）:123-129.

Effect of Huazhuo Xingxue Granules on Vascular Endothelial Function in the Common Carotid Artery of Atherosclerosis Rats

ZHOU Yonghong1，ZHANG Hao1，HU Huaiqiang2
（1 Medical College of Qingdao University，Shangdong Province，Qingdao266021，China；2 Department of Neurology，the General Hospital of Jinan Military Command，Jinan 250031，China）

Objective To explore the effect of Huazhuo Xingxue granules on blood lipid，ET-1 and NO in the common carotid artery of atherosclerosis rats.Methods The rats were randomly divided into control group，model group，and medicine groups.Each group had 12 rats.Establishing AS model by adopting high lipid feed method.The medicine group was administrated with Huazhuo Xingxue granules. The control group and model group were taken orally equivolumetric distilled water.Blood lipid，ET-1 and NO were measured after treatment for a course of 8 weeks.Results Comparing with the control group，the TC，TG，LDL-C and ET-1 of the model group obviously increased，there were significantly difference（P＜0.05），HDL-C of model group was in accord with the control group.Comparing with the model group，the TC，TG，LDL-C of the medicine group obviously decreased，there were significantly difference（P＜0.05）.HDL-C and NO of the medicine group was significantly higher than those of the model group（P＜0.05）.Conclusion Huazhuo Xingxue granules can regulate blood lipid，and protect vascular endothelial function.

Huazhuo Xingxue granules；atherosclerosis；ET-1；NO

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.09.064

1672-2779（2015）-09-0127-03

：楊杰本文校對(duì)：范玉芹

2015-04-09）

山東省自然科學(xué)基金（No：ZR2010HM109）；山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家基金（No：2009BSB02208）

*通訊作者：huhuaiqiang@126.com