肖 瑤，彭逢春，王凈凈*，劉春華，左亞杰，何 群，何英櫻，袁斯思

（1.湖南省人民醫(yī)院，湖南 長沙410005；2.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院，湖南 株洲412000；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410208；4.湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，湖南 長沙410006；5.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙410007； 6.湖南郴州市中醫(yī)院，湖南 郴州423000）

眩暈是指感覺自身或環(huán)境的旋轉(zhuǎn)、擺動，是一種運(yùn)動幻覺，在以眩暈/頭暈為主訴的患者中，存在后循環(huán)缺血(posterior circulation ischemia，PCI)的比例可達(dá)59.89%[1-2]。神經(jīng)細(xì)胞凋亡是腦缺血損傷的重要病理機(jī)制。 Bcl-2、Bax 基因是目前研究較明確的一對在功能上相互對立的凋亡調(diào)控基因，其表達(dá)蛋白對神經(jīng)元凋亡具有調(diào)控作用。 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)能維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育，阻止腦細(xì)胞凋亡。 臨床實(shí)踐證明，“眩暈定方” 能有效改善眩暈患者的臨床癥狀[3]?！把灦w?！?是將導(dǎo)師王凈凈教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的自擬方“眩暈定方”，經(jīng)過水提，超臨界二氧化碳(SFE-CO2)萃取丹參、當(dāng)歸、川芎等5 味中藥材，制成的純中藥顆粒。 筆者以腦干前庭神經(jīng)核相關(guān)因子作為觀測指標(biāo)，研究“眩暈定顆?！睂馓撗鲂秃笱h(huán)缺血性眩暈家兔模型的影響，以期探討該藥的作用機(jī)制，為眩暈定方中藥新藥開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康成年新西蘭白兔70 只 （由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供， 動物合格證號：SCXK（湘）2010-0011，雌雄各半，清潔級，體質(zhì)量（2.0±0.3）kg，兔齡3～4個(gè)月，室溫10～20 ℃，濕度65～70%，除正常組自由飲水進(jìn)食外，其余家兔自由進(jìn)水、控制進(jìn)食+高脂飼料喂食。

1.1.2 高脂飼料 高脂飼料（每100 g 高脂飼料中含有膽固醇1 g，蛋黃粉15 g，豬油5 g 和普通飼料79 g）， 由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供和制作；膽固醇，購自長沙麗欣生物（CAS 號：57-88-5）；蛋黃粉， 亳州市眾意蛋業(yè)有限責(zé)任公司 （批號：20100726）；豬油，自制。

1.1.3 受試藥物 眩暈定顆粒：由黃芪、當(dāng)歸尾、黨參、川芎、牡丹皮、地龍、葛根、丹參等11 味藥組成，以上中藥材均購自于安徽海鑫中藥飲片有限公司，經(jīng)過SFE-CO2提取、 水煎煮回流提取以及濃縮、純化、干燥后得到顆粒制劑（由湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院與第一附屬醫(yī)院藥劑科完成），每袋6 g（相當(dāng)于生藥材86 g）[4]；眩暈定方濃縮液：藥物組成同顆粒制劑， 藥材浸泡后， 水煎煮2 次， 每次煎得藥液200 mL，合并藥液，濃縮至125 mL，每毫升含生藥1 g；西比靈膠囊：5 mg/粒（西安楊森制藥有限公司，批號：20100203）；眩暈寧片：0.38 g/片，（桂林三金生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：20100504）。

1.1.4 主要藥物 消痔靈注射液（吉林集安制藥集團(tuán)，批號：20100416）；利多卡因注射液（上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號：20100618）。 消痔靈注射液與利多卡因按1∶1 的比例混合配成造模用硬化劑注射液。

1.1.5 試劑及儀器 SABC 試劑盒（SA1022，Lot NO.06A10BJ）、BDNF 試劑盒 （BA4053）、Bcl-2 試劑盒（BA0412）、Bax 試劑盒（BA0315），均購自武漢博士德生物工程有限公司；LEICA DM LB2 型雙目顯微鏡（德國LEICA 公司）；Shandon 325 型石蠟切片機(jī)（英國Shandon 公司）；自制“可調(diào)速眩暈產(chǎn)生儀”(由湖南航空航天機(jī)械加工廠制作)，在其直流調(diào)速電機(jī)前加一個(gè)調(diào)速器，使旋轉(zhuǎn)速度0～150 r/min 自由可調(diào)，通過機(jī)械離心力誘發(fā)家兔產(chǎn)生眩暈癥狀，在電機(jī)上連一個(gè)圓形金屬盒用來固定家兔，大小(直徑×高)：35 cm×35 cm；自制“逃避刺激反射訓(xùn)練箱”(由湖南航空航天機(jī)械加工廠制作)， 大小為70 cm×65 cm×65 cm，底板為金屬板，通電后可因?qū)щ姸a(chǎn)生疼痛刺激， 在籠內(nèi)安裝1個(gè)25 cm 的高臺， 其面積為6 cm×30 cm 大小，供家兔逃避疼痛刺激而設(shè)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 參照血管性眩暈動物模型制作方法[5]，選取清潔級健康成年新西蘭大白兔70 只，體質(zhì)量（2.0±0.3）kg，雌雄各半。 隨機(jī)抽取其中8 只作為正常組，予以普通飼料80 g/（kg·d），每天分2次喂給，不作任何干預(yù)；其余62 只采用饑餓+高脂飼料+旋轉(zhuǎn)+頸椎旁注射硬化劑復(fù)合方法造模。 高脂干預(yù)， 即所有造模家兔予以高脂飼料10 g/(kg·d)喂養(yǎng)，時(shí)限為實(shí)驗(yàn)全過程；饑餓干預(yù)，即在高脂飼料喂養(yǎng)之外，僅給予普通飼料15 g/(kg·d)同時(shí)一次投予，時(shí)限同高脂飼料；硬化劑注射，先予以頸椎旁注射硬化劑(記為實(shí)驗(yàn)開始第1 天)，1 周后重復(fù)1 次，以后隔周重復(fù)1 次，6 周注射結(jié)束，共注射4 次；在第4 次硬化劑注射之前，即實(shí)驗(yàn)第39～41 天，使用逃避刺激反射訓(xùn)練箱對正常組及造模家兔進(jìn)行逃避刺激反射訓(xùn)練，以胡蘿卜進(jìn)行獎(jiǎng)勵(lì)以建立穩(wěn)固的條件反射；實(shí)驗(yàn)第42 天，在第4 次硬化劑注射完畢后，使用可調(diào)速眩暈產(chǎn)生儀進(jìn)行旋轉(zhuǎn)刺激，用逃避刺激反射訓(xùn)練箱中的跳臺裝置測定旋轉(zhuǎn)刺激前后的跳臺耗時(shí)，對比記錄；實(shí)驗(yàn)第43 天，對所有家兔行指標(biāo)檢測，得出結(jié)果后通過綜合評分，將符合后循環(huán)缺血性眩暈?zāi)Ｐ偷募彝眠x出，視為造模成功。

1.2.2 模型評定 自擬后循環(huán)缺血性眩暈家兔模型評分量表，給造模家兔進(jìn)行評分，選出滿足評定標(biāo)準(zhǔn)的家兔，視為造模成功。 （1）旋轉(zhuǎn)后家兔出現(xiàn)眼震；（2）腦干聽覺誘發(fā)電位顯示出現(xiàn)I～V 波型分化差、重復(fù)性不良或PL 延長，和/或IPL 延長；（3）腦血流圖顯示椎-基底動脈系統(tǒng)供血較造模前減少20%或以上；（4） 旋轉(zhuǎn)后跳臺耗時(shí)較旋轉(zhuǎn)前延長6 s 或以上。其中必須滿足第1 條，再加上（2）-（4）中任意1 條者均判定為成功模型。

1.2.3 動物分組及給藥方法 將造模成功的家兔選出，按體質(zhì)量由小到大編號，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方法再分為模型組、西藥對照組、中藥對照組、眩暈定湯劑組、眩暈定顆粒組，共5 組。 模型組以10 mL雙蒸水灌胃； 西藥對照組予以西比靈0.5 mg/(kg·d)溶于10 mL 雙蒸水中灌胃； 中藥對照組以眩暈寧0.165 g／(kg·d)溶于10 mL 雙蒸水中灌胃；眩暈定湯劑組以眩暈定方濃縮液10 mL/(kg·d)灌胃；眩暈定顆粒組以0.5 g/(kg·d) 溶于10 mL 雙蒸水中灌胃。給藥時(shí)間為7 d。 灌胃結(jié)束后對所有家兔進(jìn)行標(biāo)本取材及檢測。

1.2.4 免疫組織化學(xué)方法檢測相關(guān)因子的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，空氣栓塞法處死家兔后，冰盆上迅速取出完整腦組織，置入40 g/L 多聚甲醛液中于4 ℃下固定24 h，截取腦干部分（含較完整的前庭神經(jīng)核），常規(guī)脫水， 石蠟包埋后行冠狀位切片， 片厚4～5 μm。 切片常規(guī)脫蠟至水，經(jīng)30% H2O2甲醇處理，室溫10 min 滅活內(nèi)源性過氧化物酶， 微波熱修復(fù)抗原，滴加5% BSA 封閉液，室溫20 min；滴加適當(dāng)稀釋的一抗（工作濃度約為1∶200），濕盒內(nèi)4 ℃孵育過夜，充分漂洗，加入相應(yīng)生物素化二抗，37 ℃孵育， 漂洗后滴加試劑SABC，37 ℃孵育，PBS 洗滌，，DAB 顯色，蘇木素輕度復(fù)染，脫水，透明，封片。 用顯微鏡（德國Leica 公司）和Mias2000 圖像分析系統(tǒng)采集圖像。 每張切片隨機(jī)選取5個(gè)相鄰視野，以切片背景的灰度值作背底校正，對每張切片前庭神經(jīng)核區(qū)Bcl-2、Bax 及BDNF 免疫反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行光密度測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 動物存亡情況

按照造模方法“1.2.1”，截止至第6 周，死亡13只，死亡率21%，造模家兔達(dá)到眩暈?zāi)Ｐ蜆?biāo)準(zhǔn)的共46 只，造模成功率74.2%。 造模致死的原因考慮注射位置及深度把握不當(dāng)，誤使利多卡因注入延髓導(dǎo)致呼吸麻痹而死。 將造模成功的家兔隨機(jī)分為模型組、西比靈組、眩暈寧組、眩暈定湯劑組和顆粒組，共5 組，每組8 只。 各組分別灌胃7 d 后，模型組死亡2 只， 眩暈寧組及眩暈定顆粒組各死亡1 只，西比靈組及眩暈定湯劑組無死亡。 灌胃致死原因考慮灌胃操作不當(dāng)或手法不熟練誤使藥液灌入肺中導(dǎo)致肺栓塞而死。

2.2 各組Bcl-2 表達(dá)的比較

光鏡下， 各組家兔前庭神經(jīng)核區(qū)Bcl-2 陽性神經(jīng)元染色均以胞漿有棕黃色物質(zhì)沉積為主， 也有部分胞膜及核膜著色，并可顯示神經(jīng)元輪廓。 正常組可見大量棕色顆粒，均勻分布，Bcl-2 表達(dá)較為明顯，而模型組僅有少量棕色顆粒，偶有Bcl-2 表達(dá)。 西比靈組、眩暈定湯劑組和顆粒組可見較多的棕色顆粒，各組數(shù)量相當(dāng)，Bcl-2 的表達(dá)接近正常組， 較眩暈寧組明顯。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，模型組家兔前庭神經(jīng)核區(qū)Bcl-2 表達(dá)較正常組顯著降低（P＜0.001），而經(jīng)過藥物干預(yù)后的各組家兔Bcl-2 表達(dá)較模型組增強(qiáng) （P＜0.05或P＜0.01），其中以眩暈定湯劑組、眩暈定顆粒組以及西比靈組較為明顯（P＜0.01 或P＜0.001），其三組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。說明眩暈定湯劑及顆粒劑均有上調(diào)Bcl-2 基因表達(dá)的作用，其療效與西比靈相當(dāng)。 見表1，圖1。

表1 眩暈定顆粒對眩暈?zāi)Ｐ图彝们巴ハ嚓P(guān)因子表達(dá)情況的影響（±s）

表1 眩暈定顆粒對眩暈?zāi)Ｐ图彝们巴ハ嚓P(guān)因子表達(dá)情況的影響（±s）

注：與正常組比較▲P＜0.05，▲▲P＜0.01，▲▲▲P＜0.001；與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01；###P＜0.001；與眩暈寧組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

組 別正常組模型組西比靈組眩暈寧組眩暈定湯劑組眩暈定顆粒組F 值P 值n 8687 8 7 Bcl-2 平均光密度0.31±0.05 0.16±0.02▲▲▲0.25±0.08##0.22±0.05▲▲#0.28±0.07###*0.29±0.06###*5.381＜0.001 Bax 平均光密度0.26±0.05 0.38±0.07▲▲▲0.30±0.04##0.34±0.09▲▲0.26±0.04###**0.27±0.04###*5.543＜0.001 BDNF 平均光密度0.38±0.04 0.22±0.05▲▲▲0.34±0.04###0.30±0.07▲##0.36±0.08###0.38±0.05###*6.294＜0.001

2.3 各組Bax 表達(dá)的比較

光鏡下，各組家兔前庭神經(jīng)核區(qū)Bax 陽性神經(jīng)元染色均以胞漿有棕黃色物質(zhì)沉積為主，也有部分胞膜及核膜著色，并可顯示神經(jīng)元輪廓。 正常組偶見棕色顆粒，Bax 的表達(dá)不明顯；而模型組有大量棕色顆粒，分布密集，Bax 的表達(dá)顯著。 眩暈定湯劑組及顆粒組可見散在棕色顆粒，其數(shù)量少于西比靈組及眩暈寧組。 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，模型組家兔前庭神經(jīng)核區(qū)Bax 表達(dá)顯著高于正常組（P＜0.001），而經(jīng)過藥物干預(yù)后各組家兔Bax 表達(dá)較模型組降低，其中以眩暈定湯劑組、眩暈定顆粒組較為明顯（P＜0.001），其兩組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 說明眩暈定湯劑及顆粒均能下調(diào)促凋亡基因Bax 表達(dá)，且其療效相當(dāng)。 見表1，圖1。

2.4 各組BDNF 表達(dá)的比較

在光鏡下可見BDNF 免疫組化反應(yīng)棕黃色陽性物質(zhì)多存在于神經(jīng)細(xì)胞胞漿、神經(jīng)突起中，部分膠質(zhì)細(xì)胞也呈陽性，但核不著色，有時(shí)可見陽性反應(yīng)物環(huán)細(xì)胞表面分布。 正常組可見大量棕色顆粒，均勻分布，BDNF 表達(dá)較為明顯，而模型組僅有少量棕色顆粒，偶有BDNF 表達(dá)。 西比靈組、眩暈定湯劑組和顆粒組可見較多的棕色顆粒， 各組數(shù)量相當(dāng)，BDNF 的表達(dá)接近正常組， 眩暈寧組可見少量棕色顆粒，BDNF 的表達(dá)不明顯。 統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，模型組家兔前庭神經(jīng)核區(qū)BDNF 表達(dá)較正常組顯著降低（P＜0.001），而經(jīng)過藥物干預(yù)后的各組家兔BDNF 表達(dá)較模型組都有所增加（P＜0.01），其中以眩暈定湯劑組、 眩暈定顆粒組以及西比靈組較為明顯 （P＜0.001）， 其三組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05）。 見表1，圖1。

圖1 各組Bcl-2、Bax、BDNF 的表達(dá)光鏡圖（×400）

3 討論

后循環(huán)缺血是由椎基底動脈系統(tǒng)缺血引起的病變，是常見的缺血性腦血管疾病，約占所有缺血性腦血管病的20%[6]。 后循環(huán)血管走行及分支生理變異大，約60%供應(yīng)腦干的血管較細(xì)，很容易受到血流動力學(xué)和血管腔變化的影響。 前庭核團(tuán)在腦干的分布廣，使其對缺血極其敏感。 因此，后循環(huán)缺血患者常有眩暈。 后循環(huán)缺血的發(fā)病機(jī)制包括大動脈狹窄和閉塞引起低灌注、血栓形成及動脈源性栓塞等，主要病理特征是動脈粥樣硬化及在其基礎(chǔ)上形成的血管狹窄[7]。 后循環(huán)缺血性眩暈屬中醫(yī)“眩暈”范疇。 歷來醫(yī)家們認(rèn)為此病病因病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，以虛為主，主要夾風(fēng)、火、痰、瘀等。 而目前認(rèn)為“氣虛血瘀”是最主要的病因病機(jī)，也是現(xiàn)代人最普遍的體質(zhì)特性[8]，這也意味著現(xiàn)代人更易因“虛、瘀”致暈。

根據(jù)后循環(huán)缺血的病理改變特點(diǎn)和中醫(yī)眩暈的病因病機(jī)，本實(shí)驗(yàn)采用饑餓+高脂飼料+頸椎旁注射硬化劑+旋轉(zhuǎn)的復(fù)合方法造模， 力求造成與臨床相符的病癥結(jié)合的后循環(huán)缺血性眩暈動物模型。 中醫(yī)認(rèn)為高脂血癥和動脈粥樣硬化屬于本虛標(biāo)實(shí)，本虛指臟腑虛損元?dú)獠蛔悖?標(biāo)實(shí)指痰濁瘀血交阻內(nèi)留。 若脾失健運(yùn)，水谷不化，則釀生痰濁，積聚體內(nèi)，故有“脾為氣血生化之源”、“脾為生痰之源”之說，故我們選擇“饑餓+高脂飼養(yǎng)”為干擾因素貫穿于整個(gè)造模過程。 本實(shí)驗(yàn)前期研究亦證實(shí)[9]，高脂飼養(yǎng)能使家兔血液粘稠度增加，降低其腦血流量。 硬化劑注射后， 注射側(cè)頸部肌肉會出現(xiàn)頸椎偏斜甚至扭曲。 組織病理學(xué)顯示，頸椎側(cè)面肌肉和頸動脈管壁組織早期有變性、壞死，后期肌肉纖維化攣縮、動脈管壁纖維化粘連和管腔縮窄等。 提示該方法能使頸部肌肉纖維、攣縮，并可能破壞頸椎力學(xué)平衡機(jī)制，使頸動脈受到牽張減少其血流，從而導(dǎo)致后循環(huán)缺血[10]。

大腦對缺血缺氧十分敏感，腦缺血后繼發(fā)的病理生理改變對腦細(xì)胞造成的損傷是腦缺血損傷的重要原因之一。 一般認(rèn)為壞死與凋亡是受損腦細(xì)胞死亡的兩大主要機(jī)制，當(dāng)損傷達(dá)到一定程度時(shí)引起細(xì)胞壞死，而低程度的損傷則導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[11]。 Bcl-2 蛋白家族主要分布于線粒體、 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞核的外膜，是一組細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白。 Bcl-2 作為目前首個(gè)被確認(rèn)有抑制細(xì)胞凋亡作用的因子，成為腦缺血再灌注損傷的研究熱點(diǎn)之一，其家族成員之間的相互作用對腦缺血后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡起了重要的調(diào)節(jié)作用。 其中Bcl-2 和Bax 作為Bcl-2 家族蛋白的最主要成員，其表達(dá)的變化對細(xì)胞凋亡起重要的調(diào)節(jié)作用，兩者的比值決定了細(xì)胞是否凋亡：當(dāng)Bcl-2 表達(dá)占優(yōu)時(shí)抑制細(xì)胞凋亡，Bax 表達(dá)占優(yōu)時(shí)則促進(jìn)細(xì)胞凋亡[12-13]。 BDNF 是在腦內(nèi)合成的一種蛋白質(zhì)，它廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，對神經(jīng)元的生存、分化、生長和維持神經(jīng)元正常的生理功能起關(guān)鍵作用。BDNF 的表達(dá)增加，可延緩神經(jīng)元的壞死和凋亡，并刺激神經(jīng)血管的生成，最終實(shí)現(xiàn)神經(jīng)生理功能的重建[14]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組家兔與正常組及其他藥物治療組比較， 腦干前庭神經(jīng)核Bcl-2 及BDNF表達(dá)下降，Bax 表達(dá)上調(diào)，提示此復(fù)合造模法能使促進(jìn)細(xì)胞凋亡因素增加，神經(jīng)保護(hù)因素減弱。 考慮其原因可能是長期高脂飲食喂養(yǎng)，導(dǎo)致家兔動脈粥樣硬化，加之頸椎旁硬化劑注射使椎基底動脈狹窄及局部血管炎癥侵潤，造成后循環(huán)缺血，繼而腦細(xì)胞損傷所致。

“眩暈定方”是導(dǎo)師王凈凈教授在總結(jié)中醫(yī)諸家對眩暈病因病機(jī)論述的基礎(chǔ)上，以“補(bǔ)陽還五湯”作為基礎(chǔ)方，依據(jù)《景岳全書·眩暈》“無虛不作眩”，及明·虞摶提出的“血瘀致眩”的理論，在多年臨床經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)方，具有益氣升清、活血化瘀之功效。 方以黃芪、當(dāng)歸尾、川芎、牡丹皮、丹參、地龍、防風(fēng)、葛根等11 味藥組成。 其中黃芪為君藥，能大補(bǔ)脾胃之氣，使氣旺而血行，祛瘀而不傷正；有研究發(fā)現(xiàn)[15]，黃芪多糖可通過下調(diào)Bax 蛋白的表達(dá)對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。 川芎辛溫香竄，為血中之氣藥；藥理研究表明[16]，川芎嗪可通過上調(diào)缺氧缺血大鼠腦組織中的Bcl-2 蛋白表達(dá)，下調(diào)Bax 蛋白表達(dá)，從而抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，減輕缺氧缺血所致的腦組織損傷。 丹參具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、涼血消癰的功效；試驗(yàn)研究證實(shí)[17]，丹參可抑制動脈粥樣硬化斑塊的形成， 而調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax 表達(dá)及炎癥機(jī)制參與可能是其抗動脈粥樣硬化的機(jī)制之一；又有研究表明[18]，丹參多酚酸鹽能明顯提升腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織中BDNF 及GDNF 的含量，且隨著藥物劑量的增加，其提升作用越發(fā)明顯。本研究亦證實(shí)，經(jīng)藥物干預(yù)后，眩暈定顆粒可以促進(jìn)腦干前庭神經(jīng)核內(nèi)的Bcl-2、BDNF表達(dá)上調(diào)， 推測眩暈定顆?？赡芡ㄟ^逆轉(zhuǎn)粥樣硬化，消除局部炎癥反應(yīng)，從而改善腦干前庭系統(tǒng)的供血障礙，使腦神經(jīng)元細(xì)胞得到保護(hù)。 前期臨床研究已經(jīng)證實(shí)，眩暈定湯劑能明顯改善氣虛血瘀型眩暈患者的中醫(yī)證候，其療效確切[3]。 動物實(shí)驗(yàn)研究亦表明[19-20]，眩暈定方能改善椎基底動脈供血不足型眩暈家兔模型大腦的循環(huán)血流量， 降低血脂，改善血流變學(xué)指標(biāo)，且安全有效，無明顯毒副作用。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還證實(shí)，眩暈定顆粒與眩暈定湯劑療效相當(dāng)，既保持了湯劑吸收快、作用迅速的特點(diǎn)，又克服了湯劑使用時(shí)煎煮不便、服藥量大、易霉變等缺點(diǎn)，發(fā)展前景良好，值得在臨床上進(jìn)行推廣。

[1]中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會.眩暈診治專家共識[J].中華神經(jīng)科雜志，2010，43(5)：369-373.

[2]Zhang Y，Chen X，Wang X，et al. A clinical epidemiological study in 187 patients with vertigo [J]. Cell Biochem Biophys，2011，59(2)：109-112.

[3]田麗君，肖 磊，王凈凈.自擬眩暈定方治療氣虛血瘀型眩暈30例療效觀察[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，17(3)：21-23.

[4]許江麗，王凈凈，何 群，等.超臨界CO2 萃取眩暈定方中5 味藥材的工藝研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，29（4）：41-43.

[5]張孝文，張建國.耳鼻咽喉-頭頸外科疾病的動物模型[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：178-83.

[6]Savitz SL，Caplan LR，Vertebrobasilar Disease [J]. NEngl JMed，2005（352）：2 618-3 626.

[7]朱惠萍，李常紅，張燕輝，等.后循環(huán)缺血患者血管評估價(jià)值的研究[J].北京醫(yī)學(xué)，2014，36(5)：354-357.

[8]邵致格，胡蔓青，王長松.現(xiàn)代人群的體質(zhì)病理學(xué)特征：氣虛血瘀[J].醫(yī)學(xué)與哲學(xué)，2005，26(4)：74-75.

[9]王凈凈，黃云峰，劉春華，等.眩暈定方對兔血管性眩暈氣虛血瘀證模型血液流變學(xué)和腦血流圖的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27(4)：26-29.

[10]Schindler CK，Shinoda S，Simon RP，et al. Subcellular distribution of bcl-2 family proteins and 14-3-3 within the hippo campus during seizure induced neural death in the rat [J]. Neurosci Lett，2004，356(3)：163-166.

[11]朱明雙，鄭 重，黃 勇，等.注射硬化劑法制作家兔頸椎病椎動脈型模型-腦干聽覺誘發(fā)電位實(shí)驗(yàn)研究[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，23(3)：42-44.

[12]林海平，王 永，沈 燕，等.大鼠腦缺血再灌注損傷中細(xì)胞凋亡相關(guān)調(diào)控因子的研究進(jìn)展[J].中國老年學(xué)雜志，2014，5，(4)：2 589-2 591.

[13]Burguillos MA，Hajji N，Englund E，et al. Apoptosis-inducing factor mediates dopaminergic cell death in response to LPSinduced inflammatory stimulus：evidence in Parkinson＇s disease patients [J]. Neurobiol Dis，2011，41(1)：177-188.

[14]張 萌，吳海琴，王虎清.BDNF 在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用機(jī)制[J].卒中與神經(jīng)疾病，2013，20(6)：384-387.

[15]劉宏志，白建梅，譚 軍，等.黃芪多糖預(yù)處理對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)作用[J]. 實(shí)用糖尿病雜志，2014，10(4)：31-32.

[16]張永香，朱風(fēng)蓮.川芎嗪對缺氧缺血大鼠腦組織Bcl-2 及Bax 蛋白表達(dá)的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2010，19(24)：3 025-3 027.

[17]萬 磊，許 濤，李樹生.丹參預(yù)防家兔動脈粥樣硬化的分子機(jī)制[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15(22)：3 045-3 046，3 049.

[18]王 強(qiáng)，張 一，王 榕，等.丹參多酚酸鹽對缺血再灌注損傷大鼠腦組織BDNF 和GDNF 的影響[J].卒中與神經(jīng)疾病，2013，20(5)：272-274.

[19]劉春華，顏 旭，鄧浩慶，等.眩暈定方對后循環(huán)缺血性眩暈家兔血脂水平及椎動脈粥樣硬化的影響[J]. 湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，11(5)：573-575.

[20]劉春華，王凈凈，鄧浩慶，等.眩暈定方對PCIV 氣虛血瘀證家兔模型血漿ETI、CGRP 和腦血流圖的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2013，1(1)：42-45.