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        2015-11-26 02:00:28韓麗娟
        關(guān)鍵詞:黃體發(fā)情卵泡

        韓麗娟

        (山東省青州市畜牧局,青州 262500)

        受體羊?qū)ε咛ヒ浦残Ч绊懙难芯?/p>

        韓麗娟

        (山東省青州市畜牧局,青州 262500)

        試驗(yàn)對(duì)受體羊埋植自制型陰道海綿栓13 d進(jìn)行同期發(fā)情處理,并根據(jù)分組安排分別在撤栓的同時(shí)肌肉注射PMSG 200 IU/只、第1次發(fā)情的同時(shí)肌肉注射LHRH-A325 μg/只或16.7 μg/只或不注射藥物,觀察胚胎移植效果。結(jié)果表明:受體在撤栓后不注射藥物組的移植利用率各組間均有顯著差異(P<0.05),移植妊娠率各組間均沒(méi)有顯著差異(P>0.05)。受體以往的繁殖情況對(duì)移植妊娠率有極顯著影響(P<0.01)。受體卵巢上有功能黃體存在時(shí),卵泡的有無(wú)及大小對(duì)移植妊娠率的影響較?。≒>0.05)。

        綿羊;胚胎移植

        胚胎移植(embryotransfer,ET)技術(shù)是在短時(shí)間內(nèi)迅速擴(kuò)大優(yōu)良種畜的有效方法。提供胚胎的母畜稱為供體(donor),接受胚胎的母畜稱為受體(recipient)。雖然,國(guó)內(nèi)外對(duì)綿羊及胚胎移植技術(shù)的研究已有多年歷史,但在實(shí)踐應(yīng)用中往往受到各種因素的影響,效果還不太穩(wěn)定。

        1 材料

        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

        受體羊?yàn)闁|北細(xì)毛羊、半細(xì)毛羊、東北半細(xì)毛羊與小尾寒羊的雜交羊及肉用雜種羊,共367只。

        飼養(yǎng)方式相同:為全年半放牧半舍飼的方式,試驗(yàn)期間以舍飼為主。精料組成:豆餅10%+玉米25%+食鹽0.3%+預(yù)混料2.7%。

        1.2 試驗(yàn)藥品

        釋放型陰道海綿栓:自制;CIDR:新西蘭哈密爾頓生物公司產(chǎn);孕馬血清促性腺激素(PMSG):1 000 IU/支,寧波市激素制品有限公司;垂體促卵泡素(FSH):100 IU/支,寧波市激素制品有限公司;氯前列烯醇(cloprostenol):0.2 mg/支,寧波市激素制品有限公司;促排卵素3號(hào)(LHRH-A3):20 IU/支,寧波市激素制品有限公司;絨毛膜促性腺激素(HCG):100 IU/支,寧波市激素制品有限公司;酒精,碘酒,生理鹽水,雙蒸水,新潔爾滅,青霉素,鏈霉素,等等。

        1.3 儀器與設(shè)備

        Motic SMZ-140體視顯微鏡,Motic SMZ-140體視顯微鏡(麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司制造);手術(shù)移植活動(dòng)保定車8臺(tái)(自制);MICROLIGHT150型雙穿刺腹腔鏡(澳大利亞產(chǎn));移植針(澳大利亞Castell公司提供);常用手術(shù)等器械(國(guó)產(chǎn))。

        2 方法

        2.1 受體的胚胎移植

        為防止手術(shù)時(shí)腹壓過(guò)大而造成操作困難和生殖器官的損傷,于手術(shù)前24 h將受體羊單獨(dú)圈養(yǎng),斷食,空腹。手術(shù)器械等用0.15%的新潔爾滅溶液浸泡30 min進(jìn)行常規(guī)消毒。

        受體羊在其乳房下3~5 cm腹中線兩側(cè)各作一切口,借助腹腔鏡和子宮鉗翻動(dòng)、撥開(kāi)卵巢系膜,暴露卵巢以觀察兩側(cè)卵巢上的黃體情況。將判定合格的受體羊黃體側(cè)子宮角前端用子宮鉗牽引出腹腔外,并用鈍針在子宮角前端無(wú)血管處扎孔,以裝有合格胚胎的移植針穿過(guò)扎孔處移入子宮角內(nèi)腔中,之后將子宮角放回腹腔,兩側(cè)切口各作一針常規(guī)縫合、消毒,同時(shí)肌肉注射青、鏈霉素各1支。

        2.2 受體移植后觀察及飼養(yǎng)管理

        受體羊移植手術(shù)后即少量逐步地給水和飼料,第2天放回大群放牧,維持較高的營(yíng)養(yǎng)水平,細(xì)心觀察,避免產(chǎn)生應(yīng)激。每天早、晚2次定時(shí)試情,觀察受體羊的返情和流產(chǎn)情況。移植后2個(gè)情期不返情者,按妊娠母羊進(jìn)行飼養(yǎng)管理。

        2.3 受體羊同期發(fā)情處理

        埋植陰道海綿栓中的148只受體羊撤栓后隨機(jī)分組,并在第1次表現(xiàn)發(fā)情時(shí)用不同的藥物組合進(jìn)行處理:第1組,200 IU PMSG+16.7 μgLHRH-A3;第2組,200IU PMSG+25 μg LHRH-A3;第3組,200 IU PMSG;第4組,25μgLHRH-A3;第5組,生理鹽水。具體處理方法見(jiàn)表1。

        表1 受體羊撤栓后不同藥物處理方法

        2.4 數(shù)據(jù)處理

        本試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

        3 結(jié)果與分析

        3.1 受體撤栓后不同藥物處理組合對(duì)胚胎移植的影響

        從表2可見(jiàn),在移植利用率方面,第1組(60.87%)與其他4組間均沒(méi)有顯著差異(P>0.05);第5組與第3、4組間也沒(méi)有顯著差異(P>0.05);第4組與第3組間差異顯著(P<0.05);第2組與第3組間差異極顯著(P<0. 01)。移植妊娠率在5組之間沒(méi)有顯著差異(P>0.05),但注射生理鹽水的第5組最低(57.89%),注射200 IU PMSG+25 μgLRH-A3的第2組最高(68.42%)。

        表2 受體羊撤栓后不同藥物處理組合對(duì)胚胎移植的影響

        3.2 受體羊以往繁殖情況對(duì)移植效果的影響

        本組試驗(yàn)通過(guò)對(duì)受體羊以往繁殖記錄情況的分析,選擇具有不同繁殖史(即分為正常妊娠生產(chǎn)、上次未受胎和未經(jīng)產(chǎn)的育成羊3種情況)的羊作為受體進(jìn)行胚胎移植試驗(yàn),比較移植后該群受體羊的妊娠情況。具體結(jié)果見(jiàn)表3。

        表3 受體羊以往繁殖情況對(duì)移植效果的影響

        由表3可見(jiàn),上次未受胎母羊的移植妊娠率(40.30%)與以往繁殖機(jī)能正常即有正常生產(chǎn)記錄母羊的移植妊娠率(58.97%)和育成羊(63.64%)相比,均差異極顯著(P<0.01)。但繁殖機(jī)能正常組羊與育成羊組差異不顯著(P>0.05)。

        3.3 受體卵巢上卵泡對(duì)胚胎移植結(jié)果的影響

        對(duì)211只移入胚胎受體羊卵巢上的卵泡和黃體情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所有移入胚胎的受體羊卵巢上都有一級(jí)黃體或有一級(jí)黃體存在的同時(shí),還有直徑小于3 mm、個(gè)數(shù)少于2個(gè)的卵泡。

        由表4可見(jiàn),受體羊卵巢上存在一級(jí)黃體并有卵泡的移植妊娠率(31.03%)低于無(wú)卵泡的受體羊(58.24%),但兩者間差異不顯著(P>0.05)。由表5可見(jiàn),當(dāng)受體羊卵巢上存在一級(jí)黃體卵泡直徑在1 mm以下移植后的妊娠率(31.25%)高于卵泡直徑在1~3 mm的妊娠率(30.77%),但差異也不顯著(P>0.05)。

        表4 卵巢上的卵泡對(duì)受體羊移植妊娠率的影響

        表5 卵巢上直徑小于3 mm的卵泡對(duì)受體羊移植妊娠率的影響

        4 討論

        4.1 受體撤栓后不同藥物處理組合對(duì)胚胎移植的影響

        本試驗(yàn)結(jié)果表明,受體撤栓后注射200 IU PMSG+25 μg LHRH-A3的妊娠率最高(68.42%),但與其他組相比均差異不顯著(P>0.05),說(shuō)明受體在埋植陰道栓后再注射PMSG和LH類的激素會(huì)影響受體的發(fā)情及妊娠,外源的PMSG和LH類藥物可以促進(jìn)卵泡的發(fā)育、排卵和黃體的形成,有利于胚胎的移植存活。

        4.2 受體以往的繁殖情況對(duì)其妊娠率的影響

        在胚胎移植試驗(yàn)及生產(chǎn)實(shí)踐中受體羊的選擇和使用既關(guān)系到胚胎移植效果,又關(guān)系到移植費(fèi)用。所以有必要研究受體羊以往不同的繁殖情況對(duì)胚胎移植的影響。

        本試驗(yàn)對(duì)211只受體羊以往的繁殖情況進(jìn)行了調(diào)查,上次未受胎羊的受胎率極顯著低于繁殖機(jī)能正常組(P<0.01)和育成羊組(P<0.01)。因此,為了提高胚胎移植的成功率,應(yīng)選有正常繁殖史的母羊做受體羊。育成羊也可用做受體羊,可以得到相近的移植妊娠率。

        丁建平等[1]報(bào)道,受體羊第3次重復(fù)同期發(fā)情有效率、功能黃體形成比率均顯著低于第1次(P<0.05);第2次低于第1次,但差異不顯著(P>0.05);受體羊連續(xù)3次手術(shù)移植其妊娠率分別為66.2%、66.7%和66.7%,胚胎成羔率分別為54.9%、55.7%和50.0%,3次結(jié)果間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。表明受體羊的重復(fù)移植并不影響妊娠率。

        4.3 受體卵巢上卵泡和黃體對(duì)胚胎移植的影響

        受體羊的同期發(fā)情處理對(duì)移植利用率和受胎率有直接影響,生理狀況越接近,同期自然狀態(tài)越有利于胚胎著床、發(fā)育和妊娠的維持。不同個(gè)體對(duì)同期發(fā)情處理產(chǎn)生反應(yīng)所需藥物劑量存在差異。在大規(guī)模生產(chǎn)處理中,以相似的激素劑量進(jìn)行處理時(shí)必定會(huì)對(duì)不同個(gè)體發(fā)情和發(fā)情后的生理過(guò)程產(chǎn)生影響,使受體羊卵巢上的卵泡在移植時(shí)處于有無(wú)或大、小不一的狀態(tài)。激素處理開(kāi)始時(shí)卵巢上卵泡狀態(tài)在個(gè)體間的不一致,是導(dǎo)致同期發(fā)情發(fā)生變異的一個(gè)重要原因[2],從而在發(fā)情后第7天手術(shù)時(shí)卵巢上呈現(xiàn)不同大小的卵泡。參與募集的卵泡并非都能夠發(fā)育排卵,大多數(shù)卵泡會(huì)發(fā)生閉鎖退化,少量被選擇優(yōu)勢(shì)化卵泡也并非都能成熟排卵。因此,卵泡閉鎖可發(fā)生在卵泡發(fā)育的各個(gè)階段。決定優(yōu)勢(shì)卵泡是否成熟排卵的主要因素是卵泡波與黃體溶解的同步性[3]。當(dāng)有黃體存在時(shí),雖然LH振幅較高,但高孕酮濃度致使LH釋放頻率較低,只有同時(shí)具備高振幅和高頻率才能使LH濃度升高到促進(jìn)卵泡成熟和排卵的水平[4]。

        在卵泡生長(zhǎng)過(guò)程中,激素失調(diào)可導(dǎo)致以后形成的黃體功能異常,如:FSH、LH分泌的紊亂。優(yōu)勢(shì)卵泡的顆粒細(xì)胞分泌的抑制素不足,不能完全抑制FSH分泌,使其余卵泡不能大部分閉鎖,改變了卵巢內(nèi)環(huán)境,影響了優(yōu)勢(shì)卵泡的發(fā)育。

        從本試驗(yàn)的結(jié)果可以看出:受體卵巢上當(dāng)存在一級(jí)黃體時(shí),卵巢上有無(wú)直徑1~3 mm的卵泡并不影響胚胎的移植妊娠率。

        [1] 丁建平,章孝榮,琚書(shū)存,等.受體羊重復(fù)使用對(duì)同期發(fā)情和胚胎移植效果的影響[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2005,32(6):31-32.

        [2] 陳兵,魏泓.羊卵泡發(fā)育動(dòng)態(tài)變化及超數(shù)排卵方法的改進(jìn)[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2004,24(2):202-204.

        [3] 吳延光,于元松,譚景和.哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育模式及其調(diào)控機(jī)理[J].動(dòng)物學(xué)雜志,2002,37(6):83-86.

        [4] MihmM,Baguisi A,Boland MP,et al.Association between the duration ofdominance ofthe ovulatoryfollicle and pregnancyrate in beef heifers[J].Reprod Fertil,1994,102:123-130.

        S826.3

        A

        2095-3887(2015)06-0068-03

        10.3969/j.issn.2095-3887.2015.06.022

        2015-08-13

        韓麗娟(1972-),女,畜牧師,研究生學(xué)歷。研究方向:動(dòng)物遺傳育種與繁殖。

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