吳尚華，沈玉鵬，楊志華，魏桂梅

（1.甘肅省中醫(yī)院白銀分院，甘肅 白銀730090；2.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州730050）

自擬宣肺定喘湯對(duì)咳嗽變異性哮喘模型大鼠血清INF-γ和IL-4水平的影響

吳尚華1，沈玉鵬2，楊志華2，魏桂梅1

（1.甘肅省中醫(yī)院白銀分院，甘肅 白銀730090；2.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州730050）

咳嗽變異性哮喘；宣肺定喘湯；免疫調(diào)節(jié)；INF-γ和IL-4

咳嗽變異性哮喘（CVA）又稱隱匿性哮喘，是以氣道過(guò)敏高反應(yīng)及慢性氣道炎癥為主要表現(xiàn)的一種特殊類型的哮喘，易因感冒、化學(xué)物質(zhì)刺激、氣候驟變等誘發(fā)或加重［1］，臨床上30%的干性咳嗽是由咳嗽變異性哮喘所致，且其發(fā)病率有增高的趨勢(shì)［2］。新近研究發(fā)現(xiàn)，CVA主要體現(xiàn)為氣道慢性炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為氣道高反應(yīng)、高敏感癥狀，二者密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2比值低于正常，或Th2功能亢進(jìn)、Th1功能低下，均可以引起T淋巴細(xì)胞的含量異常，進(jìn)而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在研究自擬宣肺定喘湯對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠Th1、Th2型細(xì)胞因子（IFN-γ、IL-4）水平的影響，以探討其對(duì)咳嗽變異性哮喘的免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料和方法

1.1 藥物和劑量

1.1.1 宣肺定喘湯組由蜜麻黃、射干、黃芩、五味子、半夏、僵蠶、蟬蛻等組成。藥材由甘肅省中醫(yī)院藥劑科提供。以0.38 g/ml為等效劑量，依次配置低、中、高劑量組溶液，并將其放置于4℃冰箱保存。

1.1.2 陽(yáng)性對(duì)照組即小兒肺熱咳喘顆粒（海南新中正制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)Z20140102），由石膏、連翹、敗醬草等藥物組成，配制成濃度為0.429 g/m l的溶液，放置于4℃冰箱保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康的4周齡清潔級(jí)Wistar大鼠60只，雌雄各30只，體重（100±20）g，由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供（合格證號(hào)2014－11－006）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

大鼠IFN-γ、IL-4定量夾心ELISA檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自上海西唐生物有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

清潔級(jí)Wistar實(shí)驗(yàn)幼齡大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、宣肺定喘湯低劑量組、宣肺定喘湯中劑量組、宣肺定喘湯高劑量組（以上各組分別用A、B、C、D、E、F表示）。

1.5 模型復(fù)制

參照咳嗽變異性哮喘豚鼠模型復(fù)制方法［3］，采用卵蛋白和氫氧化鋁激發(fā)致敏并用卵蛋白激發(fā)的方法復(fù)制CVA模型大鼠（依次用A、B、C、D、E、F組表示）。正常飼養(yǎng)1周，除空白對(duì)照組外，其余各組均在第1、第8天對(duì)每只大鼠腹腔注射10%的卵蛋白和A（lOH）3混合溶液1m l致敏。自第2周，將B、C、D、E、F組大鼠置于密閉有機(jī)玻璃罩內(nèi)，給予含1%OVA溶液的生理鹽水超聲霧化激發(fā)20分鐘，每天一次，共10天。激發(fā)前30分鐘，C、D、E、F組分別灌胃給藥治療。第3周進(jìn)行咳嗽次數(shù)測(cè)定，從腹主動(dòng)脈采血，用離心機(jī)分離血清，測(cè)定血清IFN-γ、IL-4含量。

模型評(píng)估：進(jìn)行激發(fā)實(shí)驗(yàn)時(shí)，觀察各組大鼠反應(yīng)，癥狀表現(xiàn)有陣發(fā)性咳嗽、嗆咳、毛發(fā)聳立、呼吸困難或憋氣、呼吸頻率增快等，有以上一種癥狀就提示造模成功。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 體征觀察

空白對(duì)照組的大鼠體重穩(wěn)定增長(zhǎng)，毛色光亮，反應(yīng)靈敏，行動(dòng)敏捷，呼吸頻率正常，節(jié)律規(guī)則。各實(shí)驗(yàn)組大鼠在激發(fā)實(shí)驗(yàn)前呼吸平穩(wěn)，飲食正常，無(wú)特殊異常癥狀；激發(fā)實(shí)驗(yàn)后出現(xiàn)陣發(fā)性咳嗽、嗆咳、打噴嚏、流清涕、呼吸急促、煩躁多動(dòng)等癥狀。

2.2 各組大鼠血清IFN-γ檢測(cè)結(jié)果比較（見(jiàn)表1）

表1提示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清IFN-γ值明顯降低（P＜0.05）；與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組，宣肺定喘湯高劑量組、中劑量組、低劑量組血清IFN-γ明顯升高（P＜0.01）。

2.3 各組大鼠血清IL-4檢測(cè)結(jié)果比較（見(jiàn)表2）

表2結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清IL-4值明顯升高（P＜0.01）；與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組，宣肺定喘湯高劑量組、中劑量組、低劑量組血清IL-4明顯降低（P＜0.05），且宣肺定喘湯低劑量組、中劑量組與高劑量組相比，具有顯著性差異（P＜0.05）。

3 討論

3.1 本病發(fā)病源于痰，解于痰

本病歸屬于中醫(yī)的“咳嗽”、“喘證”、“哮病”等疾病范疇。古醫(yī)籍中有關(guān)咳嗽的論述較多，《內(nèi)經(jīng)》云：“五臟六腑皆令人咳，非獨(dú)肺也?！睆?qiáng)調(diào)肺受外感因素影響，尤其以風(fēng)邪為主，使臟腑功能失調(diào)，均可致咳嗽。本病的癥狀以慢性咳嗽反復(fù)發(fā)作為主。在病因上，外因?yàn)橥飧辛?，其中以風(fēng)為主；內(nèi)因以飲食不節(jié)、肺脾氣虛為主。在病機(jī)上，肺為嬌臟，易受內(nèi)外之邪侵襲而為病，肺氣不宣、閉塞，肺管不利，氣道攣急［4］，其宣發(fā)肅降功能失調(diào)，肺管的組織形態(tài)也隨之發(fā)生改變，導(dǎo)致氣管痙攣［5］。經(jīng)研究表明：CVA的轉(zhuǎn)歸與平素正氣虛弱、病位深淺、病情輕重、診治是否得當(dāng)有關(guān)。風(fēng)邪外犯，引動(dòng)宿痰，反復(fù)感冒，誘發(fā)伏痰，故而本病多喘息、喉中痰鳴、氣急，且病情纏綿，病程較長(zhǎng)。《癥因脈治》說(shuō)：“哮病之因，痰飲留伏，結(jié)成巢臼，潛伏于內(nèi)，偶有七情之犯，飲食之傷……則哮喘之癥作矣?！闭f(shuō)明本病因痰飲內(nèi)伏，遇飲食、情志及外感可誘發(fā)。肺為水之上源，脾胃乃水谷之海，肺、脾、腎三臟功能失調(diào)，津液代謝障礙，痰濕內(nèi)盛是本病內(nèi)在因素。治法多以宣肺化痰、清熱化痰、健脾化痰、溫肺化痰等為主。

3.2 中藥復(fù)方宣肺定喘湯與小兒肺熱咳喘顆粒藥效學(xué)評(píng)估

本實(shí)驗(yàn)選用自擬宣肺定喘湯以宣肺止咳、祛風(fēng)解痙為基本治法。麻黃性辛散，疏風(fēng)宣肺，散寒平喘，以驅(qū)邪外出。杏仁、前胡降氣止咳，宣降結(jié)合，適合肺臟特征，通調(diào)上焦氣機(jī)。五味子性酸斂，麻黃性辛散，一收一散，調(diào)節(jié)氣機(jī)，預(yù)防肺氣宣發(fā)太過(guò)。地龍、蟬蛻屬蟲類藥，解痙散風(fēng)之力強(qiáng)，且地龍能緩急平喘，蟬蛻能解表。諸藥相合，不寒不熱，藥性平和?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為，麻黃堿可松弛支氣管平滑肌，且作用持久，可解除支氣管平滑肌痙攣，起到鎮(zhèn)咳、抗過(guò)敏作用［6］。杏仁為肺經(jīng)之要藥，可肅降肺氣，止咳平喘，苦杏仁所產(chǎn)生的氰氫酸、苯甲酸能抑制呼吸中樞，使得呼吸加深，減少咳嗽頻次，下氣除喘，達(dá)到鎮(zhèn)咳平喘的效果。小兒肺熱咳喘顆粒具有清熱化痰、宣肺化痰的作用，其主要由杏仁、石膏、金銀花等11味中藥組成，主要用于熱邪所致的咳嗽、惡風(fēng)、痰黃、喘息等癥狀，具有一定的局限性。而宣肺定喘湯除具有清熱宣肺之基本功效外，還多用蟲藥，如僵蠶、蟬蛻、地龍等，具有息風(fēng)止痙的作用，可緩解氣道痙攣的癥狀，用于風(fēng)邪引起的各種喘息發(fā)作性呼吸道疾病。

3.3 本病發(fā)病機(jī)制的探究

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)免疫學(xué)對(duì)于CVA發(fā)病機(jī)制的研究多集中于氣道重塑及免疫因子調(diào)節(jié)兩個(gè)方面。研究認(rèn)為，T淋巴細(xì)胞為主要的免疫反應(yīng)輔助細(xì)胞，按其功能主要分為Th1、Th2兩種，前者具有調(diào)節(jié)免疫、抗感染的功能，后者可調(diào)控機(jī)體免疫變態(tài)反應(yīng)，二者相互抑制，保持機(jī)體免疫的平衡狀態(tài)，若機(jī)體發(fā)生變態(tài)反應(yīng)，則免疫調(diào)節(jié)作用失常（Th1功能不足，Th2功能亢進(jìn)，Th1/Th2的比值低于正常），故CVA氣道的慢性炎癥與高反應(yīng)性有密切的聯(lián)系［7］。Th1細(xì)胞又稱炎癥性T細(xì)胞，主要分泌INF-γ等，可促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞轉(zhuǎn)化，具有較強(qiáng)的抗感染作用，同時(shí)亦可加強(qiáng)宿主自身免疫功能，從而提高自身抵抗力。Th2主要分泌IL-4、IL-5等，可刺激B細(xì)胞增殖并產(chǎn)生、分泌特異性抗體IgE，使其參與體液免疫?？乖吞禺愋缘腎gE交聯(lián)可導(dǎo)致炎性介質(zhì)釋放的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，通過(guò)INF-γ抑制IL-4的活性來(lái)減少體內(nèi)IgE的生成，從而抑制喘息性疾病發(fā)作的早期過(guò)程。

據(jù)藥物現(xiàn)代藥理研究，組方中麻黃、半夏、蟬蛻、僵蠶、地龍諸藥合用，可松弛支氣管平滑肌，緩解支氣管痙攣，抑制免疫炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到免疫調(diào)節(jié)作用。因此，自擬宣肺定喘湯能借助抑制細(xì)胞因子INF-γ、IL-4的水平、降低機(jī)體抗原和特異性抗體交聯(lián)，從而抑制或阻斷咳嗽變異性哮喘的早期發(fā)病過(guò)程，這可能是中藥復(fù)方治療CVA的機(jī)制之一。

表1 各組大鼠血清IFN-γ含量（±s）

表1 各組大鼠血清IFN-γ含量（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，▲P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.01

組別例數(shù)IFN-γ（pg/ml）空白對(duì)照組10120.20±19.31模型對(duì)照組1082.46±12.24▲陽(yáng)性對(duì)照組1092.86±11.16#宣肺定喘湯高劑量組10114.32±16.73#宣肺定喘湯中劑量組10101.67±10.36#宣肺定喘湯低劑量組1094.15±12.44#

表2 各組大鼠血清IL-4含量（±s）

表2 各組大鼠血清IL-4含量（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，▲P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，#P＜0.05；與宣肺定喘湯高劑量組比較，★P＜0.05

組別例數(shù)IL-4（pg/ml）空白對(duì)照組1012.36±2.13模型對(duì)照組1020.12±2.67▲陽(yáng)性對(duì)照組1016.62±1.16#宣肺定喘湯高劑量組1015.96±2.53#宣肺定喘湯中劑量組1016.65±1.36#★宣肺定喘湯低劑量組1017.15±2.44#★

［1］中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組.咳嗽的診斷與治療指南（草案）［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2005，28（11）：738-743.

［2］侯春光.二陳雙龍湯治療咳嗽變異性哮喘60例［J］.實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2002，2（5）：23.

［3］Nishitsuji M，F(xiàn)ujimura M，Oribe Y，et al.A guinea pig model for cough variant asthma and role of tachykinins［J］.Exp Lung Res JT-Experimental lung research，2004，30（8）：723-737.

［4］譚婉君.辨證治療咳嗽變異型哮喘［J］.江西中醫(yī)藥，2008，39（1）：39.

［5］李珊.風(fēng)咳方治療咳嗽變異性哮喘的臨床觀察［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

［6］張的鳳，張金蓮，呂宇虹，等.麻黃相關(guān)藥物應(yīng)用現(xiàn)狀［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，18（5）：76-77.

［7］Haczku A，Macary P，Haddad E B，et al.Expression of Th2-cytokines IL-4 and IL-5 and Thl-cytokines IFN-γ in ovalbumin-exposed sensitized Brown-norway rats［J］.Immunology，1996（88）：247-251.

G424.31

B

1671-1246（2015）18-0158-02

甘肅省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目（GZK-2014-30）