黎倩倩，張彥兵，相 笑，魏建超，齊鵬飛，石元元，陸瑩梅，夏 鵬，劉 珂，邵東華，李蓓蓓，馬志永，孫延鳴，邱亞峰

（1. 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子 832003；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241）

·研究論文·

豬清道夫受體SRA/CD204多克隆抗體的制備以及該受體介導(dǎo)的細(xì)菌吞噬功能分析

黎倩倩1，2，張彥兵1，2，相 笑2，魏建超2，齊鵬飛2，石元元2，陸瑩梅2，夏 鵬2，劉 珂2，邵東華2，李蓓蓓2，馬志永2，孫延鳴1，邱亞峰2

（1. 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子 832003；2. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海 200241）

針對(duì)豬SRA/CD204胞外區(qū)對(duì)應(yīng)的基因片段（614～1324 bp）進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，PCR擴(kuò)增獲得目的片段并克隆至原核表達(dá)載體 pET-28a中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-SRA-c。利用原核表達(dá)系統(tǒng)獲得高效表達(dá)于包涵體中的重組蛋白rSRA-c（約32 kDa），利用親和層析技術(shù)獲得純化的rSRA-c。利用純化的rSRA-c為免疫原，免疫Balb/c小鼠（100 μg/小鼠），制備多抗血清。經(jīng)Western blot結(jié)果顯示，該多抗血清不僅可以識(shí)別rSRA-c，而且可以識(shí)別真核表達(dá)的全長(zhǎng)的豬SRA/CD204（約55 kDa）。免疫熒光分析表明該多抗血清可以清楚地識(shí)別表達(dá)于CHO細(xì)胞膜上的SRA/CD204。最后，利用表達(dá)豬SRA/CD204的CHO細(xì)胞，對(duì)其介導(dǎo)的細(xì)菌吞噬功能進(jìn)行了研究，結(jié)果表明豬SRA/CD204可以有效地介導(dǎo)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的吞噬。本研究為進(jìn)一步研究豬SRA/CD204在病原微生物感染中的作用奠定了基礎(chǔ)。

清道夫受體；重組蛋白；多克隆抗體；細(xì)菌；吞噬

清道夫受體（scavenger receptors，SRs）由于可介導(dǎo)乙酰化的低密度脂蛋白（Ac-LDL）的吞噬和降解，而被首次發(fā)現(xiàn)。研究表明SRs在動(dòng)脈粥樣硬化、阿爾茲海默氏癥、骨代謝、肺損傷、炎癥、先天性免疫、宿主防御等多方面也起著重要的作用［1］。SRs現(xiàn)已成為重要的先天性免疫受體，在維護(hù)生理平衡和疾病發(fā)生的過(guò)程中起著重要的作用。

根據(jù)分子結(jié)構(gòu)和功能的不同，清道夫受體家族可以分為A-H八個(gè)亞類［2］。其中，A類清道夫受體最先被鑒定，其功能也研究的最為深入［3］。A類清道夫受體共有5類成員，均為含有同源三聚體結(jié)構(gòu)的跨膜蛋白。其中，巨噬細(xì)胞清道夫受體A（SRA），又名CD204，是最早被克隆鑒定的。自然情況下，SRA以3種形式存在：SRA-I、SRA-II以及SRA-III，他們是同一基因的不同剪接體（alternatively spliced variants）?，F(xiàn)有研究顯示，在哺乳動(dòng)物中，主要以SRA-I/II兩種功能形式存在，因此，有關(guān)SRA的報(bào)道基本上是關(guān)于SRA-I/II［4］。SRA/CD204作為巨噬細(xì)胞清道夫受體，主要表達(dá)于巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞，有研究表明，SRA/CD204也在內(nèi)皮細(xì)胞［5］、肺上皮細(xì)胞［6］、原代的鼠成纖維細(xì)胞中表達(dá)［7］。迄今為止，SRA/ CD204是研究最為深入的清道夫受體分子，它不僅參與脂代謝，在動(dòng)脈粥樣硬化、腦中風(fēng)、敗血癥、病原微生物感染等中也起著重要的作用。但是，到目前為止，由于受到抗體等限制，豬SRA/CD204分子的功能還鮮有報(bào)道。

本研究利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了豬SRA/ CD204胞外區(qū)部分，并利用純化的重組蛋白為免疫原，成功制備了可以識(shí)別豬SRA/CD204的多克隆抗體，并用表達(dá)豬SRA/CD204的CHO細(xì)胞，對(duì)其介導(dǎo)的細(xì)菌吞噬功能進(jìn)行了初步研究。

1 材料與方法

1.1 材料 原核表達(dá)載體 pET-28a和真核表載體pcDNA3.0由本實(shí)驗(yàn)室保存；各種限制核酸內(nèi)切酶購(gòu)自Fermentas公司；DNA Marker購(gòu)自北京天根生物公司；大腸桿菌感受態(tài)DH5α和大腸桿菌感受態(tài)BL21（DE3）細(xì)胞購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；鎳離子親和柱購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司；氨芐霉素、卡那霉素、IPTG、蛋白預(yù)染Marker、抗His標(biāo)簽鼠源單抗、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗鼠二抗購(gòu)自Sigma公司；Lipofectamine 2000和熒光二抗購(gòu)自購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；小提質(zhì)粒試劑盒、大提質(zhì)粒試劑盒、DNA膠回收試劑盒均購(gòu)置于Axygen公司；CHO細(xì)胞購(gòu)于中科院細(xì)胞庫(kù)。

1.2 方法

1.2.1 豬SRA/CD204基因的克隆 根據(jù)GenBank登錄的序列（登錄號(hào)：NM_001243874）設(shè)計(jì)引物（序列見(jiàn)表1），以豬肺提取的RNA反轉(zhuǎn)錄成的cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性 5 min；95℃變性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸30 s，共35個(gè)循環(huán)；72℃再延伸10 min，4℃保存。將產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定后，切膠回收后連接至T載體，將重組質(zhì)粒送生物公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.2 抗體制備

1.2.2.1 原核表達(dá)載體構(gòu)建 以pMD18-T-SRA/CD204wt為模板，用特異性引物Pet-SRA-Forward和Pet-SRA-Reverse（序列見(jiàn)表1），擴(kuò)增獲取胞外區(qū)部分基因片段，PCR產(chǎn)物用DNA膠回收試劑盒回收，將膠回收產(chǎn)物和載體pET-28a利用Sac I和Xho I雙酶切，分別利用DNA純化回收試劑盒回收SRA-c和pET-28a的酶切產(chǎn)物，16℃連接過(guò)夜。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α中，涂在含有卡納霉素的LB固體培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)12～18 h。挑取單克隆菌落，置于含有卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基（50 μg/mL）中，5～8 h后提取質(zhì)粒并進(jìn)行酶切鑒定，將產(chǎn)物進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳，把鑒定陽(yáng)性的重組原核表達(dá)質(zhì)粒送生物公司進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

表1 PCR擴(kuò)增所用引物序列Table 1 The primers in this study

1.2.2.2 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)鑒定 將測(cè)序結(jié)果無(wú)誤的重組質(zhì)粒pET-rSRA-c轉(zhuǎn)染至感受態(tài)細(xì)胞BL21（DE3）中，對(duì)其誘導(dǎo)條件及溫度進(jìn)行優(yōu)化后，最終確定最佳條件：37℃振蕩培養(yǎng)至OD600為0.4～0.6時(shí)，加入終濃度為1 mmol/L的IPTG，常溫誘導(dǎo)過(guò)夜。誘導(dǎo)后離心收集菌體，用1×binding buffer懸浮于冰上超聲破碎處理，超聲后的菌體，4℃、12 000×g 離心25 min。收集上清，用5×SDS buffer沸水浴5～10 min制樣；沉淀用含有6 mol/L 尿素的Binding buffer充分溶解，4℃放置過(guò)夜并制樣（同上清）。分別取上清和沉淀樣品，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。

1.2.2.3 蛋白的純化及小鼠免疫 將誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白進(jìn)行純化，具體操作步驟按照His-tag親和層析純化說(shuō)明書進(jìn)行，純化的蛋白進(jìn)行透析后測(cè)定其蛋白濃度。蛋白乳化后按照每只小鼠100 μg的劑量進(jìn)行皮下多點(diǎn)免疫，每14 d 免疫1次，共免疫5次，第5次免疫后7 d 進(jìn)行采血，獲取多抗血清。

1.2.2.4 Western blot檢測(cè)重組蛋白的表達(dá) 重組蛋白SDS-PAGE電泳后，轉(zhuǎn)印于硝酸纖維素膜。室溫封閉2 h或4℃封閉過(guò)夜，TBST洗滌3次；加入的一抗分別為抗His標(biāo)簽鼠源單克隆抗體（稀釋度為1∶5000）以及制備的鼠多克隆抗體（稀釋度為1∶1000），4℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜3次；加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗鼠二抗，稀釋度為1∶10 000，室溫孵育2 h后，顯色。

1.2.3 真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建，轉(zhuǎn)染及鑒定

1.2.3.1 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建 將克隆的基因以及真核表達(dá)載體pcDNA3.0經(jīng)EcoR V和Xho I雙酶切，使用膠回收試劑盒回收，16℃連接過(guò)夜。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α中，加入800 LB液體培養(yǎng)基搖菌，40～60 min后將搖好的細(xì)菌涂在含有氨芐青霉素的LB固體培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)12～18 h。挑取單克隆菌落于含有一定量氨芐青霉素的LB中（100 μg/ mL）搖菌5～8 h，提取質(zhì)粒并對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定，將酶切產(chǎn)物進(jìn)行1%的瓊脂糖凝膠電泳，把陽(yáng)性重組表達(dá)質(zhì)粒送生物公司進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

1.2.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到70%～80%時(shí)，根據(jù)Lipofectamine 2000的說(shuō)明書，將真核載體pcDNA3.0和pcDNA-SRA/CD204wt瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24 h后進(jìn)行細(xì)胞樣品的制備，用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

1.2.3.3 Western blot 檢測(cè) 轉(zhuǎn)染24 h后，分別收取轉(zhuǎn)染了pcDNA-SRA/CD204wt及pcDNA3.0細(xì)胞樣品，制備蛋白樣品，置于-20℃保存，用于Western blot。

1.2.3.4 間接免疫熒光檢測(cè)（indirect immunofluorescence assay，IFA） 按照上述1.2.3.2的方法進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，24 h后，利用4%的多聚甲醛對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定，用于間接免疫熒光分析。

1.2.4 豬SRA/CD204介導(dǎo)的細(xì)菌吞噬功能分析 按照上述1.2.3.2的方法進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，獲得瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞樣品，分別為：CHO-vector和CHO-SRA/ CD204wt，將FITC標(biāo)記的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，分別以100∶1（細(xì)菌：細(xì)胞）接種轉(zhuǎn)染的細(xì)胞樣品，37℃孵育2 h，PBS洗滌2遍，加入臺(tái)盼藍(lán)（250 μg/mL）作用1min，然后進(jìn)行熒光強(qiáng)度分析，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3～5次，并進(jìn)行差異分析。

2 結(jié)果

2.1 全長(zhǎng)豬SRA/CD204編碼基因的克隆及測(cè)序分析利用豬肺組織，提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA作為模板，利用RT-PCR方法，擴(kuò)增全長(zhǎng)豬SRA/CD204編碼基因（1341 bp），電泳結(jié)果顯示，在約1300 bp處出現(xiàn)特異的條帶，與預(yù)期的結(jié)果一致（圖1A）。隨后，將純化回收的PCR產(chǎn)物，克隆至pMD18-T載體中構(gòu)建pMD18-T-SRAwt，經(jīng)PCR鑒定陽(yáng)性的克隆送上海桑尼生物公司進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果顯示與GenBank上登錄的序列（NM_001243874）一致。

2.2 豬SRA/CD204胞外區(qū)部分基因片段的克隆及其原核表達(dá)載體的構(gòu)建 以pMD18-T-SRAwt為模板，利用P CR擴(kuò)增胞外區(qū)部分基因片段（614～1324 bp），瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果顯示，在約700bp處出現(xiàn)特異的條帶，與預(yù)期的結(jié)果一致（圖1B）。將PCR產(chǎn)物經(jīng)Sac I和Xho I雙酶切后連接入原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-rSRA-c，對(duì)pET-rSRA-c進(jìn)行Sac I和Xho I雙酶切鑒定，可以切出約700 bp的目的條帶，表明融合蛋白基因構(gòu)建成功。對(duì)陽(yáng)性質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證，結(jié)果顯示編碼rSRA-c的基因片段正確地插入到pET-28a中。

圖1 豬SRA/CD204基因的PCR擴(kuò)增Fig.1 Amplifi cation of SRA/CD204 gene from pig by PCR

2.3 rSRA-c的表達(dá)、純化及多克隆抗體制備 重組質(zhì)粒pET-rSRA-c轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)果在約32 kDa處出現(xiàn)一明顯的蛋白質(zhì)條帶，大小與預(yù)期結(jié)果相符，而pET-28a/ BL21（DE3）沒(méi)有出現(xiàn)該條帶。將誘導(dǎo)菌超聲波裂解后的產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳，發(fā)現(xiàn)表達(dá)的目的蛋白大多存在于沉淀中，說(shuō)明該蛋白是以包涵體的形式存在。將表達(dá)的蛋白按照His·Bind 純化試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行純化后，取不同收集管中適量的洗脫產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE電泳，結(jié)果在約32 kDa處出現(xiàn)一條清晰的蛋白條帶，表明表達(dá)產(chǎn)物純化良好（圖2）。蛋白經(jīng)透析處理后，進(jìn)行小鼠免疫（100 μg/只），第5次免疫后7 d，進(jìn)行采血，獲得多抗血清。

圖2 純化蛋白rSRA-C的SDS-PAGE分析Fig.2 Analysis of the purifi ed fusion protein by SDS-PAGE

2.4 Western blot分析 對(duì)rSRA-c進(jìn)行Western blot分析，抗His標(biāo)簽的抗體和自制的多克隆抗體均可以識(shí)別約32 kDa的蛋白，并且大小吻合，說(shuō)明自制的多克隆抗體可以識(shí)別rSRA-c（圖3）。將豬SRA/ CD204全長(zhǎng)基因克隆至真核表達(dá)載體pcDNA3.0中，構(gòu)建重組表達(dá)載體pcDNA-SRAwt，并對(duì)陽(yáng)性質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。隨后，將pcDNA3.0 vector和pcDNA-SRA/CD204wt轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞系，24 h后，對(duì)收獲的樣品進(jìn)行Western blot分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染CHO-SRA/CD204wt的細(xì)胞樣品在約55 kDa處出現(xiàn)特異的反應(yīng)條帶，與預(yù)期的蛋白吻合，CHO-vector沒(méi)有出現(xiàn)條帶。可見(jiàn)，制備的多克隆抗體不僅可以識(shí)別rSRA-c，而且可以識(shí)別瞬時(shí)表達(dá)的全長(zhǎng)SRAwt，具有特異性。

2.5 間接免疫熒光分析 為了進(jìn)一步驗(yàn)證多抗血清的特異性，對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的CHO-vector和CHO-SRA/ CD204wt進(jìn)行免疫熒光分析。結(jié)果顯示該多抗血清可以區(qū)分CHO-vector和CHO-SRA/CD204wt，SRA在CHO細(xì)胞中，主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中（圖4），制備的多抗血清可以有效地識(shí)別豬SRA分子。

圖3 rSRA-c的Western blot分析Fig.3 Analysis of rSRA-c by Western blot

圖4 間接免疫熒光分析結(jié)果（×200）Fig.4 Analysis of SRA/CD204 expression by indirect immunofl uorescence asssay （IFA）

2.6 吞噬實(shí)驗(yàn) 為了驗(yàn)證豬SRA/CD204介導(dǎo)的吞噬功能，分別將pCDNA3.0-vector和pCDNA-SRA/ CD204wt轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，24 h后，進(jìn)行細(xì)菌吞噬分析。研究發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于CHO-vector，CHO-SRA/ CD204wt顯示出對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的吞噬作用（圖5）。

3 討論

清道夫受體SRA/CD204作為一類先天性免疫受體，參與調(diào)控脂蛋白的代謝，協(xié)同調(diào)控TLRs介導(dǎo)的炎性反應(yīng)、參與病原微生物的識(shí)別等，在疾病和生理情況下起著重要的作用。相對(duì)于人類醫(yī)學(xué)研究以及以小鼠為模型的研究，豬SRA/CD204的功能研究相對(duì)滯后。本研究利用基因工程的手段，制備了豬SRA/CD204的保外區(qū)的重組蛋白，并成功利用該重組蛋白制備了能特異識(shí)別豬SRA/CD204的多克隆抗體。通過(guò)真核表達(dá)技術(shù)，驗(yàn)證了豬SRA/CD204對(duì)病原菌的吞噬作用的發(fā)生。這些新的研究成果對(duì)于揭示豬SRA/CD204的功能，尤其是病原與宿主相互作用方面的功能，具有重要意義。

圖5 豬SRA/CD204介導(dǎo)的細(xì)菌吞噬分析Fig.5 Analysis of bacterial phagocytosis mediated by SRA/CD204 from pig

作為一種跨膜糖蛋白，可分為胞外區(qū)、跨膜區(qū)以及胞內(nèi)區(qū)，其中胞外區(qū)為主體部分，是進(jìn)行配體包括LDL［3］、LPS［8］、LTA［9］等識(shí)別的區(qū)域。SRA/ CD204的胞外區(qū)由半胱氨酸富含區(qū)（SRCR）、膠原蛋白樣區(qū)域（collagen-like）、卷曲螺旋區(qū)（coiled coil）以及間隔區(qū)組成。其中，半胱氨酸富含區(qū)和膠原蛋白樣區(qū)域是主要的功能區(qū)域。本研究選取編碼半胱氨酸富含區(qū)和膠原蛋白樣區(qū)域的基因片段，進(jìn)行原核表達(dá)，制備重組蛋白rSRA-c，通過(guò)免疫小鼠獲得多克隆抗體，Western blot和間接免疫熒光分析結(jié)果顯示，該多抗血清可以特異地識(shí)別rSRA-c以及真核表達(dá)的豬SRA/CD204。

有研究顯示，SRA/CD204可以介導(dǎo)大腸桿菌［10］、單增李斯特桿菌［11］、奈瑟氏腦膜炎球菌［12］、鏈球菌［13］、金黃色葡萄球菌［14］等識(shí)別。研究表明SRA是通過(guò)結(jié)合細(xì)菌表面的相關(guān)分子，進(jìn)行細(xì)菌的識(shí)別和吞噬，比如大腸桿菌的脂蛋白A（lipid A）［8］、鏈球菌或金黃色葡萄球菌等細(xì)菌的脂磷壁酸（LTA）［9］、奈瑟氏腦膜炎球菌表面蛋白NMB1220［12］等。我們的初步研究結(jié)果顯示豬SRA/CD204可介導(dǎo)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的識(shí)別和吞噬，與上述結(jié)果相符。盡管具體的機(jī)制以及詳細(xì)的細(xì)菌識(shí)別譜還需要進(jìn)一步研究，但是這一結(jié)果顯示了清道夫受體在不同物種的細(xì)胞中的功能保守性。

盡管豬SRA/CD204顯示了與人或小鼠SRA/ CD204的功能相似性，但是豬SRA/CD204功能的研究才剛剛開始，大量的問(wèn)題需要深入的探討，比如其在豬細(xì)胞或組織中的表達(dá)特點(diǎn)、調(diào)控機(jī)制等。本研究成功制備了針對(duì)豬SRA/CD204的多克隆抗體，為將來(lái)探討豬SRA/CD204在豬源細(xì)胞中的表達(dá)調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。對(duì)豬SRA/CD204與獸醫(yī)臨床相關(guān)病原菌作用的研究，將為揭示獸醫(yī)臨床相關(guān)細(xì)菌病的發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

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GENERATION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AGAINST PIG SCAVENGER RECEPTOR SRA/CD204 AND FUNCTIONAL ANALYSIS OF BACTERIAL PHAGOCYTOSIS MEDIATED BY PIG SRA/CD204

LI Qian-qian1，2， ZHANG Yan-bing1，2， XIANG Xiao2， WEI Jian-chao2， QI Peng-fei2， SHI Yuan-yuan2，LU Ying-mei2， XIA PENG2， LIU Ke2， SHAO Dong-hua2， LI Bei-bei2，MA Zhi-yong2， SUN Yan-ming1， QIU Ya-feng2
（1. College of Animal Science and Technology， Shihezi University， Shihezi 832003， China； 2. Shanghai Veterinary Research Institute， CAAS，Shanghai 200241， China）

To gain insights on biological functions of pig scavenger receptor SRA/CD204， we first sought to generate polyclonal antibodies against pig SRA/CD204. Firstly， a C-terminal gene fragment （614-1324bp） of pig SRA/CD204 gene was amplifi ed in PCR from pMD18-SRAwt and cloned into pET-28a to construct the recombinant plasmid pET-rSRA-c. The recombinant protein rSRA-c（about 32kDa） was mainly expressed as inclusion body and purified by His-Bind affinity chromatography. Furthermore， Balb/c mice were immunized with purifi ed rSRA-c for generation of polyclonal antibodies. The results showed that the polyclonal antibodies recognized rSRA-c and full-length pig SRA/CD204 expressed in CHO cell line （about 55 kDa） in Western blot. Furthermore， the polyclonal antibodies strongly reacted with pig SRA/CD204 in indirect immunofl uorescence assay， which mainly located in membranes and cytosolof CHO cells. Finally， we used the CHO cell line for over-expressing pig SRA/CD204 via transient transfection. The results showed that pig SRA/CD204 mediated phagocytosis of bacteria like E.coli and S. aureus.

Scavenger receptor； recombinant protein； polyclonal antibody； bacteria； phagocytosis

S852.61

A

1674-6422（2015）06-0042-06

2015-09-14

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（2014JB06）

黎倩倩，女，碩士研究生，獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)專業(yè)

孫延鳴，E-mail：sym@shzu.edu.cn；邱亞峰，E-mail：yafengq@shvri.ac.cn