劉海霞

(中國核工業(yè)北京四O一醫(yī)院, 北京 102413)

·臨床研究·

產(chǎn)黑色素類桿菌與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性

劉海霞

(中國核工業(yè)北京四O一醫(yī)院, 北京 102413)

目的: 探討產(chǎn)黑色素類桿菌(BPB)與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性。方法：采用PCR技術檢測30個慢性根尖周炎患牙感染根管內(nèi)5種BPB的定植情況，單因素分析5種BPB與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性。結果：牙齦卟啉單胞菌(Pg)、牙髓卟啉單胞菌(Pe)與慢性根尖周炎的疼痛、腫脹呈正相關(OR>2，P<0.05),與叩痛、竇道無相關性；變黑普氏菌(Pn)與慢性根尖周炎的叩痛、腫脹呈正相關(OR>2，P<0.05)，與疼痛、竇道無相關性；中間普氏菌(Pi)和產(chǎn)黑普氏菌(Pm)與慢性根尖周炎的疼痛、叩痛、竇道和腫脹均無相關性。結論：Pg、Pe與慢性根尖周炎的疼痛和腫脹密切相關，Pn與叩痛和腫脹密切相關。尚未發(fā)現(xiàn)Pi和Pm與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性。

產(chǎn)黑色素類桿菌; 慢性根尖周炎

[DOI] 10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.09.007

[Chinese Journal of Conservative Dentistry,2015,25(9):541]

慢性根尖周炎是根管內(nèi)以厭氧菌為主的混合感染。盡管100多年前就已證實感染根管內(nèi)存在細菌，但到目前為止，有關細菌引起根尖周炎臨床癥狀的發(fā)病機制仍存在分歧。Siqueira[1]、Foschi F[2-3]等認為感染根管內(nèi)細菌與根尖周炎的部分臨床癥狀如疼痛、叩痛、竇道及腫脹密切相關。亦有學者[4-5]認為, 細菌與慢性根尖周炎的臨床癥狀并無相關性。本課題組前期采用分子生物學技術(PCR)檢測了產(chǎn)黑色素類桿菌(BPB)在慢性根尖周炎的定植情況[6]，本研究在前期研究基礎上進一步分析5種BPB與慢性根尖周炎臨床癥狀之間的相關性。

1 臨床資料和方法

1.1 臨床資料

臨床隨機選擇慢性根尖周炎患者25例(30個牙)，其中男15例，女10例，年齡18～73歲(表1)。納入標準：①患牙為單根管；②無全身性疾病，近3個月未服用抗生素；③知情同意。

表1 慢性根尖周炎患牙臨床癥狀分布 (牙)

1.2 方法

1.2.1 標本采集

參照謝曉莉等[6]的方法，橡皮障隔濕，術區(qū)常規(guī)消毒，去除釉質或原有充填材料，再次消毒窩洞，揭髓頂。#15 K銼探查根管，測定工作長度。連續(xù)3根無菌紙尖插入根管內(nèi)(距工作長度短1 mm處)，停留30 s，吸取根管滲出液(若根管內(nèi)干燥，則注入無菌生理鹽水，充分擴銼根管壁)。將采集的所有紙尖放入盛有1 mL(pH 7.2)磷酸鹽緩沖液的無菌Eppendorf管中，-20 ℃低溫保存。

1.2.2 PCR擴增

引物合成、PCR擴增及產(chǎn)物分析見文獻[6]。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用比數(shù)比(odds ratio，OR)進行單因素分析,根據(jù)Socransky SS等[7]和Sundqvist G[8]的方法，當OR>2時,兩者間為正相關；當OR<0.5時，兩者間為負相關。根據(jù)OR 95%可信區(qū)間(confidence interval，CI)，在正相關關系時OR下限<1或在負相關關系時OR上限>1時，OR統(tǒng)計學分析無顯著性意義。

2 結果

2.1 電泳結果[6]

所有臨床標本通用引物的PCR檢測均出現(xiàn)1 500 bp的擴增帶，說明感染根管內(nèi)存在細菌，標本中可能存在的其他感染物質和根管內(nèi)的成分未對PCR產(chǎn)生明顯的影響。

細菌菌種特異性引物的PCR檢測出現(xiàn)了與預計大小一致的單一擴增帶，條帶清晰，未出現(xiàn)非特異擴增帶，說明特異性引物PCR的擴增條件適宜。

2.2 產(chǎn)黑色素類桿菌與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性

2.2.1Pg、Pe與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性

Pg、Pe在疼痛、腫脹組檢出率高于無癥狀組，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；相關性分析示，Pg、Pe與慢性根尖周炎的疼痛、腫脹呈正相關(OR>2);而叩痛和竇道組檢出率差異不明顯(P>0.05)，尚不能認為Pg、Pe與慢性根尖周炎的叩痛和竇道形成相關(表2～3)。

表2 Pg與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性(n, %)

*表示相關性顯著, 括號內(nèi)為檢出率

表3 Pe與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性(n, %)

* 表示相關性顯著, 括號內(nèi)為檢出率

2.2.2Pn與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性

Pn在疼痛、叩痛、竇道、腫脹組檢出率較無癥狀組高，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；相關性分析顯示，Pn與慢性根尖周炎的叩痛、腫脹呈正相關(OR>2)(表4)。

表4 Pn與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性(n, %)

* 表示相關性顯著, 括號內(nèi)為檢出率

2.2.3Pi、Pm與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性

Pi、Pm在疼痛、叩痛、竇道、腫脹組檢出率與無癥狀組無顯著差異(P>0.05)；相關性分析顯示，Pi、Pm與慢性根尖周炎的疼痛、叩痛、竇道及腫脹亦無相關性(表5～6)。

表5 Pi與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性(n, %)

括號內(nèi)為檢出率

表6 Pm與慢性根尖周炎臨床癥狀的相關性(n, %)

括號內(nèi)為檢出率

3 討論

疼痛、腫脹及竇道往往是慢性根尖周炎患者就醫(yī)的原因之一。鑒于感染根管內(nèi)環(huán)境的特殊性及菌種的復雜性，有關根尖周炎臨床癥狀的發(fā)病機制目前還不是十分清楚。細菌作為根尖周炎的主要致病因素，其自身的內(nèi)毒素、莢膜、外膜蛋白、蛋白水解酶等毒力因子及其代謝產(chǎn)物在根尖周炎臨床癥狀的發(fā)生機制中均發(fā)揮重要作用。致病菌的分離鑒定無疑為臨床癥狀的發(fā)生機制提供了理論依據(jù)。

本研究中的30個慢性根尖周炎患牙，17個伴有疼痛，Pg、Pe、Pn的檢出率相對較高。進一步分析產(chǎn)黑色素類桿菌和疼痛的相關性，發(fā)現(xiàn)Pg和Pe與根尖周炎的疼痛密切相關，但尚不能認為Pn、Pi、Pm的存在引起根尖周炎的疼痛。除Pn外其余4種產(chǎn)黑色素類桿菌均與叩痛無相關性，表明Pn與慢性根尖周炎的叩痛關系密切。結合實驗數(shù)據(jù)和臨床表現(xiàn)，進一步推測叩痛形成的機制主要是細菌的毒力因子及其代謝產(chǎn)物而引起根周膜充血、水腫、滲出物淤積，牙周間隙內(nèi)壓力升高，臨床上患牙表現(xiàn)為不適、發(fā)木、浮出腫脹感，叩診檢查增加根尖周組織的負擔而引起疼痛。

根尖周炎的患牙牙髓壞死，尖周局部組織化膿，牙槽骨破壞，膿液沿破壞的牙槽骨流至牙齦處，致牙齦破壞形成竇道。本研究中9個存在竇道的患牙，經(jīng)統(tǒng)計學分析顯示，與產(chǎn)黑色素類桿菌無明顯相關性(P>0.05)，尚不能認為產(chǎn)黑色素類桿菌就是竇道形成的原因。

腫脹是根尖周炎較為嚴重的一種臨床表現(xiàn)，近年，有關BPB和慢性根尖周炎腫脹的研究較多。本結果表明，Pg、Pe、Pn與腫脹呈正相關。這與Siqueira JF等[1]的研究結果一致，產(chǎn)黑色素類桿菌在根尖膿腫根管內(nèi)的檢出率達80%，其中Pe的檢出率為70%，同時發(fā)現(xiàn)在膿腫患牙根管內(nèi)Pg和Pe常在同一根管同時檢出。

目前有關致病菌和根尖周炎臨床癥狀相關性的研究存在分歧，Siqueira JF等[1,3]認為BPB與根尖周炎的臨床癥狀明顯相關，普氏菌屬與根尖周炎的疼痛、叩痛及腫脹關系密切。Griffee MB等[9]的研究也證實Bacteroidesmelaninogenicu(即新命名的Pm)與根尖周炎的疼痛明顯相關。曹慧敏等[10]對80例感染根管研究發(fā)現(xiàn)BPB的檢出率高達76%，進一步研究發(fā)現(xiàn)Pg、Pe的存在與竇道形成和根尖膿腫密切相關。而另一部分學者[3-4]持相反的觀點，認為細菌的檢出與根尖周炎的疼痛并無相關性，理論依據(jù)是同一種細菌在有癥狀和無癥狀根尖周炎根管內(nèi)都有定植。針對這兩種截然不同的觀點，我們推測以下幾個可能影響研究結果差異的因素。

①同一菌種不同菌株間的致病性本身存在差異，影響研究結果。如：Pg不同菌株間致病性毒力亦有不同。菌毛是Pg主要毒力因子，fimA是Pg菌毛主要亞基菌毛素的編碼基因，存在廣泛差異。歐陽玉玲等[11]研究不同基因型Pg與慢性牙周炎臨床癥狀的關系，發(fā)現(xiàn)ⅡfimA 和ⅣfimA型Pg致病能力較強，在牙周組織的破壞中發(fā)揮重要作用。

②根尖周炎是細菌的毒力因子和宿主防御系統(tǒng)相互對抗的結果[12]，一方面細菌的毒力因子引起尖周組織的感染，另一方面，細菌在感染部位的數(shù)量可能影響根尖周炎臨床癥狀的表現(xiàn)。當細菌達到一定的數(shù)量才可能干擾宿主的防御反應，出現(xiàn)臨床癥狀。而少量的侵入，可能被機體防御機能所清除。同時宿主的免疫防御對臨床癥狀的表現(xiàn)也有重要影響。同為根尖周炎在不同患者的臨床表現(xiàn)亦有很大差別。

③細菌間的相互作用也是影響臨床癥狀的一個重要因素。Gomes BP等[13]研究60例感染根管發(fā)現(xiàn)Pi、Pn和Porphyromonas均與牙髓感染引起的疼痛和腫脹有相關性，這種細菌間潛在的相互作用是導致典型臨床癥狀的主要原因。單獨培養(yǎng)細菌的毒性較弱，混合培養(yǎng)時，細菌相互提供營養(yǎng)物質，增強彼此的毒力。王變紅等[14]將Pe、Pg、Fn分別接種于SD大鼠第一磨牙髓腔內(nèi)，發(fā)現(xiàn)細菌混合感染的致病能力顯著強于單菌感染。

④人種和地區(qū)差異也是導致細菌檢出差異的原因之一。Siqueira JF等[15]對比研究巴西和韓國人感染根管內(nèi)7種牙髓感染致病菌，發(fā)現(xiàn)細菌檢出率存在明顯差異。巴西人群中Pe,Dp、Fa、Td、Tf的檢出明顯高于韓國人 。

綜上所述，BPB作為感染根管內(nèi)的優(yōu)勢菌群，在根尖周病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。其毒力因子，如內(nèi)毒素、酶、菌毛、莢膜、外膜蛋白及其代謝產(chǎn)物作用于牙髓及根尖周組織，引起患牙疼痛、叩痛、腫脹等臨床癥狀。

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Correlation betweenblack-pigmentedbacteroidesand clinical symptoms in chronic apical periodontitis

LIU Hai- xia

(Beijing401HospitaloftheNuclearIndustryofChina,Beijing102413,China)

AIM: To study the correlation betweenblack-pigmentedbacteroides(BPB) and clinical symptoms of chronic periodontitis. METHODS: The colonization of 5 kinds ofBPBin 30 infected root canals in patients with chronic apical periodontitis were detected by 16S rDNA PCR.The correlation betweenBPBand clinical symptom of chronic apical periodontitis was analyzed by monofactorial odds ratio, and their functions in chronic apical periodontitis were discussed. RESULTS: The relationship betweenP.g,P.eand pain, swelling in chronic apical periodontitis showed positive correlation (OR>2,P<0.05). But there was no correlation with pain of percussion and sinus. The relationship betweenP.nand pain of percussion, swelling in chronic apical periodontitis showed positive correlation (OR>2,P<0.05). But it had no correlation with pain and sinus. There was no correlation betweenP.i,P.mand pain, pain of percussion, sinus and swelling in chronic apical periodontitis(P>0.05). CONCLUSION:P.g,P.eandP.nplay an important role in pain and swelling in chronic periodontitis. There was no correlation betweenP.i,P.mand clinical symptom in chronic apical periodontitis.

black-pigmentedbacteroides; chronic apical periodontitis

2014-08-03;

2015-07-03

劉海霞(1982-)，女，漢族，甘肅人。碩士，主治醫(yī)師

劉海霞，E-mail:liuhx1202@126.com

R780.2

A

1005-2593(2015)09-0541-04