葛永斌，燕傲蕾，徐 娟，程孝中

（亳州師范高等?？茖W(xué)校，安徽 亳州236800）

藥用菊花為菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat）的干燥頭狀花序，是我國傳統(tǒng)中藥材，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。中華人民共和國藥典（一部）2010年版，收載貢菊、滁菊、亳菊和杭菊4 種，被稱為中國的四大藥用菊花[1]。菊花主要含有黃酮類、酚酸類、揮發(fā)油類、氨基酸和糖類等活性物質(zhì)[2]。因藥用菊花的品種不同和產(chǎn)地影響，其化學(xué)成分及含量也有差異。本文測定4 種藥用菊花中總黃酮、總酚、總糖含量，探討遺傳因素和生態(tài)因子對菊花藥效成分的影響，為4 種藥用菊花的質(zhì)量評價和遺傳多樣性研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

TU-1950 型紫外可見分光光度計； 安捷倫1200SL 高效液相色譜；ShimazuiQP2010s 氣質(zhì)聯(lián)用儀；R-205 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；SHZ-D （Ⅲ） 循環(huán)水式真空泵；DZF-200 型 真 空 干 燥 箱；Shim-pack VP-ODS色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）等。

1.2 材料與試劑

本試驗所用貢菊、滁菊、亳菊和杭白菊于2013年11月采集于黃山、滁州、亳州和浙江桐鄉(xiāng)。蘆丁、焦性沒食子酸、槲皮素、綠原酸、木犀草苷購自中國藥品生物制品鑒定所，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、金合歡素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、金合歡素、芹菜素對照品購自北京元寶山色譜科技有限公司。

1.3 樣品的測定

總黃酮、總糖和總酚含量的測定參照文獻(xiàn)3 進(jìn)行[9]，揮發(fā)油的測定參照文獻(xiàn)4 進(jìn)行[4]，黃酮類成分、綠原酸和3,5-O-雙咖啡酰基奎寧酸含量的測定方法參照文獻(xiàn)5 進(jìn)行[5]，游離糖和游離氨基酸含量的測定參照文獻(xiàn)6 進(jìn)行[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃酮類含量的測定

2.1.1 總黃酮含量測定結(jié)果

比色法測定4 大藥用菊花總黃酮含量結(jié)果見表1，其中4 種菊花總黃酮的含量依次為：貢菊＞滁菊＞亳菊＞杭白菊。

表1 4 種藥用總黃酮、總糖、揮發(fā)油總量和總酚測定結(jié)果（干重/%）

表2 7 種黃酮類成分、綠原酸和3,5-O-雙咖啡酰基奎寧酸測定結(jié)果（干重/%）

2.1.2 7 種黃酮類成分、綠原酸和3，5-O-雙咖啡酰基奎寧酸測定結(jié)果

測定結(jié)果見表2，4 種菊花的上述9 種成分含量各有高低。

2.2 糖類含量的測定

2.2.1 總糖含量的測定

以葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液作對照，葡萄糖最大吸收峰波長為490nm，在10-50μg/mL 濃度范圍內(nèi)總糖的含量與490nm 下的吸收值呈良好線性關(guān)系，測定結(jié)果見表1，總糖含量依次為：亳菊＞滁菊＞杭白菊＞貢菊。

2.2.2 游離糖含量的測定

本實驗檢測出果糖和葡萄糖，未檢出蔗糖和麥芽糖。各菊花樣品中游離糖類含量結(jié)果見表3。果糖的含量依次為：亳菊＞杭白菊＞滁菊＞貢菊；葡萄糖的含量依次為：亳菊＞滁菊＞杭白菊＞貢菊。

表3 4 大藥用菊花中游離糖含量（%）

2.3 揮發(fā)油的測定

2.3.1 揮發(fā)油總量的測定

測定結(jié)果見表1，4 種菊花揮發(fā)油總量的含量依次為：滁菊＞亳菊＞貢菊＞杭白菊； 4 種藥用菊花揮發(fā)油的顏色不同，貢菊為淺黃色、滁菊為黃色、亳菊淺藍(lán)色、杭白菊為淺綠色。

2.3.2 揮發(fā)油成分分析結(jié)果

對4 種菊花揮發(fā)油成分進(jìn)行GC-MS 分離，共鑒定出的化合物有67 種，其中杭菊有7 種、貢菊有19 種、亳菊有30 種、滁菊有43 種。

2.4 總酚含量的測定結(jié)果

以沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液作對照，沒食子酸最大吸收峰波長為760nm，在4-20μg/mL 濃度范圍內(nèi)總酚的含量與760nm 下的吸收值呈良好線性關(guān)系，測定結(jié)果見表1，總酚的含量依次為：亳菊＞滁菊＞杭白菊＞貢菊。

2.5 游離氨基酸含量測定結(jié)果

4 種菊花中共檢測出20 種氨基酸，其中滁菊和亳菊檢測出18 種，貢菊和杭白菊檢測出19 種（見表4）。各種游離氨基酸中天門冬酰胺、谷氨酰胺，丙氨酸、精氨酸以及脯氨酸在菊花中的含量比較高，但對各種藥菊來說也存有差異。

表4 4 種藥用菊花中游離氨基酸的含量（%）

3 討 論

3.1 4 種菊花活性成分差異與生態(tài)因子

黃山市地處東經(jīng)117°02′-118°55′和北緯29°24′-30°24’之間，屬亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候區(qū)，年平均氣溫15.5-16.4゜C，降水量在1395-1702 毫米之間。中低山地大部分為黃壤，山地為黃棕壤，丘陵地帶多為紅壤和紫色土，質(zhì)地粘重，酸性。滁州地處長江下游北岸，位于北緯31°51′-33°13′、東經(jīng)117°09′-119°13′之間，地貌大致可分為丘陵區(qū)、崗地區(qū)和平原區(qū)三大類型，海拔399.2 米，氣候為北亞熱帶濕潤季風(fēng)氣候，全年平均氣溫15.4℃，年平均降水量1035.5 毫米，年日照總時數(shù)2073.4 小時，年無霜期210 天，土壤多為黃褐土。亳州位于東經(jīng)115°53′-116°49′、北緯32°51′-35°05′,海拔22-42.5 米,地形為崗、坡、碟形洼地相間分布的平原地貌特征，氣候?qū)儆谂瘻貛О霛駶櫄夂?，年平均氣?4.9℃，平均日照2184 小時，年均降水量831 毫米,平均無霜期213 天,土壤為潮土與砂姜黑土。浙江桐鄉(xiāng)市地處北緯30°28′-30°47′、東經(jīng)120°17′-120°39′,平均海拔5.3 米，氣候?qū)俚湫偷膩啛釒Ъ撅L(fēng)氣候，年平均氣溫16.5℃,年無霜期243.6 天,土壤為江、海、湖沼沉積物。

生物的存在和繁殖依賴于各種生態(tài)因子的綜合作用，每種植物對溫度、光照、水分等均有一個耐受范圍，因此每個生態(tài)因子的改變都可能影響植物的分布，但是在一定空間分布區(qū)域內(nèi)，不同的生態(tài)因子產(chǎn)生的效應(yīng)也是有差異的，在不同方向分布邊緣影響生長和發(fā)育生態(tài)因子是多種多樣的，最終決定物種分布或產(chǎn)量，說明產(chǎn)地的環(huán)境因素對藥用菊花的成分具有較大影響，對植物的次生代謝影響顯著，從而影響藥材的質(zhì)量[7]。相關(guān)的研究結(jié)果[3，4，8，9]顯示，不同種、不同種源的藥用菊花總黃酮、總糖、揮發(fā)油總量和總?cè)坪看嬖谳^明顯差異。本研究結(jié)果表明，4 大藥用菊花成分存在一定的差異,進(jìn)一步證明貢菊、滁菊、亳菊和杭菊的生境不同對其化學(xué)成分及含量有較大的影響。

3.2 4 種菊花活性成分差異與遺傳異質(zhì)

王桃銀等[10]對貢菊、滁菊、毫菊、杭白菊核型研究發(fā)現(xiàn)4 種藥用菊花都是六倍體，但形態(tài)各異，在相對長度、核型不對稱系數(shù)和著絲粒位置方面都存在差異。貢菊2n=54=(36-42)m(0-2SAT)+(10-14)sm+(2-4)st；滁菊2n=54=42m(8SAT)+12sm；亳菊2n=54=(38-42)m(0-2SAT)+8-10)sm(0-2SAT)+(2-4)st；杭菊2n=52-54=(30-44)m(0-4SAT)+(10-16)sm(0-4SAT)+(1-6)st。貢菊的染色體數(shù)目為32-39 和49-54，滁菊的染色體數(shù)目為50-55，亳菊的染色體數(shù)目為49-55，杭菊的染色體數(shù)目為43-55。經(jīng)過自然和人工選擇，貢菊、滁菊、毫菊和杭菊形成了固定的產(chǎn)地，表現(xiàn)出不同的藥用特性，4 種藥菊遺傳異質(zhì)是影響藥菊品質(zhì)的遺傳因素。

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