王秀華 竇靈芝 王小清 (中南大學(xué)護(hù)理學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 4003)

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)某些脂肪細(xì)胞因子除了參與糖脂代謝的調(diào)節(jié)，而且在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)中具有重要的作用〔1〕，其與動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的關(guān)系也初步為人們所認(rèn)識(shí)。網(wǎng)膜素(Omentin)是一種新發(fā)現(xiàn)的由網(wǎng)膜組織表達(dá)并分泌的脂肪細(xì)胞因子，能夠提高胰島素介導(dǎo)的葡萄糖攝取及激活絲氨酸-蘇氨酸激酶/蛋白激酶B(Akt/PKB)，從而提高脂肪細(xì)胞的胰島素敏感性，具有調(diào)節(jié)脂肪代謝等重要作用，參與肥胖、2型糖尿病及AS的發(fā)生發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)〔2〕Omentin有兩種形式，即Omentin-1和 Omentin-2，外周血中主要以 Omentin-1的形式存在。Yamawaki等〔3〕研究發(fā)現(xiàn)Omentin通過(guò)激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)而介導(dǎo)內(nèi)皮一氧化氮(NO)合成酶的磷酰化，進(jìn)而促進(jìn)NO的生成，生成的NO通過(guò)抑制c-Jun氨基末端激酶(JNK)的活化，來(lái)抑制腫瘤壞死因子(TNF)-α介導(dǎo)的的環(huán)氧合酶(COX)-2的表達(dá)水平，從而發(fā)揮其抗炎作用，該項(xiàng)研究，使得Omentin的抗炎作用機(jī)制得到了首次證實(shí)。Kazama等〔4〕通過(guò)對(duì)血管平滑肌細(xì)胞(SMCs)炎癥反應(yīng)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Omentin是一種新的抗炎細(xì)胞因子，而且其抗炎作用至少部分是由抗氧化作用所引起的。此外，Omentin-1也被看作機(jī)體在代謝失衡狀態(tài)下的一種保護(hù)性細(xì)胞因子〔5〕。有研究發(fā)現(xiàn)冠心病患者血漿Omentin水平是下降的，由此推測(cè)Omentin-1也可能參與冠狀動(dòng)脈AS的發(fā)生，但Omentin是否參與了冠心病心衰患者的發(fā)展過(guò)程，相關(guān)研究甚少，而且Omentin的特異性受體是否可成為肥胖所導(dǎo)致的心血管疾病的新的藥物治療靶點(diǎn)還需進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí)。本研究探討血漿Omentin-1水平在冠心病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象 選擇自2012年7月至2012年12月在中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院通過(guò)冠狀動(dòng)脈造影或冠狀動(dòng)脈CT血管造影(CTA)明確診斷為冠心病的老年患者59例，男36例，女23例，同期健康體檢者31例作為正常對(duì)照組，男20例，女11例，冠心病組及正常對(duì)照組年齡均≥60歲。根據(jù)臨床癥狀將冠心病組分為穩(wěn)定型心絞痛(SAP)組和不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)組;根據(jù)冠心病患者NYHA分級(jí)法分為三組，即心功能I級(jí)組有11例，心功能Ⅱ、Ⅲ級(jí)組36例，心功能Ⅳ級(jí)組12例。所有研究對(duì)象都簽署知情同意書(shū)。排除嚴(yán)重肝、腎功能不全;嚴(yán)重全身疾病(如呼吸系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等);惡性腫瘤;各種急、慢性感染性疾病;自身免疫性疾病或結(jié)締組織病患者;最近3個(gè)月有重大創(chuàng)傷、外科手術(shù)者。

1.2 儀器設(shè)備和試劑 80-2臺(tái)式離心機(jī)，由上海手術(shù)機(jī)械廠生產(chǎn);ELX800全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀，由Bio-EK Instrument Inc生產(chǎn);Omentin酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒及內(nèi)脂素ELISA試劑盒均由長(zhǎng)沙維爾生物科技公司提供。

1.3 研究方法

1.3.1 各項(xiàng)臨床指標(biāo)檢測(cè) 所有患者及正常對(duì)照組均空腹10 h以上，于入院次日清晨測(cè)量身高、體重、血壓，并于空腹抽取肘靜脈血測(cè)定血常規(guī)、肝腎功能、血脂、C反應(yīng)蛋白等指標(biāo)(由檢驗(yàn)科專人質(zhì)控檢驗(yàn))。同時(shí)采集肘靜脈血3 ml放入EDTA抗凝管，搖勻，2 000 r/min，離心20 min后，分離上清液即血漿并凍存于－80℃，用于集中測(cè)定血漿Omentin-1。

1.3.2 血漿Omentin-1的測(cè)定 采用ELISA測(cè)定血漿Omentin-1的濃度。ELISA試劑盒由長(zhǎng)沙維爾生物科技公司代理提供。檢測(cè)范圍為50 ng/L～1 000 ng/L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件行χ2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)，單因素方差分析(ANOVA);相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析方法，多因素分析采用多元線性逐步回歸分析。應(yīng)用二元Logistic回歸分析評(píng)價(jià)各變量與冠心病的獨(dú)立相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 冠心病組與正常對(duì)照組一般指標(biāo)比較 與正常對(duì)照組相比，冠心病組體重指數(shù)(BMI)、血清總膽固醇(TC)水平、血清甘油三酯(TG)水平、血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平均顯著升高，血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平顯著下降(P均＜0.05)，其他指標(biāo)如年齡、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷革轉(zhuǎn)氨酶(AST)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)，兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 冠心病組與正常對(duì)照組一肌臨床資料比較(s)

表1 冠心病組與正常對(duì)照組一肌臨床資料比較(s)

臨床資料 正常對(duì)照組(n=31)冠心病組(n=59)P值20/11 36/23年齡(歲)75.85±8.99 73.90±8.39 0.321 BMI(kg/m2)22.32±2.61 24.05±2.92 0.007 SBP(mmHg)132.84±12.55 134.83±14.31 0.515 DBP(mmHg)75.81±7.92 74.81±10.31 0.641 TC(mmol/L)4.20±0.57 4.72±0.86 0.004 TG(mmol/L)1.20±0.48 1.55±0.62 0.006 LDL-C(mmol/L)2.72±0.78 2.85±1.03 0.542 HDL-C(mmol/L)1.20±0.22 1.03±0.23 0.001 ALT(U/L)15.82±6.19 20.74±14.96 0.080 AST(U/L)20.92±4.94 22.76±8.81 0.283 BUN(mmol/L)6.10±1.99 6.16±2.24 0.899 Cr(mmol/L)79.33±30.40 87.58±23.69 0.159 CRP(mg/L)男/女(n)3.66±1.02 7.51±2.30 0.003

2.2 不同組別血漿Omentin-1水平比較 冠心病組血漿Omentin-1水平顯著低于正常對(duì)照組〔分別為(717.63±229.11)ng/L、(1 115.49±361.41)ng/L，P=0.000〕。SAP 組、UAP組血漿 Omentin-1水平〔(780.32±273.19)ng/L、(652.81±152.94)ng/L〕與正常對(duì)照組比較均顯著下降(P=0.003，P=0.000);UAP組血漿Omentin-1水平與SAP組比較有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。心功能Ⅰ級(jí)組血漿Omentin-1水平較心功能Ⅱ、Ⅲ級(jí)組顯著升高〔分別為(1 033.87±277.84)ng/L、(676.58±137.25)ng/L，P=0.000〕;心功能Ⅰ級(jí)組血漿Omentin-1水平較心功能Ⅳ級(jí)組顯著升高〔(540.35±59.49)ng/L，P=0.015〕;心功能Ⅱ、Ⅲ級(jí)組血漿 Omentin-1水平較心功能Ⅳ級(jí)組顯著升高(P=0.000)。

2.3 血漿Omentin-1水平與性別、年齡、BMI、血壓、血脂、CRP、肝腎功能的關(guān)系 對(duì)冠心病組患者，通過(guò)Pearson相關(guān)性分析(單因素相關(guān)性分析)發(fā)現(xiàn)血漿Omentin-1水平與SBP呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.26，P＜0.05)，與 HDL-C呈顯著正相關(guān)(r=0.271，P＜0.05)，與性別、年齡、BMI、DBP、TC、TG、LDL-C、CRP之間沒(méi)有相關(guān)性，r及 P 值分別為－0.005，0.967;－0.07，0.599;0.049，0.712;－ 0.026，0.847;0.078，0.555;0.068，0.610;－0.007，0.955;0.007，0.958。

2.4 血漿Omentin-1、內(nèi)脂素影響因素的多元線性逐步回歸分析 分別以 Omentin-1應(yīng)變量，以年齡、性別、BMI、SBP、DBP、TC、TG、LDL-C、HDL-C、CRP、ALT、AST、BUN、Cr為自變量進(jìn)行多元線性逐步回歸分析，按 α=0.05水準(zhǔn)，結(jié)果示血漿Omentin-1水平可能受HDL-C(P=0.006)水平的影響，回歸方程為 ^Y=240.100+563.067×HDL-C。

3 討論

除傳統(tǒng)的危險(xiǎn)因素外，炎癥反應(yīng)，血栓形成及其相關(guān)生物標(biāo)記物(如CRP，纖維蛋白原，可溶性細(xì)胞黏附因子，白細(xì)胞介素，脂蛋白，同型半胱氨酸等)均參與了冠心病的發(fā)生發(fā)展。

Omentin是一種新的抗炎細(xì)胞因子，而且抗氧化作用可能是其起抗炎作用的部分機(jī)制〔3，4〕。研究發(fā)現(xiàn)Omentin mRNA主要在人心外膜和網(wǎng)膜脂肪組織中表達(dá)，在皮下和內(nèi)乳動(dòng)脈外膜脂肪組織中的表達(dá)水平較低，心外膜脂和腸系膜脂肪組織與網(wǎng)膜脂肪組織有著共同的胚胎起源〔6〕。既往研究發(fā)現(xiàn)冠心病組血漿 Omentin 水平較正常對(duì)照組顯著下降〔7～10〕。也有研究〔7，9〕表明血漿Omentin水平下降為冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。近來(lái)研究〔9〕還發(fā)現(xiàn)急性冠脈綜合征(ACS)亞組血清Omentin-1水平較SAP亞組顯著下降。但也有研究〔7〕發(fā)現(xiàn)ACS組血漿Omentin水平較SAP組有下降趨勢(shì)，而差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究結(jié)果進(jìn)一步提示Omentin可能是一種保護(hù)性因素。

Omentin可能通過(guò)增加Akt的磷酸化來(lái)增強(qiáng)胰島素的敏感性〔11〕，低水平的 Omentin 與胰島素抵抗(IR)的增加有關(guān)〔2〕，而IR所致的高胰島素血癥不僅能夠促進(jìn)肝臟合成TC，又使脂蛋白酶活性降低導(dǎo)致TG分解障礙，TG水平升高使阻礙了極低密度脂蛋白(vLDL)轉(zhuǎn)變?yōu)镠DL，使vLDL水平上升，HDL-C降低。近來(lái)研究〔2，12〕發(fā)現(xiàn)血漿 Omentin-1與HDL-C水平呈正相關(guān)，且研究〔12〕證實(shí)HDL-C是血清網(wǎng)膜素的獨(dú)立相關(guān)因素。本研究也表明血漿Omentin-1水平與血清HDL-C水平呈顯著正相關(guān)，這和上述研究結(jié)果相似，推測(cè)Omentin可能通過(guò)調(diào)節(jié)Akt的磷酸化參與了脂質(zhì)代謝、動(dòng)脈硬化的發(fā)展過(guò)程，進(jìn)一步證實(shí)Omentin-1可能是冠心病的“保護(hù)因子”。但它的降低能否作為評(píng)價(jià)冠心病的危險(xiǎn)因素指標(biāo)，尚需大量臨床研究進(jìn)一步證實(shí)。

此外，Duan等〔13〕研究首次發(fā)現(xiàn)，在體外Omentin通過(guò)激活磷脂酰肌醇-3激酶/絲氨酸-蘇氨酸激酶(PI3K/Akt)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)抑制血管平滑肌細(xì)胞鈣化過(guò)程中成骨細(xì)胞的分化，表明低水平的Omentin是動(dòng)脈鈣化的危險(xiǎn)因素，因此Omentin可能具有抗動(dòng)脈鈣化的作用。Xie等〔14〕研究發(fā)現(xiàn)，在體內(nèi)Omentin通過(guò)調(diào)節(jié)核因子-κB受體活化因子(RANK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)改善動(dòng)脈鈣化和骨丟失。動(dòng)脈鈣化通常是在動(dòng)脈硬化的基礎(chǔ)上發(fā)生的，主動(dòng)脈硬化是由多種原因如彈力纖維的退變、AS等導(dǎo)致的主動(dòng)脈彈性減退，合并有動(dòng)脈鈣化的血管，其硬化程度相對(duì)更嚴(yán)重。隨著年齡的增加，大動(dòng)脈彈性逐漸下降，從而出現(xiàn)SBP升高，DBP下降，脈壓增大，若合并小動(dòng)脈硬化，則SBP、DBP均升高。本研究發(fā)現(xiàn)，血漿Omentin-1水平與SBP呈顯著負(fù)相關(guān)，即SBP越高，血漿Omentin-1水平越低，其動(dòng)脈硬化程度越重，而促進(jìn)心肌缺血、心衰等心血管事件的發(fā)生。Shibata等〔15〕在對(duì)一組男性冠心病患者的研究支持本研究結(jié)果。但目前，對(duì)冠狀動(dòng)脈鈣化認(rèn)識(shí)的觀點(diǎn)尚不統(tǒng)一。有研究認(rèn)為冠狀動(dòng)脈鈣化屬“不良”現(xiàn)象，是因?yàn)殁}化斑塊的數(shù)量大約反映了在冠狀動(dòng)脈分支中AS區(qū)域的總和，然而，決定冠狀動(dòng)脈預(yù)后的因素不僅僅是動(dòng)脈粥樣硬化數(shù)量，而且也與每一斑塊易于破裂的可能性等有關(guān)。從某種意義上來(lái)說(shuō)，鈣化可能意味著一種保護(hù)作用。因此，Omentin在AS發(fā)展過(guò)程中是否具有“有益”作用，尚需進(jìn)一步研究來(lái)證實(shí)。但由于關(guān)于Omentin-1與血壓的關(guān)系研究甚少，具體機(jī)制還不清楚，有待進(jìn)一步研究。

研究〔16～18〕發(fā)現(xiàn)高水平的 TNF-α 參與了充血性心力衰竭(CHF)的發(fā)病機(jī)制。Eisw等〔16〕研究發(fā)現(xiàn)CHF患者血清TNF-α水平顯著高于對(duì)照組，且NYHA分級(jí)中Ⅳ級(jí)TNF-α水平顯著高于Ⅱ級(jí)或Ⅲ級(jí)的水平。Lee等〔19〕發(fā)現(xiàn)在人類氣管平滑肌細(xì)胞(HTSMCs)上，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通道、TNF-kB、p300的激活對(duì)在TNF-α誘導(dǎo)血管細(xì)胞間黏附分子(VCAM)-1的表達(dá)中必不可少。Savic-Radojevic等〔18〕研究發(fā)現(xiàn)CHF患者的TNF-α、細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1、VCAM-1水平較對(duì)照組均升高，且在NYHA心功能分級(jí)的IV級(jí)中升高更顯著。近來(lái)研究〔20，21〕發(fā)現(xiàn)Omentin可通過(guò)抑制 TNF-α 誘導(dǎo)的超氧化物或血管炎癥來(lái)發(fā)揮抗炎作用。Zhong等〔22〕研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Omentin可能通過(guò)阻斷細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶/細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB(ERK/NF-κB)通道來(lái)抑制 TNF-α 介導(dǎo)的 ICAM-1、VCAM-1 的表達(dá)。本研究結(jié)果表明隨著NYHA分級(jí)的升高，血漿Omentin-1水平逐漸降低，提示Omentin-1水平的降低可能與心衰患者的加重有關(guān)。從上述研究的結(jié)果我們推測(cè)Omentin-1可能通過(guò)阻斷ERK/NF-κB通路抑制TNF-α的產(chǎn)生及其介導(dǎo)的VCAM-1等炎癥因子的產(chǎn)生，而對(duì)冠心病心衰患者起到保護(hù)作用。既往研究發(fā)現(xiàn)VCAM-1對(duì)CHF患者的危險(xiǎn)分層和篩選中起著重要作用，并可以用來(lái)識(shí)別與心衰相關(guān)的危險(xiǎn)事件，推測(cè)Omentin-1或許也可作為心功能分級(jí)及心衰篩選的新的客觀指標(biāo)因子，這將為心衰的治療可能提供了新的方向。

本研究為一個(gè)橫斷面研究，僅能夠表明血漿Omentin-1與冠心病有關(guān)系，不能夠表明血漿Omentin-1水平的下降是原發(fā)性的還是繼發(fā)性的;對(duì)冠心病的臨床分型及分級(jí)的界限沒(méi)有客觀指標(biāo)，以患者的主觀癥狀為主;樣本量偏小，進(jìn)一步研究尚需擴(kuò)大樣本量。

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