王春艷，樊桂玲，易建平

血清和卵泡液中NGF水平與PCOS的相關(guān)性研究

王春艷1，樊桂玲2，易建平2

目的檢測(cè)多囊卵巢綜合征（PCOS）患者血清與卵泡液中神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）水平，探討NGF水平與PCOS發(fā)生的相關(guān)性以及對(duì)PCOS患者助孕結(jié)局的影響。方法收集2011年12月—2012年11月在唐山市婦幼保健院生殖遺傳科行體外受精-胚胎移植（IVF-ET）的PCOS患者65例及同期因輸卵管因素行IVF-ET的非PCOS患者31例作為對(duì)照組。采用ELISA檢測(cè)96例患者絨毛膜促性腺激素（HCG）注射日血清和取卵日卵泡液中NGF的水平。比較PCOS組與正常對(duì)照組妊娠與未妊娠患者血清與卵泡液中NGF的水平。結(jié)果PCOS患者血清［（14.38± 0.42）ng/L］及卵泡液［（9.61±0.49）ng/L］中的NGF水平明顯高于正常對(duì)照組［（11.39±0.38）ng/L、（7.55±0.40）ng/L］；PCOS患者妊娠組血清［（14.22±0.35）ng/L］和卵泡液［（9.30±0.31）ng/L］中的NGF水平低于未妊娠組［（14.51±0.43）ng/L、（9.86±0.46）ng/L］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。結(jié)論P(yáng)COS患者血清和卵泡液內(nèi)存在NGF水平高表達(dá)，血清和卵泡液內(nèi)過(guò)高的NGF水平可能不利于PCOS患者成功妊娠。

多囊卵巢綜合征；神經(jīng)生長(zhǎng)因子；血清；卵泡液

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是生育期女性常見(jiàn)的內(nèi)分泌紊亂性疾病，是引起育齡婦女不孕的重要原因之一。盡管有關(guān)PCOS的病因及發(fā)病機(jī)制的研究已經(jīng)經(jīng)歷了60多年，但是目前其具體發(fā)病原因臨床仍無(wú)定論。自從在卵泡液中檢測(cè)到神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth fac?tor，NGF）受體后，各國(guó)學(xué)者開(kāi)始研究NGF對(duì)卵泡發(fā)育和生長(zhǎng)的影響，有關(guān)NGF對(duì)卵巢功能影響的研究報(bào)告主要來(lái)自動(dòng)物，人類(lèi)研究較少。本研究通過(guò)檢測(cè)體外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期PCOS患者血清與卵泡液中NGF水平，從細(xì)胞因子水平探討NGF與PCOS發(fā)生的相關(guān)性以及NGF對(duì)PCOS患者助孕結(jié)局的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2011年12月—2012年11月在唐山市婦幼保健院生殖遺傳科就診、行IVF-ET的不孕患者96例，其中符合鹿特丹標(biāo)準(zhǔn)［1］的PCOS患者65例。另選取同期因輸卵管因素行IVF-ET治療的非PCOS患者31例作為對(duì)照組?；颊吣挲g23～38歲，平均（29.74±3.17）歲。治療前所有患者夫婦雙方均簽署促排卵藥物治療及方案知情同意書(shū)。

1.2 主要儀器及設(shè)備人神經(jīng)生長(zhǎng)因子試劑盒（上海永葉），化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（瑞士ROCHE公司），高精度加液器（美國(guó)FALCON公司），恒溫培養(yǎng)箱（GNP-9080），超低溫冰箱（SANYO），γ計(jì)數(shù)器（美國(guó)R&D），自動(dòng)洗板機(jī)（北京原子能），低速離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份），陰道超聲（ALOKA-3500），CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)FORMA）。

1.3 方法

1.3.1 方案介紹所有患者均采用長(zhǎng)方案，即口服去氧孕烯炔雌醇（媽富?。┑?0天開(kāi)始降調(diào)節(jié)，促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑（GnRH-a，曲普瑞林，廣東麗珠制藥有限公司）0.05～0.1 mg/d，皮下注射，直至注射HCG日。于降調(diào)節(jié)第20天時(shí)檢測(cè)血促卵泡生成素（FSH）＜5 IU/L，促黃體生成素（LH）＜5 IU/L，雌二醇（E2）≤50 ng/L及陰道超聲檢查子宮內(nèi)膜厚度≤5 mm，最大卵泡徑線＜10 mm時(shí)認(rèn)為垂體完全達(dá)到降調(diào)節(jié)，加用促性腺激素（Gn）-福特蒙（瑞士伊伯薩制藥有限公司），起始劑量為150～300 IU/d，根據(jù)E2水平和陰道超聲監(jiān)測(cè)卵泡大小調(diào)整Gn的使用劑量。

1.3.2 標(biāo)本采集（1）血清：每例患者經(jīng)超促排卵后于注射HCG日晨空腹采肘正中靜脈血3 mL，立即送實(shí)驗(yàn)室3 000 r/ min離心10 min，分離上層血清，將血清置-80℃保存待測(cè)。（2）卵泡液：在陰道超聲監(jiān)測(cè)下取卵，僅留取卵泡平均直徑在15 mm以上，清亮且無(wú)血染的卵泡液10 mL，離心，3 000 r/ min離心10 min，分離上清液，將分離出的上清液置-80℃冰箱中保存待測(cè)。

1.3.3 NGF水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)IVF-ET周期中96例患者HCG日血清及取卵日卵泡液內(nèi)NGF水平。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，2組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCOS組與對(duì)照組血清及卵泡液NGF水平的比較PCOS患者血清及卵泡液內(nèi)NGF水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表1。

Tab.1 Comparison of NGF in serum and follicular fluid between PCOS group and control group表1 PCOS組與對(duì)照組血清及卵泡液內(nèi)NGF水平的比較（ng/L，）

Tab.1 Comparison of NGF in serum and follicular fluid between PCOS group and control group表1 PCOS組與對(duì)照組血清及卵泡液內(nèi)NGF水平的比較（ng/L，）

＊＊P＜0.01

組別PCOS組對(duì)照組t n 65 31血清NGF水平14.38±0.42 11.39±0.38 33.819＊＊卵泡液NGF水平9.61±0.49 7.55±0.40 20.597＊＊

2.2 PCOS患者妊娠組與未妊娠組血清及卵泡液中NGF水平比較PCOS患者妊娠組HCG日血清及取卵日卵泡液中NGF水平顯著低于未妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

Tab.2 Comparison of NGF level in PCOS patients between pregnancy and none-pregnancy groups表2 PCOS患者妊娠組與未妊娠組NGF水平的比較（ng/L，）

Tab.2 Comparison of NGF level in PCOS patients between pregnancy and none-pregnancy groups表2 PCOS患者妊娠組與未妊娠組NGF水平的比較（ng/L，）

＊＊P＜0.01

組別妊娠組未妊娠組t n 29 36血清NGF水平14.22±0.35 14.51±0.43 2.990＊＊卵泡液NGF水平9.30±0.31 9.86±0.46 5.888＊＊

3 討論

PCOS是一種以多毛、肥胖、卵巢多囊樣改變及無(wú)排卵為特征的內(nèi)分泌紊亂及多系統(tǒng)代謝異常性疾病，普遍存在高雄激素血癥和胰島素抵抗，在生育年齡婦女中發(fā)病率約為5%～10%［2］，是引起育齡女性不孕的主要原因。目前PCOS發(fā)生的確切病因仍不完全清楚，因此對(duì)于PCOS病因的研究一直是生殖內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。

3.1 NGF與卵泡發(fā)育的關(guān)系有研究認(rèn)為，卵泡的發(fā)育過(guò)程復(fù)雜，由許多不同來(lái)源的細(xì)胞因子和內(nèi)分泌激素在不同時(shí)間和不同空間上共同完成［3］。NGF是一種由神經(jīng)元支配的、靶組織分泌的小分子多肽，由118個(gè)氨基酸殘基組成，屬于神經(jīng)生長(zhǎng)因子家族。NGF在人類(lèi)發(fā)育卵泡、成熟卵泡顆粒細(xì)胞中均有表達(dá)，而其高親和力受體（Trk-A）主要在成熟卵泡表達(dá)。NGF除了對(duì)卵巢所支配神經(jīng)的支持營(yíng)養(yǎng)作用外，對(duì)早期卵泡發(fā)育和排卵起著直接的調(diào)節(jié)作用［4］。魏春霞［5］研究表明NGF具有促使人原始卵泡轉(zhuǎn)化為初級(jí)卵泡以及促進(jìn)其進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)育的作用，是一種調(diào)節(jié)原始卵泡向初級(jí)卵泡轉(zhuǎn)化和早期卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的促進(jìn)因子。

3.2 NGF與PCOS患者卵泡發(fā)育的關(guān)系始基卵泡啟動(dòng)生長(zhǎng)的過(guò)程復(fù)雜而精細(xì)，主要受到旁分泌、自分泌及內(nèi)分泌機(jī)制的調(diào)控。Dissen等［6］研究表明PCOS大鼠卵巢中過(guò)量的NGF降低卵巢排卵能力，并且導(dǎo)致早期竇卵泡的發(fā)育，最顯著的卵巢形態(tài)特征是缺乏排卵前大的卵泡，該研究還顯示NGF通過(guò)Trk-A，激活酪氨酸激酶信號(hào)系統(tǒng)，促進(jìn)排卵過(guò)程，然而過(guò)量的NGF則會(huì)引起內(nèi)分泌和非內(nèi)分泌組織的病理變化。另有PCOS大鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，卵巢內(nèi)NGF及其低親和力受體合成增加，大鼠失去動(dòng)情周期，卵巢內(nèi)給予對(duì)抗NGF及其受體的抗血清后，大鼠能夠恢復(fù)動(dòng)情周期及排卵［7］。陳炳錦等［8］通過(guò)研究PCOS患者的成熟與未成熟卵泡的顆粒細(xì)胞NGF及其受體的表達(dá)，認(rèn)為PCOS可能存在NGF高表達(dá)基礎(chǔ)，NGF可能與卵泡成熟有關(guān)。

3.3 NGF與PCOS患者妊娠結(jié)局的關(guān)系隨著促性腺激素的廣泛應(yīng)用和IVF-ET技術(shù)的發(fā)展，PCOS患者經(jīng)常聯(lián)合應(yīng)用促排卵［9］治療，但在控制性促排卵中常會(huì)出現(xiàn)高獲卵量、低胚胎質(zhì)量等問(wèn)題，據(jù)統(tǒng)計(jì)其排卵率可達(dá)70%～80%，但妊娠率僅30%左右［10］。有學(xué)者認(rèn)為這可能與PCOS患者的內(nèi)分泌環(huán)境紊亂及代謝異常所致的卵子質(zhì)量降低有關(guān)［11］。Dissen等［6］通過(guò)大鼠模型研究認(rèn)為PCOS組卵巢內(nèi)NGF生成過(guò)量，通過(guò)與卵巢內(nèi)的NGF受體作用，使卵巢發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，同時(shí)伴隨著促黃體絨素（LH）水平的提高，過(guò)量的NGF不但降低卵子的發(fā)育潛能，亦可導(dǎo)致較多早期卵泡的同時(shí)發(fā)育。

本研究發(fā)現(xiàn)，卵泡液內(nèi)NGF水平的高表達(dá)可能是PCOS患者早期多卵泡發(fā)育、優(yōu)勢(shì)卵泡選擇障礙，并最終導(dǎo)致無(wú)排卵的卵巢局部影響因子之一。同時(shí)血清和卵泡液內(nèi)NGF水平的過(guò)高表達(dá)并不利于卵母細(xì)胞的發(fā)育，影響卵子質(zhì)量，降低胚胎發(fā)育潛能，從而影響PCOS患者的妊娠結(jié)局，這也可部分解釋PCOS患者高獲卵量、低胚胎質(zhì)量及流產(chǎn)率高的原因。

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（2014-12-03收稿2015-04-24修回）

（本文編輯李鵬）

The relationship between NGF in serum and follicular fluid and polycystic ovary syndrome

WANG Chunyan1，F(xiàn)AN Guiling2，YI Jianping2
1 Qianan Maternal and Child Health Hospital，Tangshan 064400，China；2 Maternal and Child Health Hospital of Tangshan

ObjectiveTo investigate the relationship of nerve growth factor（NGF）between serum and follicular fluid in patients with polycystic ovary syndrome（PCOS），and its effect on pregnancy outcomes.MethodsFrom December 2011 to November 2012，65 PCOS patients suffered with in vitro fertilization-embryo transfer（IVF-ET）were included in PCOS group and 31 non-PCOS patients with IVF-ET were used as control group.The expressions of NGF in serum and follicular fluid were detected by ELISA on the injection day of chorionic gonadotropin（HCG）.The expression levels of NGF in serum and follicular fluid were compared between PCOS group and control group.ResultsThe NGF levels in serum［（14.38±0.42）ng/L］and follicular fluid［（9.61±0.49）ng/L］were significantly higher in PCOS group than those of control group［（11.39±0.38）ng/L and（7.55±0.40）ng/L］.In PCOS group，NGF levels in serum［（14.22±0.35）ng/L］and follicular fluid［（9.30±0.31）ng/L］were significantly lower in pregnant group than those of non-pregnant group［（14.51±0.43）ng/L，（9.86±0.46）ng/L，P＜0.01］. ConclusionThe increased levels of NGF in serum and follicular fluid of PCOS patients contribute to the pathogenesis of PCOS.The high expression of NGF in serum and follicular fluid may be harmful to pregnancy in PCOS patients.

polycystic ovary syndrome；nerve growth factor；serum；follicular fluid

R711.7

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.09.015

1河北唐山，遷安市婦幼保健院生殖科（郵編064400）；2唐山市婦幼保健院

王春艷（1979），女，研究生，碩士學(xué)位，主治醫(yī)師，主要從事生殖內(nèi)分泌方面研究