高　　琳，陳萬(wàn)義，任　　婧，*

（1.光明乳業(yè)股份有限公司光明乳業(yè)研究院，乳業(yè)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200436；2.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海201306）

食品中熒光假單胞菌的危害及其快速檢測(cè)方法研究進(jìn)展

高琳1，2，陳萬(wàn)義1，任婧1，*

（1.光明乳業(yè)股份有限公司光明乳業(yè)研究院，乳業(yè)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200436；2.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海201306）

熒光假單胞菌（Pseudomonas Fluorescens）隸屬于假單胞菌屬，是食品中常見(jiàn)的一種嗜冷致病微生物。它能夠產(chǎn)生極其耐熱的蛋白酶和脂肪酶，這些酶在高溫處理后仍有殘留，并在食品儲(chǔ)藏過(guò)程中繼續(xù)分解其中的脂肪和蛋白質(zhì)，導(dǎo)致產(chǎn)品的風(fēng)味和質(zhì)地發(fā)生變化。因此，研發(fā)出一種既快速又實(shí)用的熒光假單胞菌檢測(cè)方法成為食品行業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)。本文對(duì)食品中熒光假單胞菌的危害特點(diǎn)及國(guó)內(nèi)外的一些快速檢測(cè)方法，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、熒光定量PCR、熒光原位雜交、流式細(xì)胞術(shù)等方法進(jìn)行了綜述，比較各方法的優(yōu)缺點(diǎn)并展望了熒光假單胞菌快速檢測(cè)方法的發(fā)展趨勢(shì)。

熒光假單胞菌，危害，快速檢測(cè)方法，食品

食品安全問(wèn)題是當(dāng)今國(guó)際社會(huì)的熱點(diǎn)話題，食源性疾病的發(fā)病率處于各類疾病發(fā)病率的前列，嚴(yán)重影響公共健康。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的日益提高，我國(guó)的食品安全問(wèn)題也越來(lái)越受重視。

熒光假單胞菌（Pseudomonas Fluorescens）是屬于假單胞菌屬（Pseudomonas）的嗜冷微生物，它是一種環(huán)境污染菌，廣泛存在于水和土壤當(dāng)中。它能夠在低溫環(huán)境下生長(zhǎng)繁殖，冷藏的牛奶、高蛋白以及脂類豐富的食品一旦被熒光假單胞菌感染，該菌便會(huì)大量繁殖，逐漸演變?yōu)閮?yōu)勢(shì)菌群［1-2］。雖然經(jīng)過(guò)巴氏殺菌（72℃，15 s）以及超高溫滅菌（UHT）可以殺死熒光假單胞菌，但其產(chǎn)生和分泌的蛋白酶和脂肪酶非常耐熱，即使是巴氏殺菌和UHT處理也不能使這些酶完全失活。殘留的酶會(huì)導(dǎo)致牛奶的物理品質(zhì)和感官品質(zhì)發(fā)生變化。有臨床研究表明，熒光假單胞菌自溶后會(huì)釋放內(nèi)毒素，內(nèi)毒素中的磷脂成分若污染了血液制品，會(huì)導(dǎo)致病人輸血后產(chǎn)生不可逆的休克［3］。隨著人類社會(huì)電冰箱的普及，冷凍食品在人類的飲食構(gòu)成中占據(jù)了極大的比例，嗜冷的熒光假單胞菌對(duì)于人類而言便是一種潛在的威脅。目前尚未有關(guān)于熒光假單胞菌導(dǎo)致食品中毒事件的報(bào)道，但是隨著人們生活質(zhì)量的提高，食品安全越來(lái)越引起人們的重視，如何能夠快速的檢測(cè)出食品中的熒光假單胞菌這一難題便被提上食品安全的日程。

1　熒光假單胞菌的生物學(xué)特征

熒光假單胞菌在分類學(xué)上屬于假單胞菌屬，菌體細(xì)胞為直的短桿狀，大小為0.7～0.8×2.3～2.8 μm，兩端圓形，無(wú)菌毛，不產(chǎn)芽孢，革蘭氏染色陰性［4］。有數(shù)根極生鞭毛，利用鞭毛運(yùn)動(dòng)。熒光假單胞菌是好養(yǎng)或者兼性厭氧的，進(jìn)行嚴(yán)格的呼吸型代謝，以氧為最終電子受體，但能以硝酸鹽為替代的電子受體進(jìn)行厭氧呼吸。其化能營(yíng)養(yǎng)為異養(yǎng)，不需要有機(jī)生長(zhǎng)因子。在酸性環(huán)境下幾乎所有的種都不能生長(zhǎng)。熒光假單胞菌不產(chǎn)膿青酶，氧化酶陽(yáng)性，接觸酶陽(yáng)性，甲基紅實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，精氨酸雙水解酶陽(yáng)性，V.P實(shí)驗(yàn)陰性。熒光假單胞菌的生長(zhǎng)溫度范圍為4～37℃，在4℃時(shí)繁殖最快，在42℃時(shí)就會(huì)停止生長(zhǎng)，超過(guò)70℃，只需數(shù)秒即可被殺死。

熒光假單胞菌在自然界中分布廣泛，土壤、水、植物［5］及動(dòng)物活動(dòng)環(huán)境中均能生存，在海洋環(huán)境中也普遍存在。常大量寄生在魚(yú)類、兩棲類、爬行類動(dòng)物甚至一些昆蟲(chóng)的體內(nèi)，其成員對(duì)動(dòng)植物以及人類均具有致病性。熒光假單胞菌［6］常常存在于人的膿液、痰液、尿液、血液、胸腔積液和膽汁等，也是存在于人類腸道的正常細(xì)菌，但對(duì)正常人群不具有致病性。

2　熒光假單胞菌的流行病學(xué)特征

在臨床上熒光假單胞菌最主要的危害是侵染血液及血制品。早在二十世紀(jì)五十年代，Pittman［7］和Brande［8］曾先后通過(guò)分析庫(kù)存血液的污染菌，指出假單胞菌屬（Pseudomonas）是最常見(jiàn)的污染菌。賀許華等［9］曾報(bào)道過(guò)獻(xiàn)血者因攜帶熒光假單胞菌而污染庫(kù)存血液的案例。熒光假單胞菌對(duì)正常人不具有致病性，但其一旦進(jìn)入人體血液，可導(dǎo)致諸如敗血癥、感染性休克以及血管內(nèi)凝血等嚴(yán)重后果。曾有報(bào)道指出，在2004～2006年，由于用于癌癥病人的肝素化鹽清洗液被污染，導(dǎo)致超過(guò)80人被感染了熒光假單胞菌［10］。

熒光假單胞菌的致病性主要?dú)w因于其釋放的內(nèi)毒素，內(nèi)毒素的磷脂成分可以引起細(xì)菌性休克以及彌漫性血管內(nèi)凝血［11］。它能導(dǎo)致先天性或者獲得性免疫缺陷癥的病人罹患骨髓炎、敗血癥、化膿性關(guān)節(jié)炎、泌尿道及肺部感染等多種疾病。此外，熒光假單胞菌也是水生經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的條件致病菌，可引發(fā)草魚(yú)、青魚(yú)、鯉魚(yú)、鯽魚(yú)等大多數(shù)淡水魚(yú)類的赤皮病，也能引起熱帶魚(yú)、鮭科魚(yú)類和多種魚(yú)類的細(xì)菌性敗血病和赤皮?。?2］。

3　熒光假單胞菌對(duì)食品的危害

從低溫冷藏條件下的原料乳中分離出的嗜冷菌以熒光假單胞菌為主［13］，通過(guò)對(duì)鮮乳中易污染的嗜冷菌進(jìn)行分離鑒定與相關(guān)研究，已經(jīng)成功分離出熒光假單胞菌［14］。張陽(yáng)旸等［15］經(jīng)過(guò)一年的采樣與篩選，發(fā)現(xiàn)上海地區(qū)原料乳分離出的嗜冷菌中，假單胞菌屬細(xì)菌占了58%，其中熒光假單胞菌是牧場(chǎng)檢出率最高以及檢出月份最多的嗜冷菌。這些從冷藏原料乳中分離出的嗜冷熒光假單胞菌會(huì)產(chǎn)生胞外堿性蛋白酶，該酶會(huì)導(dǎo)致牛乳黏度增加、凝集以及乳清析出，牛乳品質(zhì)顯著下降［16］，雖然通常巴氏殺菌工藝（72℃，15 s）可以將熒光假單胞菌殺死，但是熒光假單胞菌分泌的胞外耐熱性蛋白酶可以耐受超高溫瞬時(shí)滅菌（137℃，4 s）而存活，通常情況下大約會(huì)有10%的殘留。這些殘留將在奶制品儲(chǔ)藏過(guò)程中再次被激活，分解蛋白質(zhì)和脂肪，從而導(dǎo)致乳制品物理品質(zhì)和感官品質(zhì)發(fā)生變化［17］，如出現(xiàn)苦味、腐敗味、脂肪氧化味或老化產(chǎn)生膠凝等一系列質(zhì)量問(wèn)題。這些品質(zhì)變化明顯縮短乳品的保質(zhì)期，不僅嚴(yán)重阻礙乳品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，而且會(huì)導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失。

4　檢測(cè)方法概述

熒光假單胞菌不僅危害人類及動(dòng)物的健康，而且會(huì)縮短食品的貨架期，造成經(jīng)濟(jì)損失。因此能夠快速并準(zhǔn)確的檢測(cè)出食品中的熒光假單胞菌具有良好的實(shí)踐意義。

4.1傳統(tǒng)檢測(cè)方法

通常研究熒光假單胞菌在周圍的分布，主要采用電鏡掃描（SEM）、綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記細(xì)胞以及免疫化學(xué)的方法［18］。魚(yú)類熒光假單胞菌的傳統(tǒng)診斷方法包括病原分離培養(yǎng)和血清學(xué)檢測(cè)，但這些檢測(cè)方法無(wú)法快速并準(zhǔn)確的檢測(cè)出食品中的熒光假單胞菌。

目前國(guó)內(nèi)對(duì)熒光假單胞菌的檢測(cè)鑒定仍然以傳統(tǒng)培養(yǎng)方法為標(biāo)準(zhǔn)。在食品工業(yè)，檢測(cè)和鑒別熒光假單胞菌的方法主要是傳統(tǒng)的生理生化分析，基本步驟大致為樣品前處理、選擇性増菌、選擇性平板分離以及生理生化特征實(shí)驗(yàn)等，實(shí)驗(yàn)周期最少為4 d，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，重復(fù)性低［19］，而且生化分析檢測(cè)范圍小，僅限于檢測(cè)幾個(gè)品種［20］，該方法雖然具有實(shí)用性和準(zhǔn)確性，但是生化診斷法常常依賴于熒光假單胞菌的表型表達(dá)，其表型表達(dá)的特點(diǎn)是隨著環(huán)境的不同而表現(xiàn)出不同的表型，從而導(dǎo)致生理生化診斷的誤判［21］。隨著食品工業(yè)的發(fā)展及對(duì)高通量快速監(jiān)測(cè)技術(shù)的追求，傳統(tǒng)的檢測(cè)方法顯然不能適合當(dāng)今科研和生產(chǎn)實(shí)踐等工作要求。

4.2現(xiàn)代分子生物學(xué)檢測(cè)方法

近些年，隨著基因組學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，一些新型快速檢測(cè)方法如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR），實(shí)時(shí)定量PCR，熒光原位雜交，流式細(xì)胞技術(shù)［22］等技術(shù)已經(jīng)得到開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。其中熒光原位雜交，流式細(xì)胞等技術(shù)能快速檢測(cè)嗜冷的熒光假單胞菌，并能對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，可以達(dá)到和傳統(tǒng)檢測(cè)方法一致的結(jié)果。

4.2.1PCR檢測(cè)方法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法。PCR反應(yīng)自問(wèn)世以來(lái)，因其具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便且省時(shí)等特點(diǎn)而深受學(xué)者們的青睞，并已被廣泛應(yīng)用在食源性致病微生物的檢測(cè)領(lǐng)域。

PCR方法是現(xiàn)階段檢測(cè)熒光假單胞菌最快速最有效的方法［23］。由于熒光假單胞菌的PCR檢測(cè)尚處于起步階段，且假單胞菌屬是一個(gè)很大的群體，可以分為5個(gè)生物變型［24］，因此PCR檢測(cè)過(guò)程中特異性引物很難設(shè)計(jì)［2，25］。檢測(cè)靶點(diǎn)是分子檢測(cè)法的關(guān)鍵，目前已經(jīng)報(bào)道的檢測(cè)靶點(diǎn)包括16S rRNA基因［26-27］、apr基因［28-29］、gyrB基因［20，30］以及國(guó)內(nèi)鄧顯文等報(bào)道的16S-23S rRNA基因間隔區(qū)序列［31］（ITS1，intergenic spacer）。

4.2.2多重PCR結(jié)合微陣列熒光顯色法DNA微陣列（DNA Microarray）也叫寡核苷酸陣列（Oligonucleitide array），它是在核酸雜交（Northern、Southern）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，是生物芯片中的一種。其原理是在固體表面上集成已知序列的基因探針，被測(cè)生物細(xì)胞或組織中大量標(biāo)記的核酸序列與上述探針陣列進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)相應(yīng)位置雜交探針，實(shí)現(xiàn)基因信息的快速檢測(cè)。DNA宏陣列（macroarray）是微陣列的技術(shù)基礎(chǔ)，通過(guò)使用兩組多重PCR技術(shù)進(jìn)行顯色宏陣列體系，可以快速檢測(cè)出牛奶或肉類中的熒光假單胞菌。CHIANG Y等［32］通過(guò)設(shè)計(jì)DNA探針以及PCR引物，從牛奶及肉類食品中快速檢測(cè)出了李斯特菌、金黃色葡萄球菌以及熒光假單胞菌等細(xì)菌。這種宏陣列體系包括兩個(gè)步驟，首先是多重PCR引物實(shí)驗(yàn)，然后是顯色DNA宏陣列，通過(guò)使用兩組多重PCR系統(tǒng)和包含對(duì)熒光假單胞菌特異性探針的宏陣列，為檢測(cè)出熒光假單胞菌，CHIANG Y等建立的特異的雜交模式，可以在18 h內(nèi)檢測(cè)出熒光假單胞菌，此法不需使用瓊脂糖凝膠電泳，避免了瓊脂糖凝膠電泳不能識(shí)別出分子量接近的PCR產(chǎn)物的不足。宏陣列法檢測(cè)食品中的熒光假單胞菌精確快速且省時(shí)，可行性高。

4.2.3熒光定量PCR檢測(cè)法熒光定量PCR（realtime fluores-cence quantitative PCR，RTFQ PCR）是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程。通過(guò)結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。熒光定量PCR技術(shù)［33］在理論上優(yōu)于常規(guī)PCR方法，檢測(cè)速度更快，特異性更強(qiáng)，靈敏度更高，且可以實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣品的定量檢測(cè)。

近年來(lái)，熒光定量PCR方法已逐步取代常規(guī)PCR，成為食品安全與科學(xué)研究中PCR檢測(cè)的研究趨勢(shì)，廣泛應(yīng)用于各類病原菌的快速檢測(cè)中。楊一林［23］選取gyr B基因?yàn)闄z測(cè)靶點(diǎn)，建立了常規(guī)PCR和熒光定量PCR檢測(cè)體系，并進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)，經(jīng)過(guò)特異性、靈敏度以及抗干擾能力評(píng)價(jià)，證實(shí)了建立的熒光定量PCR體系可快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)食品樣品中熒光假單胞菌的存在。但是RQ-PCR［34］這一技術(shù)的局限之處在于無(wú)法區(qū)分樣品中的DNA是來(lái)自于活細(xì)胞還是死細(xì)胞。通過(guò)在DNA提取和擴(kuò)增之前加入一種可以破壞死細(xì)胞完整性和DNA的染料，如EMA和PMA，從而抑制死細(xì)胞DNA的擴(kuò)增。

4.2.4熒光原位雜交技術(shù)熒光原位雜交技術(shù)［35］（Fluorescence In Situ Hybridization，F(xiàn)ISH）是根據(jù)已知微生物不同分類級(jí)別上種群特異的DNA序列，以利用熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為探針，基于堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，與環(huán)境基因組中DNA分子雜交。通過(guò)識(shí)別雜交位點(diǎn)的熒光信號(hào)來(lái)對(duì)特定核苷酸序列進(jìn)行定性、定量以及定位分析。相較于其他檢測(cè)方法，F(xiàn)ISH檢測(cè)過(guò)程中無(wú)核酸提取及擴(kuò)增過(guò)程，因而被認(rèn)為是快速檢測(cè)食品中微生物的重要方法之一。隨著FISH技術(shù)的逐漸成熟，多色熒光原位雜交技術(shù)［36］（Multicolor Fluorescence In Situ Hybridization，MFISH）應(yīng)運(yùn)而生。Yamaguchi等［37］使用該技術(shù)在7 h內(nèi)從牛奶中檢測(cè)出了熒光假單胞菌。FISH技術(shù)的不足之處在于其熒光信號(hào)的強(qiáng)弱取決于染色體含量的高低，一旦染色體含量較低，則會(huì)導(dǎo)致假陰性的檢測(cè)結(jié)果。此外，雜交探針的特異性也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，特異性不足，則會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性現(xiàn)象。

4.2.5流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)［34］（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）是能夠用來(lái)快速檢測(cè)液相中懸浮粒子多種物理特性的一種現(xiàn)代分析方法。它是以流式細(xì)胞儀為工具，將懸浮液中的待測(cè)細(xì)胞熒光染色，通過(guò)強(qiáng)激光照射被染色的細(xì)胞，產(chǎn)生的光信號(hào)經(jīng)光電分析器接受分析后轉(zhuǎn)變?yōu)閿?shù)學(xué)信號(hào)，從而對(duì)待測(cè)細(xì)胞進(jìn)行定量分析［38］。Ruger等［39］利用流式細(xì)胞儀術(shù)從混合細(xì)菌中檢測(cè)出熒光假單胞菌。此法的優(yōu)點(diǎn)在于不需要對(duì)DNA進(jìn)行提取和擴(kuò)增，并且快速、靈敏且分析量大，在乳制品微生物的檢測(cè)中應(yīng)用廣泛。但FCM的檢測(cè)結(jié)果也受多種因素影響，如乳制品中存在的大顆粒物質(zhì)如蛋白質(zhì)、脂肪球等，這些大分子物質(zhì)會(huì)干擾流式細(xì)胞儀的定位。為了提升檢測(cè)靈敏度，可以在檢測(cè)之前將這些大分子顆粒清除。

5　結(jié)論與展望

存在于食品中的熒光假單胞菌不僅影響食品的質(zhì)量，造成經(jīng)濟(jì)損失，而且能夠危害人類的健康。如何能夠快速高通量的檢測(cè)出食品中的熒光假單胞菌是食品安全領(lǐng)域迫切需要解決的問(wèn)題。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法不僅工作量大，耗時(shí)長(zhǎng)，而且常常因?yàn)闄z測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確而出現(xiàn)“假陽(yáng)性”或者“假陰性”現(xiàn)象，導(dǎo)致資源浪費(fèi)或者有害食品流入市場(chǎng)。利用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)食品中的熒光假單胞菌克服了上述諸多問(wèn)題，得到了越來(lái)越多學(xué)者的青睞。但是現(xiàn)代分子生物學(xué)方法依然存在各自的不足之處，隨著食品工業(yè)的發(fā)展，迫切的需要建立出一種更加快速、靈敏度高且成本低廉的快速檢測(cè)方法。只有更深入的研究，運(yùn)用分子生物學(xué)方法快速檢測(cè)出食品中的熒光假單胞菌才會(huì)成為可能。

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表3　角鯊烯對(duì)小鼠肝臟MDA、GSH含量的影響（±s，n=10）Table 3　Effect of squalene on MDA and GSH contents in mouse live（r±s，n=10）

表3　角鯊烯對(duì)小鼠肝臟MDA、GSH含量的影響（±s，n=10）Table 3　Effect of squalene on MDA and GSH contents in mouse live（r±s，n=10）

組別　　劑量（mg/kg）MDA（nmol/g）GSH（μmol/g）正常組　34.0±10.4　0.915±0.396模型組　74.9±27.9##　0.586±0.247#陽(yáng)性組　350　46.1±26.4*　0.853±0.283*角鯊烯高劑量組　500　22.82±7.0**　0.896±0.375*角鯊烯中劑量組　250　44.6±24.1*　0.878±0.296*角鯊烯低劑量組　125　68.1±20.5　0.759±0.283

3　結(jié)論與討論

短時(shí)期大量攝入酒精可引起急性酒精性肝損傷，研究表明氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化作用對(duì)酒精性肝損傷的發(fā)生、發(fā)展起著關(guān)鍵作用［8-9］。酒精進(jìn)入人體后，大部分在十二指腸和空腸吸收，在體內(nèi)代謝過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)量的自由基，可導(dǎo)致肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化及體內(nèi)GSH的耗竭［10］。在體內(nèi)氧化還原系統(tǒng)中，GSH則是體內(nèi)最主要的抗氧化成分；而MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其含量的多少直接反映了機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的程度。本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠肝組織MDA含量極顯著（p＜0.01）增加，GSH水平顯著（p＜0.05）降低，而角鯊烯能明顯拮抗一次性大量攝入乙醇的小鼠肝臟MDA含量升高以及GSH水平的降低，其中以角鯊烯500 mg/kg的作用最為明顯。過(guò)度攝入酒精可造成α-磷酸甘油增加，從而加強(qiáng)TG合成，導(dǎo)致TG蓄積，使血清TG水平升高［11-12］。本實(shí)驗(yàn)中急性酒精肝損傷模型能顯著（p＜0.05）升高小鼠的TG含量，角鯊烯可有效降低因急性酒精肝損傷引起的TG含量升高，且高劑量作用明顯。ALT、AST主要存在于肝細(xì)胞內(nèi)，是人體代謝過(guò)程中必不可少的“催化劑”，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死等損傷時(shí)可釋放到血液中，致使血清中的水平升高，因此ALT、AST是反應(yīng)肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)。角鯊烯可顯著抑制急性酒精肝損傷引起的血清ALT、AST升高，且呈一定的劑量依賴性。

綜上可知，角鯊烯對(duì)急性酒精性肝損傷具有顯著的保護(hù)效果，其機(jī)制可能與角鯊烯抑制乙醇導(dǎo)致的肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，阻止MDA形成，避免肝功能的損害等有關(guān)。

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Research progress of hazards and rapid methods for detection of Pseudomonas Fluorescen in foods

GAO Lin1，2，CHEN Wan-yi1，REN Jing1，*
（1.StateKeyLaboratoryofDairyBiotechnology，DairyResearchInstitute，BrightDairy&FoodCo.，Ltd.，Shanghai200436，China；2.College of Food Science&Technolgy，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306，China）

Pseudomonas Fluorescens belongs to Pseudomonas.It was a very common psychrotrophic pathogenic microorganisms in foods.It could produce some cellular enzymes with high thermal stability such as lipases and proteases.After treated at high temperature，these enzymes were still active and continue to decompose the fat and protein in foods.Therefore，recently more and more researchers focus the attention on the rapid and exact detection of Pseudomonas Fluorescens in foods.Some rapid detection methods were discussed in this paper，such as polymerase chain reaction（PCR），realtime fluores-cence quantitative PCR，fluorescence In situ hybridization and flow cytometry，and their advantages and disvantages were compared.At last，the research direction of Pseudomonas Fluorescens was discussed.

Pseudomonas Fluorescens；hazard；rapid detection method；food

TS207.4

A

1002-0306（2015）16-0373-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.16.068

2015－01－04

高琳（1991－），女，在讀碩士研究生，研究方向：食品安全，E-mail：wangyiIrene@163.com。

任婧（1980－），博士，高級(jí)工程師，研究方向：食品安全及微生物分子生物學(xué)，E-mail：animalrain@hotmail.com。

國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃課題（2012BAD12B08，2012BAK17B14）。