繆云萍，陳愛(ài)瑛，夏志國(guó)，諸葛定娟，程　敏，董文彬，鄭高利，*

（1．浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，浙江杭州310013；2.浙江海力生研究院，浙江舟山316000）

角鯊烯對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用

繆云萍1，陳愛(ài)瑛1，夏志國(guó)2，諸葛定娟1，程敏1，董文彬1，鄭高利1，*

（1．浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，浙江杭州310013；2.浙江海力生研究院，浙江舟山316000）

目的：研究角鯊烯對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。方法：60只ICR小鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，陽(yáng)性組，角鯊烯高、中、低劑量組。正常組和模型組灌胃等體積花生油，陽(yáng)性組灌胃葵花牌護(hù)肝片350 mg/kg；角鯊烯高、中、低劑量組分別灌胃角鯊烯500、250、125 mg/kg，每日1次，30 d后制備急性酒精性肝損傷模型。模型制備16 h后檢測(cè)肝臟系數(shù)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和甘油三酯（TG）水平及肝臟丙二醛（MDA）和還原型谷胱甘肽（GSH）含量。結(jié)果：角鯊烯可明顯降低血清ALT、AST、TG水平，降低肝組織MDA含量，并提高肝組織GSH含量，且呈明顯的劑量依賴性，大劑量還能明顯降低肝損傷小鼠的肝臟系數(shù)。結(jié)論：角鯊烯對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其抗氧化作用有關(guān)。

角鯊烯，肝損傷，酒精，抗氧化

角鯊烯（squalene）又名鯊烯，于1906年首次從鯊魚肝臟中分離得到，化學(xué)名為2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯，是一種高度不飽和烴類化合物［1］。角鯊烯具有增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，常被添加到功能性食品和化妝品中［2-3］，但目前尚未見(jiàn)有保肝護(hù)肝作用的文獻(xiàn)報(bào)道。酒精是最常見(jiàn)的肝臟毒物之一，過(guò)量飲酒可致肝臟損傷［4］。我國(guó)酒類消費(fèi)人群數(shù)量龐大，隨著酒類消耗量的增加，人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，近年來(lái)酒精所致的肝損傷呈逐年上升趨勢(shì)，酒精已成為繼病毒性肝炎后導(dǎo)致肝損傷的第二大病因［5］。目前除戒酒和支持性治療外，尚無(wú)令人滿意的酒精性肝損傷防治方法，開發(fā)安全有效的防治藥物或功能性食品具有重要的臨床意義［6］。本研究以酒精灌胃制備小鼠急性酒精性肝損傷模型［7］，觀察角鯊烯對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用，并探討其可能的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

ICR小鼠體重18～22 g，雄性，清潔級(jí)，由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證：0014466，動(dòng)物許可證SCXK（浙）20080033；角鯊烯含量95%，由浙江海力生生物技術(shù)有限公司提供，使用時(shí)用花生油配制成25、12.5、6.25 mg/mL的溶液待用；葵花牌護(hù)肝片批號(hào)：201305197，購(gòu)自黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司，碾磨后用花生油配制成17.5 mg/mL的混懸液待用；無(wú)水乙醇分析純，使用時(shí)蒸餾水稀釋成體積分?jǐn)?shù)50%乙醇；三氯醋酸、硫代巴比妥酸、正丁醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）檢測(cè)試劑盒批號(hào)分別為：P1404011、P1310011，購(gòu)自南京建成生物工程研究所；甘油三脂（TG）檢測(cè)試劑盒批號(hào)：20140328，購(gòu)自寧波賽克生物科技有限公司；還原型谷胱甘肽（GSH）檢測(cè)試劑盒批號(hào)：0202251402，購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

BA-815型半自動(dòng)生化分析儀上海三科儀器有限公司；MagNA Lyser全自動(dòng)樣品勻漿系統(tǒng)美國(guó)Roche公司；Sartorius BS100S型電子分析天平北京賽多利斯天平有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組與處理小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常組，模型組，陽(yáng)性組，角鯊烯高、中、低劑量組。小鼠灌胃體積為20 mL/kg，正常組和模型組給予等體積花生油，陽(yáng)性組給予葵花牌護(hù)肝片350 mg/kg，角鯊烯高、中、低劑量組分別灌胃給予角鯊烯500、250、125 mg/kg。動(dòng)物每天給藥1次，連續(xù)30 d。末次給藥后2 h，模型組及各用藥組一次性灌胃給予50%乙醇20 mL/kg，正常組給予等體積蒸餾水。

1.2.2樣品采集及指標(biāo)測(cè)定血清處理及指標(biāo)測(cè)定：小鼠在給予酒精后，禁食不禁水16 h，摘眼球取血，于37℃水浴10 min，3000 r/min離心5 min，分離出血清，用生化分析儀測(cè)定ALT、AST、TG含量。

肝勻漿處理及指標(biāo)測(cè)定：小鼠取血后脫臼處死，迅速取肝臟，用預(yù)冷的0.9%生理鹽水清洗，濾紙吸干表面水分，稱肝重，并計(jì)算臟器系數(shù)（臟器濕重/體重× 100）；快速稱取0.3 g右葉肝組織，加入預(yù)冷的生理鹽水，全自動(dòng)樣品勻漿系統(tǒng)制成30%的肝勻漿，硫代巴比妥酸比色法測(cè)定MDA含量，二硫代二硝基苯甲酸比色法測(cè)定GSH含量，具體操作按相關(guān)說(shuō)明書進(jìn)行。

2　結(jié)果與分析

2.1一般觀察

除正常組外，其余各組小鼠乙醇灌胃后，均表現(xiàn)出不同程度的興奮、步態(tài)不穩(wěn)、呼吸急促等現(xiàn)象，然后活動(dòng)開始減少，部分小鼠出現(xiàn)昏睡。角鯊烯各劑量組對(duì)酒精誘導(dǎo)的小鼠興奮及后期的昏睡期狀態(tài)無(wú)明顯影響。

2.2角鯊烯對(duì)小鼠體重和肝臟系數(shù)的影響

由表1可知，連續(xù)30 d灌胃給予角鯊烯500、250、125 mg/kg對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響。酒精造模后小鼠肝臟腫脹明顯，肝臟系數(shù)極顯著（p＜0.01）提高。角鯊烯500 mg/kg可抑制酒精誘導(dǎo)的小鼠肝臟腫脹，明顯降低肝臟系數(shù)。

表1　角鯊烯對(duì)小鼠體重和肝臟系數(shù)的影響（±s，n=10）Table 1　Effect of squalene on body weight and liver index（±s，n=10）

表1　角鯊烯對(duì)小鼠體重和肝臟系數(shù)的影響（±s，n=10）Table 1　Effect of squalene on body weight and liver index（±s，n=10）

注：與正常組比較：#代表差異顯著（p＜0.05），##代表差異極顯著（p＜0.01）；與模型組相比：*代表差異顯著（p＜0.05），**代表差異極顯著（p＜0.01）；表2、表3同。

0 d　30 d正常組　18.4±2.6　34.1±3.8　3.77±0.13模型組　18.6±2.5　33.5±4.3 4.56±0.28##陽(yáng)性組　350　18.6±2.9　32.5±4.3 4.09±0.18**角鯊烯高劑量組　500　18.3±2.7　33.6±4.6　4.19±0.30*角鯊烯中劑量組　250　18.3±2.6　33.6±5.8　4.35±0.20角鯊烯低劑量組　125　18.4±2.6　33.3±4.3　4.42±0.56組別　　劑量（mg/kg）體重（g）　　肝臟系數(shù)（g/100g）

2.3角鯊烯對(duì)血清ALT、AST、TG水平的影響

由表2可知，酒精可誘導(dǎo)肝損傷，使血清中肝功能相關(guān)酶ALT和AST水平明顯升高，并極顯著（p＜0.01）提高血清TG含量。與模型組比較，角鯊烯各劑量組均可顯著（p＜0.05）降低血清TG含量，角鯊烯500 mg/kg組的血清ALT和AST水平顯著（p＜0.05）降低，250 mg/kg組血清AST水平顯著（p＜0.05）降低。總之，角鯊烯可劑量依賴性的降低血清ALT、AST、TG水平。

表2　角鯊烯對(duì)小鼠血清ALT、AST及TG水平的影響（±s，n=10）Table 2　Effect of squalene on mouse serum ALT，AST and TG levels（±s，n=10）

表2　角鯊烯對(duì)小鼠血清ALT、AST及TG水平的影響（±s，n=10）Table 2　Effect of squalene on mouse serum ALT，AST and TG levels（±s，n=10）

TG（mmol/L）正常組　40.5±7.4　109±36　1.62±0.22模型組　103.7±34.4##171±38#3.17±1.33##陽(yáng)性組　350　70.3±9.7*　121±37*1.87±0.75*角鯊烯高劑量組　500　76.9±20.4*　132±31*1.77±0.65**角鯊烯中劑量組　250　98.0±32.0　138±29*1.92±0.88*角鯊烯低劑量組　125　89.6±25.8　140±39 1.78±0.83*組別　　劑量（mg/kg）ALT（U/L）AST（U/L）

2.4角鯊烯對(duì)肝臟MDA、GSH含量的影響

由表3可知，酒精引起小鼠肝損傷的同時(shí)，誘導(dǎo)抗氧化系統(tǒng)損傷，可顯著（p＜0.05）降低肝臟GSH水平，并極顯著（p＜0.01）提高過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量。角鯊烯500、250 mg/kg組均可顯著（p＜0.05）升高肝臟GSH含量，降低肝臟MDA水平，呈明顯的劑量依賴性。

Protective effects of squalene on acute alcohol-induced liver injury in mice

MIAO Yun-ping1，CHEN Ai-ying1，XIA Zhi-guo2，ZHUGE Ding-juan1，CHENG Min1，DONG Wen-bin1，ZHENG Gao-li1，*
（1.Zhejiang Academy of Medical Sciences，Hangzhou 310013，China；2.Zhejiang Institute of Hailisheng，Zhoushan 316000，China）

Objective：To study the protective effects of squalene on acute alcohol-induced liver injury in mice. Methods：Sixty ICR mice were randomly divided into normal group，model group，positive group，and high，midium，low dose group of squalene.The mice of normal group and model group were given peanut oil，positive group were given 350 mg/kg huganpian，and high，midium，low dose group of squalene were given 500 mg/kg，250 mg/kg，125 mg/kg squalene.After 30 days ethanol were given to all groups except the normal. The level of glutamic-pyruvic transaminase（ALT），glutamic oxaloacetictransaminase（AST），triglyceride（TG）in serum and the content of malondialdehyde（MDA），reduced glutathione（GSH）in liver were detected.Results：Squalene could reduce the level of ALT，AST，TG and MDA，and improve the content of GSH.Conclusion：Squalene could protect against acute alcoholic hepatic injury in mice，possibly due to its antioxidant effect.

squalene；liver injury；alcohol；antioxidant

TS201.1

A

1002-0306（2015）16-0364-03

10.13386/j.issn1002-0306.2015.16.065

2014－12－05

繆云萍（1970-），女，碩士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，研究方向：新藥開發(fā)與評(píng)價(jià)，E-mail：miaoyp70@163.com。

鄭高利（1963-），男，博士，研究員，研究方向：新藥藥理與毒理，E-mail：gaoli-z@163.com。

國(guó)家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2013ZX09303005）；浙江省醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科群項(xiàng)目（XKQ-010-001）。