李崢嶸

蟾蜍草提取液體外抑菌作用的觀察

李崢嶸

目前利用中醫(yī)藥寶藏進(jìn)行抗菌作用的研究已經(jīng)取得了一定的成果，中藥因其作用獨(dú)特日益受到關(guān)注。體外研究是新藥開發(fā)的第一步，為求探索達(dá)州道地藥材蟾蜍草的體外抑菌作用，采用K-B法[1]觀察其體外分別對(duì)代表性細(xì)菌——金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌的抑菌作用效果。結(jié)果表明蟾蜍草提取液體外對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果優(yōu)于表皮葡萄球菌，優(yōu)于大腸桿菌與枯草桿菌。

卒中單元院前急救模式；腦卒中患；療效探究

中藥歷史悠久，功效顯著，許多研究資料表明，中藥在體內(nèi)外有不同程度的抑菌作用，并且較抗生素不易產(chǎn)生耐藥性。本文所選用的蟾蜍草系四川達(dá)州道地藥材，取材方便，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。蟾蜍草全草入藥，民間廣泛用于跌打損傷，流感，咽喉腫痛，小兒驚風(fēng)，吐血，鼻衄，乳癰，淋巴腺炎，哮喘，腹水腫脹，腎炎水腫，療瘡癤腫，痔瘡腫痛，子宮脫出，尿道炎，高血壓，一切疼痛及胃癌等癥。因此研究和開發(fā)蟾蜍草抗菌藥具有重大意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌種 金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌。

1.1.2 中藥 中藥材蟾蜍草（產(chǎn)地四川達(dá)州）。

1.1.3 培養(yǎng)基 肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、恒溫水箱、干燥箱、恒溫保溫箱

1.2 蟾蜍草提取液的制備 稱取50g的蟾蜍草烘干、粉碎后，用500mL35%的酒精于50℃的恒溫水浴中浸泡48h得提取液，將提取液離心過濾去除殘?jiān)?，最后將提取液減壓濃縮的40mL浸膏用35%酒精定容，使最終質(zhì)量濃度為1g/ml（所有中草藥的重量與最終液體體積的比值）。將蟾蜍草提取液置于4℃冰箱中，備用。

1.3 體外抑菌實(shí)驗(yàn) 用滅菌棉簽拭紙將分離所得的四種細(xì)菌——金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌。分別移種至3～5mLMH肉湯培養(yǎng)液中37℃培養(yǎng)2～8h，以待生長(zhǎng)至輕微或中等濁度。為保證菌液濃度一致，將菌液稀釋并校正濁度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濃度，麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)[2]按表1所示，稀釋時(shí)使用無菌肉湯，此時(shí)菌液的濃度約為1.5×108個(gè)/L。將制備好的菌液均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基上，將6mm的滅菌紙片每片浸入10ug（取1g/ml的提取液1ml，浸滿100片紙片）的蟾蜍草提取液，將其與青霉素或鏈霉素分別貼在涂布好革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌的瓊脂培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-2h，然后用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的大小，以判斷蟾蜍草提取液對(duì)不同總類細(xì)菌的體外抑菌效果。

表1 麥?zhǔn)媳葷峁苤品?/p>

2 結(jié)果

培養(yǎng)后取出平板，測(cè)量抑菌圈的直徑。抑菌圈的邊緣以肉眼看不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限。按抑菌圈直徑判斷細(xì)菌的敏感度，具體判定標(biāo)準(zhǔn)見表 2[3]。

通過提取濃縮工藝，在控制藥物濃度與菌液濃度的情況下，采用紙片擴(kuò)散法，在排除35%酒精影響情況下，客觀又直觀地展現(xiàn)了蟾蜍草提取液在體外對(duì)不同細(xì)菌的抑菌效果。蟾蜍草提取液的體外抑菌作用詳見表3。

作者單位：463000河南駐馬店市中醫(yī)院

表2 細(xì)菌敏感度的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

表3 蟾蜍草提取液體外對(duì)不同細(xì)菌的抑菌效果（mm）

3 結(jié)論

有研究資料顯示，蟾蜍草的主要抗菌作用成分是原兒茶酸，可有效提取蟾蜍草中的原兒茶酸，進(jìn)一步觀察其對(duì)不同細(xì)菌的體外抑菌作用效果。在目前實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，可進(jìn)一步明確蟾蜍草提取液的抑菌作用機(jī)制，力求更好地了解其藥用價(jià)值，為新藥的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)之上，可設(shè)定不同的藥物紙片濃度梯度，進(jìn)一步探究其對(duì)不同細(xì)菌的最低抑菌濃度。我國(guó)中醫(yī)藥歷史悠久，功效顯著。隨著抗生素的廣泛使用，細(xì)菌對(duì)多數(shù)抗生素產(chǎn)生了耐藥性[4，5]，而中藥以其價(jià)廉、易得、低毒等優(yōu)勢(shì)吸引了人們的目光。因此，研究和開發(fā)中藥抗菌藥具有重大意義。已有的研究資料表明，中藥在體內(nèi)外有不同程度的抑菌作用，并且較抗生素不易產(chǎn)生耐藥性。中藥藥敏實(shí)驗(yàn)方法和抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)一樣，有擴(kuò)散法、稀釋法和比色法等。選取達(dá)州道地藥材蟾蜍草進(jìn)行提取后，采用擴(kuò)散法觀察其體外抑菌作用。結(jié)果表明：蟾蜍草提取液對(duì)耐青霉素的致病性的金黃色葡萄球菌體外有較好的抑菌效果，且金黃色葡萄球菌對(duì)蟾蜍草提取液敏感度為極敏，這在當(dāng)今耐藥性細(xì)菌的抗菌藥物的研發(fā)有一定的意義；蟾蜍草提取液體外對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果優(yōu)于表皮葡萄球菌，優(yōu)于大腸桿菌與枯草桿菌。

[1]馬建鳳．中藥體外抑菌研究的方法學(xué)進(jìn)展[J]．藥學(xué)評(píng)價(jià)研究,2012,33(1):42－45．

[2]李建志．11種中草藥抗菌作用實(shí)驗(yàn)研究[J]．中醫(yī)藥信息,2013，26(3):82-83．

[3]梁群．大蒜提取液與環(huán)丙沙星殺菌活性的聯(lián)合效應(yīng)研究［J］．中醫(yī)藥信息，2011，27(6):82 － 84?

[4]錢海英．臨床常見革蘭陰性菌的分布及其耐藥性分析[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2012,20(20):3223－3224．

[5]竇紅濤．Mohnarin 2008年度報(bào)告:腸桿菌科細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)[J]．中國(guó)抗生素雜志,2014,35(7):556－564．

R285．5

B