徐靜琳　鄭壽濤

（浙江省臺州市第一人民醫(yī)院，浙江臺州318020）

·研究報告·

防己茯苓湯對急性腎損傷大鼠腎功能的影響*

徐靜琳鄭壽濤

（浙江省臺州市第一人民醫(yī)院，浙江臺州318020）

目的觀察防己茯苓湯對急性腎損傷大鼠腎功能的影響。方法用36只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分成3組，每組12只，均為雄性，分別為正常組、模型組、防己茯苓湯組，正常組灌注0.9%氯化鈉注射液，其他兩組先進(jìn)行模型制備，然后模型組腹腔內(nèi)注射0.9%氯化鈉注射液，防己茯苓湯組腹腔內(nèi)注射防己茯苓湯，觀察一般情況和24 h生存率情況，觀察在12 h、24 h、36 h、48 h在血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、尿素（SU）、血內(nèi)生肌酐清除率（CCr）變化情況。結(jié)果在24 h生存率上，正常組為100%，模型組為41.67%，防己茯苓湯組生存率為66.67%。正常組12 h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、中性粒細(xì)胞凝膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（BQJO）、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、胱抑素C（CysC）上差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；模型組和防己茯苓湯組12 h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC指標(biāo)上兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而模型組和防己茯苓湯組在24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而在12 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論防己茯苓湯具有保護(hù)急性腎損傷腎功能的作用，在臨床上可作為保護(hù)腎功能的良好措施。

防己茯苓湯急性腎損傷大鼠腎功能

急性腎損傷在生理病理機(jī)制上是多方面的，目前主要集中在缺血再灌注腎損傷學(xué)說、細(xì)胞代謝障礙損傷學(xué)說和腎血流動力學(xué)說等。這其中以缺血再灌注腎損傷學(xué)說貫穿始終。缺血后灌注不足就會造成缺氧，時間較長超出腎臟負(fù)荷則出現(xiàn)低氧情況，腎臟會出現(xiàn)低氧損害性變化，出現(xiàn)細(xì)胞變性、壞死，近端和皮髓交界處的腎小管上皮細(xì)胞損傷加重，最終造成腎衰竭［1］。本次研究通過觀察中醫(yī)藥在防治急性腎損傷對腎功能的保護(hù)作用，以期更好治療該疾病?，F(xiàn)報告如下。

1　材料與方法

1.1動物隨機(jī)選取36只SD大鼠為研究對象，均為雄性，平均體質(zhì)量為（160±10）g，均購自中山大學(xué)實驗動物中心，合格證編號為2013034B，均分籠飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食，實驗室溫度控制在22℃左右。

1.2藥物和試劑防己茯苓湯藥物組成：防己10 g，黃芪20 g，桂枝10 g，茯苓10 g，甘草6 g。均對藥材進(jìn)行鑒定后水煎2次，合成濾劑濃縮為2 g/mL后在-10℃環(huán)境保存。試劑有檢測腎功能指標(biāo)的專門試劑盒，由南京建成生物科技有限公司提供，腎功能指標(biāo)參考血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、尿素（SU）、血內(nèi)生肌酐清除率（CCr），均抽取大鼠雙前腿靜脈血進(jìn)行檢測，檢測均按照說明書檢查。

1.3分組和造模將36只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，分別為正常組、模型組和防己茯苓湯組，每組12只。模型組和防己茯苓湯組則腹腔內(nèi)注入5 mg/kg脂多糖，正常組腹腔內(nèi)按5 mg/kg注入0.9%氯化鈉注射液，制備成急性腎損傷模型，7 d后正常組和模型則均注入等量0.9%氯化鈉注射液，防己茯苓湯組則注入20 g/（kg·d）防己茯苓湯，每次間隔12 h。

1.4觀察指標(biāo)和方法觀察各組大鼠在試驗期間精神、呼吸、飲食等一般情況，統(tǒng)計在腹腔內(nèi)注射藥物后24 h大鼠死亡情況。對所有存活的大鼠檢測腎功能指標(biāo)，包括中性粒細(xì)胞凝膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白（BQJO）、尿β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）、胱抑素C（CysC）、Scr、BUN、UA、SU、Ccr，分別檢測治療12 h、24 h、36 h、48 h在以上指標(biāo)變化情況。在以上時間點將大鼠麻醉后取主動脈血液，離心上清液后檢測以上指標(biāo)水平變化情況。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件分析。計量資料以（±s）表示，將調(diào)查統(tǒng)計的內(nèi)容作為變量。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠腎功能相關(guān)指標(biāo)比較見表1。正常組12 h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC上差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；模型組和防己茯苓湯組12h、24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC指標(biāo)上兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而模型組和防己茯苓湯組在24 h、36 h、48 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而在12 h在Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1　各組大鼠相關(guān)指標(biāo)比較（）

表1　各組大鼠相關(guān)指標(biāo)比較（）

SU（mmol/L）0.535±0.145 0.615±0.151 0.461±0.514 48 h0.502±0.1860.613±0.3160.362±0.1670.317±0.452模型組12 h1.546±0.6743.577±0.8142.714±0.1661.312±0.571（n＝12）24 h21.341±7.35230.356±4.78719.576±5.35612.576±5.244 36 h25.623±4.52732.855±5.14624.186±6.14415.967±6.145 48 h31.477±5.14437.351±4.13428.351±5.14518.394±3.564防己茯苓湯組組別時間正常組12 h（n＝12）24 h 36 h Scr（υmol/L）BUN（mmol/L）UA（υmol/L）0.264±0.2450.425±0.2450.361±0.164 0.314±0.2630.472±0.2740.386±0.145 0.412±0.2160.515±0.1350.413±0.314 12 h1.273±0.2363.153±0.3412.451±0.1421.063±0.437 24 h13.789±4.73621.563±3.13614.234±2.6339.573±3.632（n＝12）36 h11.373±4.18517.258±3.06311.482±1.7945.372±2.512 48 h5.354±3.85810.354±2.9536.172±0.9523.161±1.025 Ccr（mL）0.056±0.145 0.067±0.131 0.071±0.089 0.067±0.078 2.123±0.461 14.258±5.134 17.583±4.145 20.147±5.133 1.946±0.412 10.684±4.134 7.268±3.123 3.894±1.675 NAG（U/L）CysC（mg/L）BQJO（υmol/L）9.12±1.940.53±1.03722.45±83.13 9.24±1.560.56±1.07783.53±86.72 9.16±1.320.51±1.01813.45±89.56 9.21±1.260.55±1.04827.24±78.24 12.45±3.560.89±1.451214.44±98.34 17.45±5.231.01±1.321412.32±101.23 21.33±4.521.22±1.441512.31±113.24 23.57±5.111.53±1.371672.58±132.13 12.53±3.751.10±1.231183.12±87.34 13.56±4.231.26±1.011223.34±91.23 12.12±4.220.97±0.991077.53±63.22 10.56±1.470.68±0.79975.31±54.25

2.2各組大鼠一般情況和生存率比較模型組和防己茯苓湯組大鼠精神萎靡、呼吸急促、寒戰(zhàn)、進(jìn)食飲水減少，腹腔內(nèi)不同程度積液，盲腸粘連出現(xiàn)部分膿腫，小腸不同程度擴(kuò)張、水腫和充血。正常組大鼠則無明顯炎癥改變。在24 h生存率上，正常組為100%（12例），模型組為41.67%（5例），防己茯苓湯組生存率為66.67%（8例）。

3　討論

急性腎損傷在發(fā)病機(jī)理上責(zé)于肺脾腎三臟，其中以腎為本，以為為標(biāo)，在治療上則從腎臟入手。在本次研究中，防己茯苓湯中防己歸膀胱、腎、脾經(jīng)，可利水消腫；茯苓、赤小豆能健脾益胃，利水滲濕，有標(biāo)本兼顧特點，兩者共為主藥，黃芪則溫陽益氣助防己祛在表水氣，桂枝則溫陽解表協(xié)助茯苓化氣利水，助黃芪行痹；甘草可培黃芪之陽效果［2］；豬苓、澤瀉等能加強(qiáng)化濕效果，牛膝、補(bǔ)骨脂、菟絲子等補(bǔ)肝腎溫固下元，益母草等活血祛瘀，全方共奏益氣健脾利水、活血、滋陰等效果。從現(xiàn)代藥理學(xué)上看，防己中含有多種生物堿，具有降壓、鎮(zhèn)痛解熱、抗炎和松弛肌肉等作用［3］；黃芪內(nèi)含有的多種氨基酸、蛋白質(zhì)、膽堿等均有增強(qiáng)免疫力作用，且有消除腎炎中尿蛋白，抗衰老、利尿等作用［4］；茯苓中的茯苓多糖等則有利尿作用，桂枝中的桂枝酸等有健脾、解痙、鎮(zhèn)痛等作用。研究［5］特別指出黃芪在該藥物中作用，主要是促進(jìn)組織修復(fù)，能防止急性腎小管壞死，其通過對實驗研究得出防己茯苓湯中黃芪能有效降低血清肌酐和尿素氮水平，能減少腎組織損傷程度，和防己合用能有效預(yù)防和治療急性腎損傷的。另外，茯苓能增強(qiáng)心肌細(xì)胞對缺糖缺氧耐受力，從而達(dá)到穩(wěn)定細(xì)胞膜，保護(hù)線粒體和溶酶體功能，上調(diào)細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶水平，增加糖元氧酵解有關(guān)［6］。

腎功能中，Scr、BUN是腎功能最常用指標(biāo)，Scr由腎小球濾過排出體外，腎小管對Scr重吸收少，在外源性Scr和肌肉磷酸肌酸自身分解產(chǎn)生Scr和腎臟排泄Scr有關(guān)。BUN是人體蛋白質(zhì)代謝主要終末產(chǎn)物，正常情況下，BUN從腎小球在各段小管均能重吸收［7］。BQJO、NAG、CysC是急性腎損傷早期的主要指標(biāo)，能反映出腎損傷的嚴(yán)重程度，對預(yù)后有一定評價作用。

結(jié)果顯示，運(yùn)用防己茯苓湯后患者在腎功能指標(biāo)Scr、BUN、UA、SU、Ccr、BQJO、NAG、CysC上明顯改善，且隨著時間推移，腎功能逐漸得到好轉(zhuǎn)，運(yùn)用后大鼠在精神上明顯好轉(zhuǎn)，在生存率上有明顯好轉(zhuǎn)，達(dá)到66.67%。故防己茯苓湯能改善急性腎損傷臨床癥狀，且在腎功能上明顯得到改善，這說明該藥物能改善急性腎損傷的臨床癥狀，改善腎功能。另外，該藥配伍無明顯副作用，安全性高，且服用方便，操作簡單，可廣泛運(yùn)用在臨床上。研究［8-9］稱，急性腎損傷中白介素-6（IL-6）是目前腎臟疾病最密切細(xì)胞因子之一，其濃度變化幅度和腎組織病理改變一致。TGF-β1和腎臟細(xì)胞增殖、腎小球肥大和腎臟細(xì)胞外基質(zhì)蛋白積聚密切相關(guān)，也和腎間質(zhì)纖維化、腎小球濾過屏障損傷有關(guān)，是加重尿蛋白關(guān)鍵因子［10-11］。本次未納入研究，值得日后深入繼續(xù)探討。

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Experimental Study of the Effect of Fangchi-poria Soup on Renal Function of Rats with Acute Kidney Injury

XU Jinglin，ZHENG Shoutao.
The First People′s Hospital of Taizhou，Zhejiang，Taizhou 318020，China

Objective：To investigate the effect of fangchi-poria soup on renal function of rats with acute kidney injury to provide an effective basis for clinical treatment.Methods：36 mice were randomly divided into three groups：the normal group，the model group，fangchi-poria soup group，12 in each.The control group received normal saline infusion，and the other two groups were made into model.The model group received injection of normal saline in abdomen，while fangchi-poria soup group received injection of fangchi-poria soup in abdomen.The survival rate was observed in general case and 24 h，and the renal function index was observed in 12 h，24 h，36 h and 48 h，such as the change of Scr，BUN，UA，SU，CCr，BQJO，NAG and CysC.Results：As for the 24h survival rate，there were 12 rats surviving with 100%of survival rate in the normal group，the model group 5 with 41.67%，fangchi-poria soup group 8 with 66.67%.In 12 h，24 h，36 h，48 h，there was no obvious change of index，such as Scr，BUN，UA，SU，Ccr，BQJO，NAG and CysC，with no statistical significance before and after treament in the normal group（P＞0.05）；in 24 h，36 h，48 h，there was statistical significance in Scr，BUN，UA，SU，Ccr，BQJO，NAG and CysC in pairwise comparisons in the model group and fangchi-poria soup group（P＜0.05）.In 12 h after treatment，there was no difference in Scr，BUN，UA，SU，Ccr，BQJO，NAG，CysC without statistical significance（P＞0.05）.Conclusion：Fangchi-poria soup plays a role in protecting renal function in acute kidney injury and can be used as a good measures to protect renal function.

Fangchi-poria soup；Acute kidney injury；Rats；Renal function

R285.5

A

1004-745X（2015）12-2090-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.12.007

2015-08-03）

浙江省中醫(yī)藥科學(xué)研究基金計劃項目（2014ZA122）