李國霞　朱煒　陳新妹

宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸鱗癌中NF-кBp50的表達(dá)及意義

李國霞朱煒陳新妹

目的 觀察宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）與宮頸鱗癌中NF-кBp50的表達(dá)，探討NF-кBp50與宮頸鱗癌發(fā)生的關(guān)系。方法 采用免疫組化S-P法檢測宮頸鱗癌38例、CIN 63例及正常宮頸組織20例中NF-кBp50的表達(dá)并比較其差異。結(jié)果 NF-кBp50在正常宮頸組織、CIN及宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為5%、65.07%與86.84%（P＜0.05）； 在CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ中NF-кBp50的陽性表達(dá)率分別為30.76%、65.38%與83.33%（P＜0.05）；在Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期宮頸鱗癌中NF-кBp50的陽性表達(dá)率分別為55.56%、95.00%及100.00%（P＜0. 05）；在高、中、低分化的宮頸鱗癌中NF-кBp50的陽性表達(dá)率分別為81.82%、84.62%及92.86%（＞0.05）。結(jié)論 NF-кBp50的表達(dá)上調(diào)與CIN及宮頸鱗癌的發(fā)生與進(jìn)展相關(guān)。NF-кBp50的陽性表達(dá)是宮頸癌變的早期事件，可能作為宮頸鱗癌前病變診斷的生物學(xué)標(biāo)志。

宮頸上皮內(nèi)瘤變 宮頸鱗癌 核轉(zhuǎn)錄因子NF-кBp50 免疫組化

宮頸癌是危害婦女健康常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率日益增高，且發(fā)病低齡化趨勢明顯，嚴(yán)重危及女性健康。宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌的發(fā)生與高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染相關(guān)。惡性腫瘤的發(fā)生與調(diào)控細(xì)胞增殖與凋亡的各種細(xì)胞因子相關(guān)。作者通過觀察細(xì)胞增殖與凋亡調(diào)控相關(guān)因子NF-кBp50在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）與宮頸鱗癌的表達(dá)，探討NF-кBp50與宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸鱗癌發(fā)生的關(guān)系。

1　臨床資料

1.1一般資料 2013年6月至2014年11月本院收治的CIN患者63例，CINⅠ13例、CINⅡ26例、CINⅢ24例。年齡36～49歲，平均年齡（43.1±1.20）歲。選取宮頸鱗癌患者38例，根據(jù)2009年FIGO分期，Ⅰ期9例、Ⅱ期20例、Ⅲ期9例；其中高分化鱗癌10例，中分化鱗癌13例、低分化鱗癌15例。年齡46～58歲，平均年齡（51. 3±1.04）歲。另選取同期20例因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)后病理檢查正常的宮頸組織為對照組，年齡42～48歲，平均年齡（45.6±1.30）歲。

1.2方法 通過手術(shù)及宮頸錐切獲取標(biāo)本，標(biāo)本獲取后經(jīng)10%甲醛溶液固定并石蠟包埋，每個石蠟塊切片2張，每張切片厚4μm，一張切片經(jīng)HE染色后由兩位病理科醫(yī)生做病理學(xué)診斷；另一張采用鏈菌素親生物素-過氧化物酶法（S- P法）檢測標(biāo)本中NF-кBp50的表達(dá)。兔抗人NF-кBp50單克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，操作過程嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。用乳腺癌組織作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3結(jié)果判斷 NF-кBp50的陽性表達(dá)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞漿與細(xì)胞核中。通過400倍顯微鏡觀察，每張切片隨機(jī)選取10個不同視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，分別記錄陽性細(xì)胞的百分比（%）并計(jì)算其均值，按染色范圍分4級：切片中陽性細(xì)胞＜10%為陰性（-）；10%～49%為弱陽性（+）；50%～89%為陽性（++）；＞90%為強(qiáng)陽性（+++）。本文中（+～+++）列為陽性表達(dá)；而（-）為無表達(dá)，列為陰性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。組間比較采用方差分析，以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1NF-кBp50在三組中的陽性表達(dá)比較 見表1。

表1　NF-кBp50在三組中的陽性表達(dá)比較

2.2NF-кBp50在不同程度宮頸上皮內(nèi)瘤變中陽性表達(dá)比較 見表2。

表2　NF-кBp50在不同宮頸上皮內(nèi)瘤變中的陽性表達(dá)比較

2.3NF-кBp50在不同分期宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)比較 見表3。

表3　NF-кBp50在不同分期宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)比較

2.4NF-кBp50在不同分化宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)比較 見表3。

表3　NF-кBp50在不同分化宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)比較

3　討論

宮頸上皮內(nèi)瘤變是宮頸鱗癌發(fā)生的前驅(qū)，而宮頸鱗癌是目前女性常見的惡性腫瘤，高危型人乳頭病毒（HR-HPV）的持續(xù)感染是其發(fā)生的主要因素。惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移等過程受各種細(xì)胞因子的調(diào)控以及與細(xì)胞因子的異常表達(dá)相關(guān)。NF-кB是一種與細(xì)胞增殖及凋亡密切相關(guān)的核轉(zhuǎn)錄因子，通常情況下NF-кB與其抑制蛋白IкB 結(jié)合，以非活性狀態(tài)貯存于細(xì)胞質(zhì)中，當(dāng)受到如病毒感染，炎癥反應(yīng)等刺激時(shí)，NF-кB被激活并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中，參與調(diào)控細(xì)胞增殖、分化及細(xì)胞凋亡等過程。NF-кB家族有5個成員，根據(jù)C末端序列的不同分為兩類：一類為P65（RelA）、RelB和c-Rel；另一類為P50和P52。在NF-кB家族中，其功能活性的主要形式是p65/p50的異二聚體［1］。

本資料顯示，隨宮頸病變的逐漸加重，NF-кBp50的表達(dá)逐漸上調(diào)，提示NF-кBp50參與CIN及宮頸鱗癌的發(fā)生機(jī)制。HR-HPV的持續(xù)感染與宮頸鱗癌的發(fā)生相關(guān)，當(dāng)HR-HPV感染后可導(dǎo)致宮頸局部炎性因子的產(chǎn)生及免疫功能改變，刺激NF-кBp50的異常活化，而活化后的NF-kBp50誘發(fā)宮頸細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白，如細(xì)胞周期依賴性激酶（CDK）、細(xì)胞周期素D1（Cyclin D1）和c-myc等的表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)細(xì)胞由G1/G0期向S期加速轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細(xì)胞無限制增殖［2，3］。此外，NF-кBp50通過誘導(dǎo)凋亡抑制基因c-IAP-1和 c-IAP-2、TRAF1、TRAF2、Bcl-2、P53等的活化而抑制細(xì)胞的凋亡［4］，兩者協(xié)同作用促使宮頸細(xì)胞異常增殖，最終導(dǎo)致CIN及宮頸鱗癌的形成。Nair［5］等通過對正常宮頸組織、低度與高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌中NF-кBp50結(jié)合能力的研究顯示，在正常宮頸及高度鱗狀上皮內(nèi)瘤變組織的細(xì)胞漿中可見大量p50/p65異二聚體表達(dá)，而低度鱗狀上皮瘤變組織中p50/ p65異二聚體則表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，且IкB表達(dá)下降，在宮頸鱗癌組織中幾乎見不到IкB的表達(dá)，表明NF-кBp50的活化在宮頸鱗癌發(fā)生與發(fā)展的過程中起著重要的作用。Kim［6］研究認(rèn)為，用NF-кBp50抑制劑可以有效促進(jìn)宮頸細(xì)胞的凋亡，從另一側(cè)面表明NF-kBp50在宮頸鱗癌發(fā)生與發(fā)展中的作用。

1Maeda S. Omata M. Inflammation and cancer： role of nuclear factorkappaB activation.Cancer Sci， 2008，99（5）：836～842.

2Amiri KI， Richmond A. Role of nuclear factor kappa B in melanoma. Cancer Metastasis Rev， 2005， 24（4）： 301～313.

3Kojima M， Morisaki T ， Sasaki N， et al . In creased nuclear factor-kB activation in human colorectal carcinoma and its correlation with tumor progression. Ant icancer Res， 2004， 24（2）： 675～681.

4Ryan KM， Ernst MK， Rice NR， et al. Role of NF-KappaB in P53-mediated programmed cell death . Nature， 2000， 404（6780）：892～897.

5Nair A， Venkatraman M， et al. NF-kappaB is constitutively activated in high-grade squamous intraepithelial lesions and squamous cell carcinomas of the human uterine cervix. Oncogene， 2003， 22 （1）： 50～58.

6Kim Y H， Chang I，et al. IFN-alpha sensitizes ME-180human cervical cancer cells to TNF alpha-induced apoptosis byinhibiting cytoprotective NF-kappaB activation. FEBS Lett， 2001，495（2）：66～70.

廣東省清遠(yuǎn)市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014B118）

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