王　冕，王如福*，張　茜

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西 太谷 030 801）

固定化酸性蛋白酶載體的選擇及其性質(zhì)

王冕，王如福*，張茜

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山西 太谷 030 801）

選用海藻酸鈉（sodium alginate，SA）分別與3 種天然高分子材料制作復(fù)合凝膠載體，以酶活回收率為評價指標(biāo)，采用單因素試驗和正交試驗確定最佳載體材料及最佳固定化條件。結(jié)果表明，SA-黃原膠復(fù)合凝膠為最佳載體，其最佳工藝條件為：SA與黃原膠質(zhì)量比例為6∶1，CaCl2質(zhì)量濃度為5.0 g/100 mL，固定化時間為2.5 h，在此條件下固定化酶活回收率為74.12%。對固定化酸性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，結(jié)果表明，其最適pH值為3.0、最適反應(yīng)溫度為45 ℃，均與游離酶相同，熱穩(wěn)定性優(yōu)于游離酶，動力學(xué)參數(shù)Km值高于游離酶，操作半衰期為17.28 d。

酸性蛋白酶；固定化酶；載體；回收率；酶學(xué)性質(zhì)

酸性蛋白酶（acid protease）是指具有較低最適pH值的蛋白酶，其最適pH值在2.5～5.0之間，在此酸性環(huán)境下將蛋白質(zhì)進(jìn)行水解，通過內(nèi)外酶切作用將蛋白質(zhì)水解為小肽和氨基酸［1］。酸性蛋白酶廣泛應(yīng)用于酒類、食醋及醬油的釀造等方面［2-8］。

游離態(tài)酶穩(wěn)定性較差、易失活、不能反復(fù)使用，通過固定化酶（immobilized enzyme）技術(shù)可以克服游離酶應(yīng)用的局限性，把酶束縛在一定空間中或水不溶性載體上，既能限制酶分子的自由流動，又能使酶發(fā)揮催化作用［9］。

海藻酸鈉（sodium alginate，SA）因其溫和的凝膠型和無毒性，使它成為最廣泛的固定化材料之一［10-12］。以SA作為固定化載體材料存在的缺點是其機(jī)械強(qiáng)度不夠大，這可以通過選擇適當(dāng)?shù)脑鲇矂﹣斫鉀Q［13］。阿拉伯膠、卡拉膠、黃原膠均具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、高內(nèi)聚力、高穩(wěn)定性、成膜性等優(yōu)點，廣泛運用于食品加工、醫(yī)藥等領(lǐng)域，與SA復(fù)合使用可以增加固定化載體的硬度。

目前已有將無機(jī)載體或SA等單一天然膠體作為固定化載體材料進(jìn)行固定化酸性蛋白酶研究的報道［14-17］，而將復(fù)合天然高分子膠體作為固定化酸性蛋白酶載體的研究則鮮有報道。本實驗使用SA分別與3 種天然高分子膠體復(fù)合制備固定化酶載體吸附酸性蛋白酶，研究復(fù)合凝膠濃度、凝膠比例、CaCl2濃度、固化時間、給酶量、吸附時間、酶液pH值等因素對復(fù)合膠體固定化酸性蛋白酶酶活回收率的影響。選擇出最優(yōu)載體進(jìn)行固定化酸性蛋白酶的制備，對固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行研究，擬為固定化酸性蛋白酶的實際應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

食品級酸性蛋白酶（酶活力100 000 U/g） 蘇柯漢生物工程有限公司；食品級海藻酸鈉 青島邁潮海洋科技發(fā)展有限公司；食品級阿拉伯膠 艾納提化工科技有限公司；食品級卡拉膠 福建省綠麒食品膠體有限公司；食品級黃原膠 淄博中軒生化有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1游離酸性蛋白酶活力的測定

酸性蛋白酶活力的測定采用Folin-酚法（GB/T 23527—2009《蛋白酶制劑》）。酸性蛋白酶活力定義為單位質(zhì)量的酸性蛋白酶在40 ℃、pH 3.0的條件下，1 min內(nèi)酶解酪蛋白產(chǎn)生1 μg酪氨酸為1 個酶活力單位（U）。

1.2.2固定化酸性蛋白酶活力的測定

取一定質(zhì)量的固定化酶測定其酶活力，測定方法與游離酸性蛋白酶的測定方法相同。

1.2.3相對酶活力及酶活回收率的計算

設(shè)定同組酶活力最高的相對酶活力為100%，以同組最高酶活力為參照，計算出的比值為相對酶活力。

酶活回收率是指固定化酶所測定的活力占加入酶液中酶的總活力的百分?jǐn)?shù)。

1.2.4固定化酸性蛋白酶的制備方法

以載體溶液總體積30 mL計，設(shè)定復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度1.8 g/100 mL，SA與各膠體質(zhì)量比為1∶1，稱取適量的阿拉伯膠、卡拉膠、黃原膠，分別和SA于60 ℃以下熱水中溶解，混合均勻，超聲波快速消泡至復(fù)合凝膠中無氣泡，使用10 mL注射器以約1滴/s的速率，將復(fù)合凝膠滴到質(zhì)量濃度為4.0 g/100 mL的CaCl2溶液中，在4 ℃冰箱中固化1.5 h，用紗布濾出載體顆粒，并用緩沖液沖洗3～5 次除去表面的CaCl2。用濾紙吸干表面水分，放入pH 3.0，給酶量1 760 U/g的酶液中進(jìn)行吸附，吸附0.5 h后用紗布濾出載體顆粒，用緩沖液清洗，并用濾紙吸干表面的水分。制成的球狀顆粒，即所得的固定化酶，在0～4 ℃條件下保存。

1.2.5酸性蛋白酶固定化條件的優(yōu)化設(shè)計

1.2.5.1單因素試驗

復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度對固定化酶活力的影響測定：復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度設(shè)定在0.6～2.8 g/100 mL，每隔0.2 g/100 mL進(jìn)行測定，其他因素按照1.2.4節(jié)方法制備固定化酶，測定其酶活力。

凝膠比例對固定化酶活力的影響測定：取復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度為各復(fù)合凝膠最適條件，海藻酸鈉與各膠體質(zhì)量比例設(shè)定為2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1，其他因素按照1.2.4節(jié)方法制備固定化酶，測定其酶活力。

CaCl2質(zhì)量濃度對固定化酶活力的影響測定：取各已測指標(biāo)的最適條件，CaCl2質(zhì)量濃度設(shè)定為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 g/100 mL，其他因素按照1.2.4節(jié)方法固定化制備酶，測定其酶活力。

固化時間對固定化酶活力的影響測定：取各已測指標(biāo)的最適條件，固化時間設(shè)定為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，其他因素按照1.2.4節(jié)方法制備固定化酶，測定其酶活力。

吸附時間對固定化酶活力的影響測定：取復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度、復(fù)合凝膠質(zhì)量比、CaCl2質(zhì)量濃度、固化時間最適條件，吸附時間設(shè)定為1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，其他因素按照1.2.4節(jié)方法制備固定化酶，測定其酶活力。

酶液pH值對固定化酶活力的影響：取復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度、復(fù)合凝膠質(zhì)量比、CaCl2質(zhì)量濃度、固化時間、吸附時間均為各復(fù)合凝膠最適條件，酶液pH值設(shè)定為2.5、3.0、3.5、4.0、4.5，其他因素按照1.2.4節(jié)方法制備固定化酶，測定其酶活力。

給酶量對固定化酶活力的影響測定：取復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度、復(fù)合凝膠質(zhì)量比、CaCl2質(zhì)量濃度、固化時間、吸附時間、酶液pH值最適條件，給酶量設(shè)定為1 100、1 320、1 540、1 760、1 980、2 200、2 420 U/g，按照1.2.4節(jié)方法制備固定化酶，測定其酶活力。

1.2.5.2正交試驗優(yōu)化固定化工藝

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選出對固定化過程影響較大的3 個因素，每個因素設(shè)定3 個水平，以酶活回收率作為評價指標(biāo)，采用L9（33）正交表對固定化條件進(jìn)行優(yōu)化試驗。

1.2.6固定化酸性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的研究

1.2.6.1固定化酶的最適反應(yīng)pH值測定

取一定量的固定化酶及游離酶，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%酪蛋白為底物，不同pH值緩沖液中，30 ℃保溫振蕩反應(yīng)10 min，測定其酶活力。

1.2.6.2固定化酶的最適作用溫度測定

取一定量的固定化酶及游離酶，以1%酪蛋白為底物，不同溫度條件下，pH 3.0緩沖液中保溫振蕩反應(yīng)10 min，測定其酶活力。

1.2.6.3固定化酶的熱穩(wěn)定性測定

取一定量的固定化酶及游離酶在無底物的條件下，pH 3.0的緩沖液中，在不同溫度條件下加熱處理30 min后，迅速冷卻。45 ℃條件下，測定其酶活力。

1.2.6.4固定化酶的動力學(xué)性質(zhì)

以米氏常數(shù)Km來表示。取一定量的固定化酶及游離酶，在不同底物質(zhì)量濃度條件下，于45 ℃、pH 3.0緩沖液中保溫振蕩反應(yīng)10 min，測定其酶活力，采用雙倒數(shù)作圖法計算米氏常數(shù)Km值。

1.2.7固定化酶操作半衰期的計算［18］

固定化酶的操作穩(wěn)定性是最影響使用的關(guān)鍵因素。固定化酶的操作穩(wěn)定性通常用半衰期表示，即固定化酶活力下降為初始酶活力一半所經(jīng)歷的連續(xù)工作時間。設(shè)定酶活力損失同時間成指數(shù)關(guān)系，半衰期公式可表達(dá)為：

式中：t1/2是操作半衰期時間/d；KD是衰減常數(shù)/d-1，其計算公式如下。

式中：t為測定時間/d；E為反應(yīng)初始時的酶活力/U；Et為反應(yīng)t時刻的酶活力/U。

2　結(jié)果與分析

2.1載體選擇及固定化條件單因素試驗結(jié)果

2.1.1復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度對固定化酶活力的影響

圖1　復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.1　Effect of total gel concentration on the activity of immobilized enzyme

由圖1可知，3 種載體固定化酶活力隨著復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度的增大均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，這是由于當(dāng)質(zhì)量濃度過大時載體表面孔隙緊密，不利于酶的吸附。質(zhì)量濃度為2.0 g/100 mL的SA-卡拉膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶酶活力最高。

2.1.2復(fù)合凝膠質(zhì)量比對固定化酶活力的影響

圖2　復(fù)合凝膠質(zhì)量比對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.2　Effect of SA to gum ratio on the activity of immobilized enzyme

由圖2可知，3 種載體固定化酶活力隨著復(fù)合凝膠質(zhì)量比的增大均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，質(zhì)量比例為4∶1的SA-卡拉膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶活力最高。

2.1.3CaCl2質(zhì)量濃度對固定化酶活力的影響

圖3　CaCl2質(zhì)量濃度對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.3　Effect of calcium chloride concentration on the activity of immobilized enzyme

由圖3可知，3 種載體固定化酶活力隨著CaCl2質(zhì)量濃度的增大均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，這是因為SA與CaCl2的作用是由離子強(qiáng)度所決定，離子強(qiáng)度越強(qiáng)，與SA的作用越明顯；但是當(dāng)強(qiáng)度過大時，蛋白酶的活力會受到離子強(qiáng)度的影響而降低。質(zhì)量濃度為4.0 g/100 mL的SA-黃原膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶活力最高。

2.1.4固化時間對固定化酶活力的影響

圖4　固化時間對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.4　Effect of immobilization time on the activity of immobilized enzyme

由圖4可知，固化時間對SA-阿拉伯膠、SA-黃原膠為載體的固定化酶活力影響較大，固化時間為2.5 h的SA-黃原膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶活力最高。

2.1.5吸附時間對固定化酶活力的影響

圖5　吸附時間對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.5　Effect of absorption time on the activity of immobilized enzyme

由圖5可知，吸附時間對SA-卡拉膠、SA-黃原膠為載體的2 種固定化酶活力影響較小，吸附時間為2.5 h的SA-黃原膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶活力最高。

2.1.6酶液pH值對固定化酶活力的影響

圖6　酶液pH值對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.6　Effect of enzyme solution pH on the activity of immobilized enzyme

由圖6可知，3 種載體固定化酶活力隨著酶液pH值的增大均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，酶液pH值為3.5的SA-黃原膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶活力最高。

2.1.7給酶量對固定化酶活力的影響

圖7　給酶量對固定化酸性蛋白酶活力的影響Fig.7　Effect of enzyme dosage on the activity of immobilized enzyme

由圖7可知，3 種載體固定化酶活力隨著給酶量的增大均呈現(xiàn)先增大后降低的趨勢，這是由于一定質(zhì)量的載體可吸附的酶量有限，當(dāng)載體的吸附酶量達(dá)到飽和后繼續(xù)增加給酶量反而會影響酶的繼續(xù)吸附效果。給酶量為2 200 U/g的SA-黃原膠復(fù)合凝膠制成的固定化酶活力最高。

2.1.8正交試驗優(yōu)化固定化工藝條件

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選出對固定化過程影響較大的3 個因素，每個因素設(shè)定3 個水平，以酶活回收率作為評價指標(biāo)，采用L9（33）正交表對固定化條件進(jìn)行優(yōu)化試驗。SA-阿拉伯膠正交試驗選擇因素為復(fù)合凝膠質(zhì)量比、CaCl2質(zhì)量濃度、固化時間，SA-卡拉膠正交試驗選擇因素為復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度、復(fù)合凝膠質(zhì)量比、CaCl2質(zhì)量濃度，SA-黃原膠正交試驗選擇因素為復(fù)合凝膠質(zhì)量比、CaCl2質(zhì)量濃度、固化時間。

表1　SA-阿拉伯膠固定化酶載體制備條件正交試驗優(yōu)化結(jié)果Table1　Results of orthogonal arra for optimizing the preparation of immobilized protease by SA and Arabic gels

表2　SA-卡拉膠固定化酶載體制備條件正交試驗優(yōu)化結(jié)果Table2　Results of orthogonal array design for optimizing the immobilization of acid protease with SA and carrageenan

由表1～3可知，在以酶活回收率為評價指標(biāo)時，3 種復(fù)合載體的固定化酶活回收率理論最優(yōu)水平分別為A1B2C2、D2A1B3、A3B3C2，影響因素的主次順序分別為B＞A＞C、D＞B＞A、C＞A＞B。3 種載體固定化酶的實際酶活回收率最優(yōu)水平分別為A1B2C2、D2A1B3、A3B2C3，以SA-阿拉伯膠、SA-卡拉膠為載體的固定化酶的理論優(yōu)水平與實際優(yōu)水平一致，其酶活回收率分別為65.34%、48.23%；以SA-黃原膠為載體的固定化酶的理論優(yōu)水平與實際優(yōu)水平不一致，因此，通過驗證實驗驗證理論最優(yōu)組合和實際最優(yōu)組合中最好的組合以確定最佳固定化條件，驗證實驗結(jié)果為理論最優(yōu)組合A3B3C2酶活回收率為74.12%，實際最優(yōu)組合A3B2C3酶活回收率為73.07%，確定SA-黃原膠的最佳固化條件為A3B3C2，其酶活回收率為74.12%。

表3　SA-黃原膠固定化酶載體制備條件正交試驗優(yōu)化結(jié)果Table3　Results of orthogonal array design for optimizing the immobilization of acid protease with SA and xanthan gum

綜上，SA-黃原膠的復(fù)合凝膠為3 種復(fù)合凝膠中固定化酸性蛋白酶的最佳載體，其酶活回收率最高。所以選擇SA-黃原膠復(fù)合凝膠為載體材料進(jìn)行酸性蛋白酶固定化的研究。

2.2SA-黃原膠為載體的固定化酸性蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)

2.2.1固定化酸性蛋白酶的最適反應(yīng)pH值

圖8　游離酶和固定化酶的最適pH值Fig.8　Optimum pH for free and immobilized enzymes

由圖8可知，pH值對固定化酸性蛋白酶及游離酶活性均有較大影響，兩者的活力均隨著pH值的升高呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢，在pH 3.0時達(dá)到最大值。

2.2.2固定化酸性蛋白酶的最適作用溫度

由圖9可知，溫度對酸性蛋白酶的活力有著顯著影響。隨著溫度的升高，酸性蛋白酶活力隨之增加，但是溫度的不斷升高亦會使酶蛋白逐漸變性，導(dǎo)致酶活力下降。在溫度為45 ℃時，游離酶與固定化酶活力均達(dá)到最高，且固定化酶相對活力略高于游離酶。

圖9　游離酶和固定化酶的最適作用溫度Fig.9　Optimum temperature for free and immobilized enzymes

2.2.3固定化酸性蛋白酶的熱穩(wěn)定性

圖10　游離酶和固定化酶的熱穩(wěn)定性Fig.10　Thermal stability of free and immobilized enzymes

由圖10可知，在低于40 ℃時，兩種酶的相對活力下降低為緩慢，高于40 ℃后兩種酶活力降低較為明顯，而固定化酶活力降低較游離酶緩慢，表明固定化酸性蛋白酶的熱穩(wěn)定性明顯高于游離酶。

2.2.4固定化酸性蛋白酶的動力學(xué)性質(zhì)

圖11　游離酶和固定化酶的Lineweaver-Burk曲線Fig.11　Line weaver-Burk plots for free and immobilized enzymes

由圖11可知，固定化酶Km值為18.93 mg/mL，大于游離酶Km值（9.98 mg/mL），表明固定化酶的底物親和力小于游離酶。

2.2.5固定化酶的操作半衰期

操作半衰期是評價固定化酶是否具有實用性的重要指標(biāo)，稱取適量固定化酶測其初始酶活力，同時稱取相同質(zhì)量的固定化酶，以1%酪蛋白為底物進(jìn)行反應(yīng)，做2 組重復(fù)，每隔2 d進(jìn)行一次測定，根據(jù)1.2.7節(jié)計算該固定化酶的操作半衰期為17.28 d。

固定化酶在經(jīng)過使用后，酶活力有所下降，這是因為酶經(jīng)過幾次使用后，某些酶與載體連接不夠緊密，固定在載體表面的酶有部分脫落，但相對游離酶只能使用一次而言，固定化酶的使用效率明顯提高。

3　結(jié)論與討論

目前，將固定化技術(shù)應(yīng)用于酸性蛋白酶的研究報道并不多見。Ganesh Kumar等［14］用無機(jī)載體活性炭進(jìn)行酸性蛋白酶的固定化實驗。趙贛［15］、賈莉［16］等使用包埋法將酸性蛋白酶進(jìn)行固定，苗敬芝等［17］使用包埋-交聯(lián)法將酸性蛋白酶與木瓜蛋白酶進(jìn)行共固定。蛋白質(zhì)屬于大分子物質(zhì)，而使用包埋法制備的固定化酶載體會影響酶與大分子底物的接觸效果，所以經(jīng)包埋法所制成的固定化蛋白酶很難對底物蛋白質(zhì)起到較好作用［18-19］。本實驗選用吸附法進(jìn)行酸性蛋白酶的固定化實驗，所制得的固定化酸性蛋白酶酶活回收率高于包埋法。

本實驗采用的是物理吸附法，而任琦［20］研究磁性微球吸附牛血清蛋白時得出化學(xué)法吸附的PMMA-co-PGMA-CHO微球相較物理方法吸附的PSt-co-PAMPS微球吸附量更大且對蛋白質(zhì)的影響更小的結(jié)論，因此，可以選擇化學(xué)吸附法對酸性蛋白酶進(jìn)行進(jìn)一步固定化研究。此外，對傳統(tǒng)吸附法進(jìn)行部分改進(jìn)或者將吸附法與其他傳統(tǒng)方法進(jìn)行聯(lián)合使用也是固定化蛋白酶方法的發(fā)展趨勢［21］。

本實驗的載體選擇了3 種天然膠體即阿拉伯膠、卡拉膠、黃原膠與SA混合進(jìn)行復(fù)合凝膠的制備，而每種膠體的物理特性都會有很大差異，因此3 種膠體可能具有一定局限性，在以后的酸性蛋白酶固定化實驗研究中可以選擇更多更廣的食品級天然膠體與SA進(jìn)行復(fù)合凝膠的制備來選擇最佳固定化酸性蛋白酶的載體。

酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，其性質(zhì)取決于酶蛋白本身特有的高級結(jié)構(gòu)和活性中心基團(tuán)。固定化過程中所涉及的物理、化學(xué)、生物因素以及載體本身都可能引起酶活性中心基團(tuán)的改變。同時載體的存在也會產(chǎn)生一定的空間位阻和屏蔽作用，這些都有利于酶分子抵御外界環(huán)境的變化，因此經(jīng)固定化處理的酶穩(wěn)定性通常會較游離酶有所提高［22-23］。

本實驗結(jié)果表明，以SA-黃原膠為復(fù)合載體所制備的固定化酸性蛋白酶相對酶活力最大，為最佳固定化載體材料。其最佳工藝條件為：復(fù)合凝膠質(zhì)量濃度為2.0 g/100 mL、SA與黃原膠質(zhì)量比例為6∶1、CaCl2質(zhì)量濃度5.0 g/100 mL、固定化時間為2.5 h、吸附時間為2.5 h、酶液pH值為3.5、給酶量2 200 U/g。

固定化酸性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的研究結(jié)果表明：固定化酶的最適pH值為3.0，最適溫度為45 ℃，其熱穩(wěn)定性明顯優(yōu)于游離酶，操作半衰期為17.28 d。通過擴(kuò)大實驗可以把固定化酸性蛋白酶應(yīng)用于酒類、食醋及醬油的釀造等方面。

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Carrier Screening for and Properties of Immobilized Acid Protease

WANG Mian， WANG Rufu*， ZHANG Qian
（College of Food Science and Engineering， Shanxi Agricultural University， Taigu 030801， China）

The activity of acid protease immobilized in different composite gel carriers made from sodium alginate （SA）combined separately with three natural polymers was measured to select the best immobilization carrier and conditions using single factor experiments and orthogonal array design. The results showed that the best carrier was composed of SA and xanthan gum and the best immobilization conditions were determined as follows： CaCl2concentration，5.0 g/100 mL， SA to xanthan gum ratio， 6：1， and immobilization time， 2.5 h. Experiments conducted under these conditions gave an activity recovery of 74.12%. The enzymatic properties of immobilized protease indicated there was no variation in optimum pH and optimum temperature when compared with the free enzyme. Compared with the free enzyme， thermal stability of immobilized acid protease was enhanced， and the kinetic parameter Kmwas improved. The half-life of the immobilized protease was 17.28 d.

acid protease； immobilized enzyme； carrier； recovery； enzymatic property

Q814

A

1002-6630（2015）13-0089-06

10.7506/spkx1002-6630-201513018

2014-09-27

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（863計劃）項目（2011AA10090401）；山西省科技攻關(guān)項目（20110311042-3；20130311030-2）

王冕（1990—），女，碩士研究生，研究方向為發(fā)酵食品工藝、果蔬采后生理及貯運技術(shù)。E-mail：wmbei jing1990@163.com

王如福（1960—），男，教授，博士，研究方向為發(fā)酵食品工藝、果蔬采后生理及貯運技術(shù)。E-mail：wrf558@126.com