夏　娜，陳義磊，陶海燕，木合塔爾·吐?tīng)柡?

（喀什大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，葉爾羌綠洲生態(tài)與生物資源研究高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 喀什 844000）

藥桑多糖對(duì)四氯化碳所致大鼠肝損傷的保護(hù)作用

夏娜，陳義磊，陶海燕，木合塔爾·吐?tīng)柡?

（喀什大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，葉爾羌綠洲生態(tài)與生物資源研究高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 喀什 844000）

目的：研究藥桑多糖對(duì)四氯化碳（CCl4）所致大鼠肝損傷的保護(hù)作用。方法：取健康Sprague-Dawley（SD）大鼠40 只，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組：對(duì)照組、CCl4損傷組、藥桑多糖低（50 mg/（kg·d））、中（100 mg/（kg·d））、高（200 mg/（kg·d））劑量組，每組8 只，連續(xù)灌胃7 d后，除對(duì)照組外，其余各組大鼠腹腔注射CCl4橄欖油溶液制造肝損傷模型。24 h后，取血清測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）活力以及膽紅素含量，取各器官計(jì)算臟器指數(shù)并測(cè)定肝臟超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathion peroxidase，GSH-Px）活力，以及丙二醛（malondialdehyde，MDA）、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）含量，并對(duì)肝臟進(jìn)行組織切片觀察。結(jié)果：100、200 mg/（kg·d）劑量的藥桑多糖能顯著增加大鼠體質(zhì)量（P＜0.05），降低肝臟指數(shù)（P＜0.05）、腎臟指數(shù)（P＜0.05）和脾臟指數(shù)（P＜0.01），能顯著抑制CCl4所致肝損傷大鼠血清ALT、AST活力和膽紅素含量的升高（P＜0.05）；肝臟MDA、IFN-γ、TNF-α含量顯著降低（P＜0.05），SOD、CAT、GSH-Px活力以及IL-10含量顯著升高（P＜0.05）。50 mg/（kg·d）劑量的藥桑多糖能顯著降低肝損傷大鼠的肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)和脾臟指數(shù)（P＜0.05），顯著增加肝臟GSH-Px活力和IL-10含量（P＜0.05），降低肝臟TNF-α含量（P＜0.05）。結(jié)論：藥桑多糖對(duì)CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝損傷具有明顯的保護(hù)作用，其肝臟保護(hù)作用與提高肝臟抗氧化能力及抑制肝臟炎癥有關(guān)。

藥桑多糖；肝保護(hù)作用；抗氧化活性；四氯化碳

藥桑屬半栽培半野生資源，在植物分類學(xué)上屬?？粕俸谏７N（Morus nigra Linn.），原產(chǎn)于伊朗，16世紀(jì)在我國(guó)新疆等地開(kāi)始栽培，是我國(guó)唯一的黑桑品種，也是自然界極為罕見(jiàn)的珍稀藥用果桑資源。在我國(guó)，藥桑一直被維吾爾族作為民間藥材，用以治療急慢性扁桃體炎、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、咽喉腫痛等疾?。?］。在藏藥中被稱為“桑孜那?！?，收載于《四部醫(yī)典》、《晶珠本草》等藏醫(yī)藥經(jīng)典著作中［2］。目前對(duì)藥桑的研究主要集中在對(duì)其有效成分的分離與提取及體外自由基清除方面，關(guān)于其有效成分生理功能的研究報(bào)道較為少見(jiàn)［3-7］。路國(guó)兵等［8］研究發(fā)現(xiàn)藥桑果實(shí)多糖具有降血糖作用，裴凌鵬等［9］研究認(rèn)為藥?？傸S酮對(duì)糖尿病大鼠骨質(zhì)具有影響。據(jù)《維吾爾藥志》［10］記載，藥桑果實(shí)具有潤(rùn)肝、明目等功能，暗示藥?？赡軐?duì)肝臟具有保護(hù)作用，然而目前關(guān)于藥桑對(duì)肝臟的保護(hù)作用卻知之甚少。

肝臟是機(jī)體重要的代謝器官，是化學(xué)毒物或藥物在體內(nèi)代謝或轉(zhuǎn)化的重要場(chǎng)所，因此肝臟極易受到各外源性物質(zhì)的攻擊，從而引發(fā)急性或慢性損傷［11］。肝臟疾病已成為人類最常見(jiàn)的疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類健康，據(jù)國(guó)內(nèi)外多家醫(yī)院統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)［12］顯示，每年因肝損傷住院的患者占急性肝炎患者的10%，且呈逐年上升的趨勢(shì)。因而研究抗肝臟疾病的有效功能性食物成分或藥物顯得尤為重要，以無(wú)或少毒副作用角度出發(fā)，從植物中提取天然性成分成為肝臟保護(hù)作用研究的熱點(diǎn)。眾多研究［13-15］表明，多糖類化合物對(duì)化學(xué)性、藥物性、酒精性等不同類型的肝損傷具有不同程度的保護(hù)作用。前人研究結(jié)果顯示，藥桑果實(shí)多糖能提高糖尿病小鼠肝臟的抗氧化能力［8］，據(jù)此提出藥桑果實(shí)多糖是否具有肝臟保護(hù)作用的疑問(wèn)。因此，本實(shí)驗(yàn)擬以CCl4誘導(dǎo)大鼠肝損傷模型為對(duì)象，研究和探討藥桑果實(shí)多糖對(duì)大鼠肝損傷的保護(hù)作用，以期為藥桑功能性食品的開(kāi)發(fā)以及應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料、動(dòng)物與試劑

藥桑采摘于新疆喀什市，其果實(shí)多糖由本實(shí)驗(yàn)室制備，于冰箱中4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

SPF級(jí)雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量（200±20） g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，室溫條件下常規(guī)飼養(yǎng)。

蘆丁 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）試劑盒、總膽紅素試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathion peroxidase，GSH-Px）試劑盒、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）試劑盒 南京建成生物科技有限公司；腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）試劑盒、干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）試劑盒、白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）試劑盒 武漢博士德生物工程有限公司；硝酸鋁、CCl4、二甲苯、無(wú)水乙醇等均為分析純。

1.2儀器與設(shè)備

5418冷凍離心機(jī) 德國(guó)艾本德股份公司；722型可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；真空冷凍干燥系統(tǒng) 北京亞泰隆科技儀器有限公司。

1.3藥桑多糖的提取與多糖含量測(cè)定

1.3.1藥桑多糖的提取

藥桑采摘后，將原料洗凈、晾干，80 ℃烘干3 h，粉碎后過(guò)35 目篩，制成藥桑干粉。藥桑多糖提取工藝流程：藥桑干粉→80%乙醇浸泡12 h→濾渣中加入蒸餾水→95 ℃水浴攪拌提取5 h→取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮→脫色→除蛋白質(zhì)→乙醇沉淀→脫水→冷凍干燥→藥桑多糖粉。

1.3.2粗多糖含量的測(cè)定

采用苯酚-硫酸法［16］對(duì)提取的多糖定量，以葡萄糖當(dāng)量表示。準(zhǔn)確稱取葡萄糖10.0 mg，蒸餾水溶解并定容至100 mL，配制成0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。吸取0～1.2 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液分別置于10 mL比色管中，用蒸餾水補(bǔ)至2.0 mL，加入1.0 mL體積分?jǐn)?shù)6%的苯酚試劑，混勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，混勻后放置10 min，于沸水浴中加熱15 min，取出冷卻至室溫，以試劑為空白參比液，490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程。取一定量的藥桑多糖溶液，按上述方法測(cè)定其吸光度并按照回歸方程計(jì)算其粗多糖含量。

1.4動(dòng)物分組與飼養(yǎng)

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，每組8 只：對(duì)照組（灌胃等量蒸餾水），CCl4損傷組（灌胃等量蒸餾水），藥桑多糖低（50 mg/（kg·d））、中（100 mg/（kg·d））、高（200 mg/（kg·d））劑量組。受試樣品用蒸餾水溶解配制，每天上午9：00—10：00灌胃1 次，連續(xù)灌胃7 d。末次灌胃2 h后，對(duì)照組大鼠腹腔注射2 mL橄欖油，其余各組大鼠一次性腹腔注射1 g/100 mL的CCl4橄欖油溶液2 mL，建立大鼠肝損傷模型。實(shí)驗(yàn)期間，所有動(dòng)物供給全價(jià)顆粒飼料，自由飲水。24 h后，對(duì)大鼠摘眼球取血，分離血清，同時(shí)分離肝臟、腎臟及脾臟并稱質(zhì)量。

1.5指標(biāo)檢測(cè)與方法

1.5.1臟器指數(shù)的測(cè)定

將大鼠處死后，剖腹采集肝臟、腎臟及脾臟，分別稱質(zhì)量，并按照下式計(jì)算各器官的臟器指數(shù)。

1.5.2肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察

取大鼠肝右葉組織置于體積分?jǐn)?shù)10%的中性甲醛溶液中固定，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織的形態(tài)學(xué)變化。

1.5.3血清ALT和AST活力以及膽紅素含量的測(cè)定

血清ALT和AST活力，以及膽紅素含量均采用分光光度法測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.4肝臟組織SOD、CAT、GSH-Px活力及MDA含量的測(cè)定

取大鼠肝臟組織準(zhǔn)確稱質(zhì)量，生理鹽水勻漿，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的肝臟組織勻漿液，于4 ℃、3 000 r/min離心10 min，取上清液于-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩８闻K組織SOD、CAT、GSH-Px活力及MDA含量的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書方法進(jìn)行。

1.5.5肝臟組織中TNF-α、IFN-γ及IL-10含量的測(cè)定

采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的肝臟組織勻漿液中TNF-α、IFN-γ和IL-10的含量，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書方法操作，于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定樣品吸光度。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2　結(jié)果與分析

2.1藥桑多糖中的粗多糖含量

由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程y=0.008 9x-0.057 3（R2= 0.999 2），其中x為樣品中藥桑粗多糖含量，y為吸光度。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)得藥桑多糖樣品中粗多糖含量為60.13%。

2.2藥桑多糖對(duì)CCl4所致肝損傷大鼠體質(zhì)量、組織質(zhì)量的影響

表1　藥桑多糖對(duì)CCll4所致肝損傷大鼠的體質(zhì)量和組織質(zhì)量的影響Table1　Effect off Morusniiggrraa Linn. fruit polysaccharides on body weights and tissue weights in rats with CCl4-induced liver injury y（x ±s，n=8）

表1　藥桑多糖對(duì)CCll4所致肝損傷大鼠的體質(zhì)量和組織質(zhì)量的影響Table1　Effect off Morusniiggrraa Linn. fruit polysaccharides on body weights and tissue weights in rats with CCl4-induced liver injury y（x ±s，n=8）

注：**. 與對(duì)照組相比，差異極顯著（P＜0.01）；#. 與CCl4損傷組相比，差異顯著（P＜0.05）；##. 與CCl4損傷組相比，差異極顯著（P＜0.01）。下同。

指標(biāo)初始體質(zhì)量/g末體質(zhì)量/g肝臟指數(shù)/%腎臟指數(shù)/%脾臟指數(shù)/%對(duì)照組205.50±10.69238.50±15.122.82±0.140.64±0.030.32±0.03 CCl4損傷組207.17±12.42215.33±12.50**3.41±0.31**0.71±0.04**0.43±0.04**藥桑多糖低劑量組209.00±9.78220.83±11.213.04±0.25#0.67±0.03#0.38±0.04#藥桑多糖中劑量組205.33±9.37233.00±14.95#3.10±0.28#0.65±0.03#0.35±0.04##藥桑多糖高劑量組205.83±8.21235.17±12.05#2.87±0.24#0.66±0.04#0.35±0.02##

由表1可知，與對(duì)照組相比，CCl4損傷組大鼠末體質(zhì)量極顯著降低（P＜0.01），肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)及脾臟指數(shù)極顯著升高（P＜0.01）。不同劑量的藥桑多糖對(duì)CCl4所致肝損傷大鼠的體質(zhì)量降低，肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)及脾臟指數(shù)的增加均有不同程度的緩解作用。相對(duì)于CCl4損傷組，藥桑多糖低劑量組大鼠的肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)和脾臟指數(shù)顯著降低（P＜0.05），給予中、高劑量的藥桑多糖干預(yù)后，大鼠末體質(zhì)量顯著增加（P＜0.05），肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)和脾臟指數(shù)均顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。

2.3藥桑多糖對(duì)CCl4所致肝臟損傷大鼠血清AST、ALT活力以及膽紅素含量的影響

表2　藥桑多糖對(duì)大鼠血清AST、ALT活性和膽紅素含量的影響Table2　Effect of Morus nigra Linn. fruit polysaccharides on serum AST and ALT activities and bilirubin contents in rats with CCl -induced liver injury

表2　藥桑多糖對(duì)大鼠血清AST、ALT活性和膽紅素含量的影響Table2　Effect of Morus nigra Linn. fruit polysaccharides on serum AST and ALT activities and bilirubin contents in rats with CCl -induced liver injury

注：*. 與對(duì)照組相比，差異顯著（P＜0.05）。下同。

膽紅素含量/（mg/dL）對(duì)照組173.30±21.2959.67±9.290.51±0.09 CCl4損傷組208.17±23.03*83.94±10.60**0.72±0.08*藥桑多糖低劑量組198.50±21.0776.00±12.200.68±0.09藥桑多糖中劑量組180.17±22.05#70.87±6.50#0.61±0.10#藥桑多糖高劑量組169.17±18.95#59.83±9.58#0.57±0.09#指標(biāo)AST活力/（U/L）ALT活力/（U/L）

由表2可知，CCl4損傷組大鼠的血清AST、ALT活力和膽紅素含量明顯高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），說(shuō)明CCl4對(duì)大鼠的肝臟造成了損傷，大鼠肝損傷模型建立成功。與CCl4損傷組相比，藥桑多糖中、高劑量組大鼠的AST、ALT活力及膽紅素含量均顯著降低（P＜0.05），藥桑多糖低劑量組大鼠的血清各項(xiàng)指標(biāo)與CCl4損傷組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05），以上結(jié)果表明藥桑多糖對(duì)CCl4所致的大鼠肝損傷具有一定保護(hù)作用，且與其劑量有一定關(guān)系。

2.4藥桑多糖對(duì)CCl4所致肝損傷大鼠肝臟組織形態(tài)的影響

圖1　藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟組織形態(tài)的影響（×20000）Fig.1　Effect of Morus nigra Linn. fruit polysaccharides on histological change of liver in rats （× 200）

如圖1所示，對(duì)照組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索明顯，無(wú)變性壞死、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維組織增生（圖1A）。CCl4損傷組大鼠肝索排列紊亂，中央靜脈周圍出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及肝細(xì)胞壞死、肝細(xì)胞腫脹、肝竇變窄，出現(xiàn)脂肪樣病變（圖1B）。藥桑多糖低劑量組大鼠肝索排列整齊，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和脂肪樣病變程度降低（圖1C），藥桑多糖中、高劑量組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)明顯好轉(zhuǎn)，趨向正常形態(tài)（圖1D、1E）。

2.5藥桑多糖對(duì)CCl4所致肝損傷大鼠肝臟抗氧化能力的影響

表3　藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟抗氧化能力的影響（xTable3　Effect off Morus niiggrraa Linn. fruit polysaccharides on liver antioxidant ability in rats with CCl4-induced liver injuryy

表3　藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟抗氧化能力的影響（xTable3　Effect off Morus niiggrraa Linn. fruit polysaccharides on liver antioxidant ability in rats with CCl4-induced liver injuryy

MDA含量/（nmol/mg pro）對(duì)照組188.67±21.2136.88±6.67270.55±20.071.66±0.19 CCl4損傷組146.28±19.64**30.64±4.27*227.94±25.69*2.32±0.58*藥桑多糖低劑量組153.47±18.7333.72±3.11254.76±16.44#2.20±0.26藥桑多糖中劑量組172.39±19.10#37.77±3.78#262.48±20.75#1.83±0.38#藥桑多糖高劑量組180.96±21.26#39.47±4.46#260.17±25.45#1.78±0.31#指標(biāo)SOD活力/（U/mg pro）CAT活力/（U/mg pro）GSH-Px活力/（U/mg pro）

氧化應(yīng)激是CCl4造成肝臟損傷的重要因素，由表3可知，相對(duì)于對(duì)照組，CCl4損傷組大鼠SOD、CAT和GSH-Px活力極顯著或顯著降低（P＜0.01或P＜0.05），MDA的含量顯著升高（P＜0.05）。與CCl4損傷組相比，藥桑多糖低劑量組大鼠的GSH-Px活力顯著升高（P＜0.05）；與CCl4損傷組相比，藥桑中、高劑量組大鼠的SOD、CAT和GSH-Px活力顯著升高（P＜0.05），MDA含量顯著降低（P＜0.05）。由此可見(jiàn)，藥桑多糖能提高CCl4所致肝損傷大鼠肝臟的抗氧化能力。

2.6藥桑多糖對(duì)CCl4所致肝損傷大鼠肝臟細(xì)胞因子含量的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，CCl4損傷組大鼠肝臟TNF-α和IFN-γ含量顯著或極顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），IL-10含量顯著降低（P＜0.05）。與CCl4損傷組相比，藥桑多糖低劑量組大鼠肝臟TNF-α含量顯著降低（P＜0.05），IL-10含量顯著升高（P＜0.05）；藥桑多糖中、高劑量組大鼠肝臟TNF-α和IFN-γ含量顯著降低（P＜0.05），IL-10含量顯著升高（P＜0.05）。

表4　藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞因子的影響（xTable4　Effect off Morus niiggrraa Linn. fruit polysaccharides on liver cytokines in rats with CCll 4-induced liver injury

表4　藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞因子的影響（xTable4　Effect off Morus niiggrraa Linn. fruit polysaccharides on liver cytokines in rats with CCll 4-induced liver injury

IL-10含量/（ng/L）對(duì)照組279.84±16.10894.28±105.8070.51±9.67 CCl4損傷組334.19±32.68**1 042.84±110.28*56.42±8.36*藥桑多糖低劑量組304.74±22.49#974.28±82.6066.91±8.40#藥桑多糖中劑量組294.15±19.59#918.68±77.28#68.73±8.27#藥桑多糖高劑量組259.06±17.09#884.44±108.27#72.52±5.71#指標(biāo)TNF-α含量/（ng/L）IFN-γ含量/（ng/L）

3　討 論

肝臟是機(jī)體重要的代謝器官，它在糖類、脂類及蛋白質(zhì)代謝過(guò)程中起著重要作用，同時(shí)肝臟還具有分泌、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能。當(dāng)肝臟出現(xiàn)損傷時(shí)，機(jī)體的物質(zhì)代謝將發(fā)生紊亂，并影響其他器官的功能，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)＜吧?/p>

CCl4被認(rèn)為是一種典型的化學(xué)性肝損傷誘導(dǎo)劑，研究表明其誘導(dǎo)的肝損傷所表現(xiàn)的癥狀和肝臟病理改變特征等與病毒性肝炎具有相似性［17-18］。CCl4在肝細(xì)胞色素P450氧化酶作用下，生成CCl3·和Cl·，造成細(xì)胞膜系統(tǒng)的氯烷化和脂質(zhì)過(guò)氧化，繼而引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的改變，導(dǎo)致肝細(xì)胞損害［19］。本實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射CCl4建立大鼠肝損傷模型，肝臟病理學(xué)檢測(cè)表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹，伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性，同時(shí)血清學(xué)檢測(cè)到AST和ALT活性升高以及膽紅素含量升高，說(shuō)明成功地制造了大鼠肝損傷模型。

肝臟損傷常常伴隨血清ALT和AST活性升高以及膽紅素含量的升高。ALT和AST是存在于肝細(xì)胞胞漿和線粒體中的轉(zhuǎn)氨酶，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，ALT和AST即從肝細(xì)胞內(nèi)滲漏入血液，血清中AST和ALT活性即升高［20］。本實(shí)驗(yàn)及前人研究結(jié)果均顯示CCl4引起血清AST和ALT活性升高，以及膽紅素水平的升高［21］。然而在給予藥桑多糖（低劑量除外）后，大鼠血清AST和ALT的活性以及膽紅素的含量均明顯降低，這一結(jié)果說(shuō)明藥桑多糖能緩解CCl4所致的肝臟損傷。這一結(jié)果同時(shí)被肝臟組織的病理學(xué)觀察所佐證。給予藥桑多糖后，大鼠肝細(xì)胞無(wú)大量壞死，肝小葉內(nèi)僅偶爾可見(jiàn)壞死小灶，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肝細(xì)胞腫脹及脂肪變性程度降低，其中藥桑多糖中、高劑量組比低劑量組效果好。

藥桑多糖提高了CCl4所致肝損傷大鼠肝臟的抗氧化能力，且效果隨著其劑量的增加而增強(qiáng)。SOD、CAT和GSH-Px是組成生物體體內(nèi)酶促防御體系重要的抗氧化酶，它們能有效地清除活性氧自由基并終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，當(dāng)抗氧化酶的活力降低時(shí)，會(huì)引起機(jī)體自由基清除障礙，導(dǎo)致自由基過(guò)度累積，引起細(xì)胞膜完整性和功能的喪失［22-23］。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，其含量的變化可反映肝細(xì)胞的損傷程度［24］。在本實(shí)驗(yàn)中，與CCl4損傷組相比，藥桑多糖中、高劑量組大鼠肝臟SOD、CAT和GSH-Px活力顯著升高，MDA含量顯著降低，低劑量的藥桑多糖僅顯著提高了大鼠肝臟GSH-Px活力。該結(jié)果說(shuō)明藥桑多糖能提高大鼠肝臟抗氧化能力，并呈量效關(guān)系。

藥桑多糖緩解了CCl4損傷造成的大鼠肝臟炎癥。TNF-α是一種多功能的促炎性細(xì)胞因子，它能刺激一系列促炎性物質(zhì)，如IL-1、IL-6、NO、巨噬細(xì)胞趨化蛋白1等的產(chǎn)生，因此TNF-α在誘導(dǎo)肝臟炎癥和引起肝臟損傷過(guò)程中發(fā)揮重要作用［25-26］。IFN-γ是一類Th1型細(xì)胞因子，CCl4介導(dǎo)的肝損傷將引起其表達(dá)量的上升［27］。IL-10是常見(jiàn)的抗炎因子，IL-10含量的增加將會(huì)引起TNF-α和IFN-γ等促炎性細(xì)胞因子分泌的減少，研究認(rèn)為IL-10可以保護(hù)CCl4所致的急性及慢性肝損傷［27-28］。因此，降低促炎性細(xì)胞因子（如TNF-α和IFN-γ）表達(dá)，提高抗炎性細(xì)胞因子（如IL-10）表達(dá)能緩解CCl4造成的肝臟炎癥。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，中、高劑量的藥桑多糖顯著降低了大鼠肝臟TNF-α和IFN-γ含量，增加了IL-10含量，藥桑多糖低劑量組大鼠肝臟TNF-α含量顯著降低（P＜0.05），IL-10含量顯著升高（P＜0.05）。該結(jié)果顯示藥桑多糖具有降低肝臟炎癥的作用，且抗炎效果與其劑量有一定相關(guān)性。

綜合以上研究結(jié)果，無(wú)論肝臟的生化指標(biāo)檢測(cè)還是病理學(xué)觀察均表明藥桑多糖對(duì)CCl4所致的大鼠肝損傷具有保護(hù)作用，其中中、高劑量的藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟的保護(hù)作用較低劑量組更好，說(shuō)明藥桑多糖對(duì)大鼠肝臟的保護(hù)作用與其劑量有一定相關(guān)性。藥桑多糖對(duì)大鼠肝損傷的保護(hù)作用與其提高肝臟抗氧化能力以及抑制肝臟炎癥相關(guān)。

［1］ 新疆吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)廳， 新疆吾爾自治區(qū)蠶學(xué)會(huì)， 新疆吾爾自治區(qū)和田蠶?？茖W(xué)研究所. 新疆桑樹(shù)品種資源志［M］. 烏魯木齊： 新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)業(yè)廳， 1980： 3-7.

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Protective Effect of Polysaccharides from Morus nigra Linn. Fruits on CCl4-Induced Liver Damage in Rats

XIA Na， CHEN Yilei， TAO Haiyan， Muhetaer·TUERHONG*
（Key Laboratory of Ecology and Biological Resources in Yarkand Oasis at Colleges and Universities under the Department of Education of Xinjiang Uygur Autonomous Region， College of Chemistry and Environmental Science， Kashgar University， Kashgar 844000， China）

Objective： To study the hepatoprotective effect of polysaccharides from Morus nigra Linn. fruits （MNP） on CCl4-induced liver damage in rats. Methods： Totally 40 healthy SD rats were randomized into 5 groups with 8 animals in each group： normal group， CCl4-injury group， and three different treatment groups with different doses of MNP （50， 100，200 mg/（kg·d））. After 7 days of intragastric administration， all rats except for the normal group were subjected to intraperitoneal injection of CCl4. After 24 hours， rat serum was collected for analyzing the activity of alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST）， and the content of bilirubin. Liver tissues were harvested for measuring the activities of superoxide dismutase （SOD）， catalase （CAT） and glutathion peroxidase （GSH-Px）， and the contents of malondialdehyde （MDA）， interferon-γ （IFN-γ）， tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-10 （IL-10）. Results： Compared with the CCl4-injury group， the treatment groups with 100 and 200 mg/（kg·d） of MNP revealed a significant decrease in body weight （P ＜ 0.05）， liver index （P ＜ 0.05）， kidney index （P ＜ 0.05） and spleen index （P ＜ 0.01）；serum ALT and AST activities （P ＜ 0.05） and bilirubin content （P ＜ 0.05）； and the contents of MDA， IFN-γ and TNF-α（P ＜ 0.05） in liver， while the activities of liver SOD， CAT， and GSH-Px and IL-10 contentwere significantly increased （P ＜ 0.05）. The administration with 50 mg/（kg·d） of MNP could result in a significant decrease in liver， kidney and spleen indexes （P ＜ 0.05），GSH-Px activity （P ＜ 0.05）， IL-10 content （P ＜ 0.05） in liver， and TNF-α content （P ＜ 0.05） in liver. Conclusion： Polysaccharides from Morus nigra Linn. fruits can attenuate CCl4-injduced liver injury in rats， and the underlying mechanism may be due to its antioxidant and anti-inflammatory effects.

Morus nigra Linn. polysaccharide； hepatoprotective effect； antioxidant activity； carbon tetrachloride

TS218

A

1002-6630（2015）13-0247-05

10.7506/spkx1002-6630-201513046

2014-08-11

新疆維吾爾自治區(qū)高校科研計(jì)劃青年教師科研培育基金項(xiàng)目（XJEDU2014S054）

夏娜（1985—），女，講師，碩士，主要從事食品加工原理與技術(shù)研究。E-mail：conniexn@126.com

木合塔爾·吐?tīng)柡椋?961—），男，教授，本科，主要從事分析化學(xué)、儀器分析研究。E-mail：2673134206@qq.com