王黎洲，李興，宋杰，蔣天鵬，吳曉萍，周石

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因型對(duì)介入化療栓塞治療原發(fā)性肝癌預(yù)后的評(píng)估

王黎洲，李興，宋杰，蔣天鵬，吳曉萍，周石

目的通過檢測(cè)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的基因類型，探討不同類型基因與原發(fā)性肝癌（HCC）患者TACE術(shù)后生存率的關(guān)系。方法通過384孔板DNA提取試劑盒檢測(cè)2007年1月到2008年1月156例經(jīng)過病理確診2個(gè)月內(nèi)接受TACE治療HCC患者的VEGF基因型并收集所有患者的臨床資料，分析不同基因類型與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果本研究共檢測(cè)出VEGF-2578C/A，VEGF-1154G/A，VEGF-634C/G和VEGF-1498T/C 4種基因型，患者的5年生存率為55.47%。經(jīng)多變量分析顯示，腫瘤分期（TMN）、癌灶轉(zhuǎn)移、VEGF-2578 AA和VEGF-1154 AA基因型是獨(dú)立預(yù)后因素。肝癌TMN分期為Ⅲ至Ⅳ期將極大增加肝癌患者死亡風(fēng)險(xiǎn)（HR=3.64，95%，CI=1.67-6.79；HR=2.91，CI=1.30-6.27）。然而VEGF-2578 AA和VEGF-1154 AA基因類型患者相比野生基因類型死亡風(fēng)險(xiǎn)更高（HR=3.65，95%CI= 1.35-11.13；HR=7.13，95%CI=1.46-65.8）。結(jié)論VEGF-2578C/A和VEGF-1154G/A基因類型與接受TACE治療的原發(fā)性肝癌患者預(yù)后密切相關(guān)，可能對(duì)預(yù)測(cè)介入治療HCC的預(yù)后有一定幫助。

臨床結(jié)果；多態(tài)性；肝癌；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

在惡性腫瘤中，原發(fā)性肝癌（HCC），常見于發(fā)展中國(guó)家。2008年，中國(guó)有292 966例患者確診為HCC，病例數(shù)在惡性腫瘤中位列第3［1］。HCC切除術(shù)后5年生存率為26%～44%［2］，目前，針對(duì)失去外科手術(shù)機(jī)會(huì)的患者，經(jīng)動(dòng)脈灌注化療（TACE）或單純栓塞術(shù)是延緩病情發(fā)展的主要治療方法［3-4］。

TACE適用于已失去手術(shù)機(jī)會(huì)，Child-Pugh分級(jí)為A或B級(jí)患者，同時(shí)也用于外科手術(shù)及肝移植術(shù)術(shù)前輔助治療。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1（VEGFR-1）和VEGFR-2是與HCC相關(guān)的強(qiáng)效血管生長(zhǎng)素，我們通過對(duì)這2個(gè)受體基因型研究探索其與TACE術(shù)后預(yù)后的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1一般資料

收集2007年1月至2008年1月我院通過病理學(xué)檢查確診、甲胎蛋白（AFP≥400 ng/ml）且影像學(xué)檢查符合HCC的146例患者臨床資料。臨床資料如腫瘤分型、大小、Child-Pugh分級(jí)及手術(shù)方式均來(lái)源于病歷記錄。所有患者均接受TACE作為基礎(chǔ)治療且未做其他治療。術(shù)前無(wú)肝外轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或其他組織器官轉(zhuǎn)移。146例患者均隨訪至2012年。每2個(gè)月隨訪1次，患者死亡作為終點(diǎn)，生存期為患者疾病確診至死亡的時(shí)間，通過末次隨訪統(tǒng)計(jì)，65例（44.5%）患者死亡。中位生存期數(shù)為34.6個(gè)月。

1.2方法

1.2.1TACE手術(shù)步驟Seldinger法穿刺股動(dòng)脈置入血管鞘后，常規(guī)行肝動(dòng)脈、腸系膜上動(dòng)脈造影明確腫瘤的位置、大小及主要供血血管，通過微導(dǎo)管盡可能超選擇插管至腫瘤供血?jiǎng)用}，先經(jīng)導(dǎo)管注入奧沙利鉑，劑量為130 mg/m2。隨后將碘化油及吡柔比星混合乳劑緩慢經(jīng)導(dǎo)管注入，吡柔比星及碘油的用量根據(jù)腫瘤的大小及血供情況選擇，多柔比星劑量為25～40 mg/m2，碘油劑量為5～20 ml，對(duì)于碘油用量超過20 ml仍未達(dá)到滿意栓塞的患者則加用明膠海綿顆粒進(jìn)一步加強(qiáng)栓塞，直到再次造影示對(duì)比劑反流或淤滯時(shí)結(jié)束。

1.2.2血液樣本和基因分析抽取5 ml靜脈血，加入適量0.05 mg/ml乙二胺四乙酸抗凝劑，-20℃保存。按通用基因組DNA提取試劑盒說明書提取基因組DNA，采用MassARRAY時(shí)間飛行質(zhì)譜儀（美國(guó)Sequenom提供）檢測(cè)VEGF-2578C/A，-1154G/ A，-634C/G，-1498T/C的基因分型。通過PCR擴(kuò)增，SAP酶處理，延伸引物單堿基延伸，樹脂除鹽純化，芯片點(diǎn)樣，質(zhì)譜檢測(cè)等步驟，使用Sequenom Assay Design3.1軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，獲得基因分型結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件使用SPSS 16.0對(duì)所以數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比分析，對(duì)正態(tài)分布的連續(xù)變量采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，分類變量采用頻率和百分比來(lái)表示，患者的一般情況包括肝癌的分期、肝功能評(píng)分等采用卡方檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，患者的生存率采用Kaplan-Meier檢驗(yàn)進(jìn)行分析，基因類型和生存率的關(guān)系采用多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行分析，可變風(fēng)險(xiǎn)通過相應(yīng)95%可信區(qū)間的危險(xiǎn)比來(lái)表示。如P＜0.05則認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

146例入組患者，其中男104例（71.2%），女42例（28.8%），平均年齡為（55.1±8.4）歲（24～81歲）。累計(jì)生存率的評(píng)估通過患者的年齡、性別、病毒感染情況、是否合并肝硬化、TMN分期、Child-Pugh分級(jí)、癌灶轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、AFP水平及VEGF基因類型等情況。所有患者5年生存率為55.5%。乙型肝炎及丙型肝炎患者5年生存率明顯降低，而無(wú)肝炎感染患者5年生存率為73.1%。TMN分期Ⅰ至Ⅱ期患者較Ⅲ至Ⅳ期患者生存率明顯提高（P=0.037）。同樣無(wú)癌灶轉(zhuǎn)移患者/腫瘤直徑＜5 cm生存率高于已有轉(zhuǎn)移者/巨大腫瘤患者（P=0.039/P=0.027）。（表1）

經(jīng)過TACE治療患者的生存評(píng)估作為單因素變量并采用Cox回歸分析。結(jié)果顯示，TNM分期，癌灶轉(zhuǎn)移，腫瘤大小及VEGF-2578C/A、VEGF-1154G/A基因類型患者病死率增加，每個(gè)變量的風(fēng)險(xiǎn)比率（HR）為2.31～3.84。乙肝病毒陽(yáng)性患者病死率顯著較高（HR=2.57，95%CI=1.03～6.17）。TNM為Ⅲ或Ⅳ級(jí)的患者病死率較Ⅰ或Ⅱ級(jí)的患者明顯為高（HR=3.07，95%CI=1.36～6.47）。有轉(zhuǎn)移患者病死率比未轉(zhuǎn)移患者高3.13倍，癌灶＞5 cm患者病死率較小病灶患者高2.31倍。對(duì)于VEGF不同類型的患者，VEGF-2578 AA，VEGF-1154 AA風(fēng)險(xiǎn)較野生型高3.40倍及8.41倍。（表2）

多變量分析顯示僅有TNM分級(jí)，癌灶轉(zhuǎn)移及VEGF-2578 AA，VEGF-1154 AA患者為獨(dú)立危險(xiǎn)因素（表3）。TMN為Ⅲ或Ⅳ級(jí)和有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者病死率大幅度增高（HR=3.64，95%CI=1.67～6.79；HR= 2.91，95%CI=1.30～2.67），此外，基因類型為VEGF-2578 AA和VEGF-1154 AA的患者病死率較野生型明顯為高（HR=3.65，95%CI=1.35～11.13；HR=7.13，95%CI=1.46～65.8）。（表3）

表1　接受TACE治療肝癌患者的一般情況及術(shù)后生存率

表2　影響肝癌患者生存率的單因素分析

表3　影響肝癌患者生存率的多變量分析

3　討論

目前的研究提示基因因素可能影響HCC發(fā)展，不同類型的基因?qū)ζ漕A(yù)后的影響可能不盡相同。涉及血管生成的基因可作為各種腫瘤發(fā)展及預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)，比如胃癌，肺癌及腎癌［5-7］。VEGF作為一種血管生長(zhǎng)因子，其作用被認(rèn)為是刺激血管生成，因此可認(rèn)為是能夠調(diào)節(jié)腫瘤血管生成，從而成為對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及擴(kuò)散的重要影響因素［8］。VEGF的多種基因類型現(xiàn)已基本確定，其中VEGF-2578 AA，VEGF-1154 AA類型為改變基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的啟動(dòng)子［6，9］。本研究發(fā)現(xiàn)VEGF-2578C/A和VEGF-1154G/A的多態(tài)性與腫瘤分期、大小密切相關(guān)，同時(shí)與HCC患者的生存時(shí)間成反比。

VEGF基因定位于人類基因組6p21.3位，據(jù)估計(jì)有約30多個(gè)單核苷酸多態(tài)性，其DNA序列的多樣性，可通過影響腫瘤血管生成的途徑造成不同個(gè)體間對(duì)肺癌的敏感性不同。VEGF多態(tài)性的研究揭示了不同種類的腫瘤組織病理學(xué)特征的不同［6，10-13］。前期研究發(fā)現(xiàn)有4種不同的基因型，如VEGF-2578C/A，VEGF-1154G/A，VEGF-634C/G和VEGF-1498T/C等能調(diào)節(jié)VEGF的分泌水平，這4種類型基因與多種疾病相關(guān)，比如乳腺癌，胰腺癌，口腔惡性腫瘤，肝癌，非小細(xì)胞肺癌及胃癌。我們的研究顯示VEGF-2578C/A和VEGF-1154G/A為HCC預(yù)后和發(fā)展的重要相關(guān)因素。雖然曾有研究表明這兩種基因能夠明顯降低某些腫瘤的侵襲性［12，14-15］，與本研究的結(jié)論不太一致，但是考慮到基因的多態(tài)性，相同的基因?qū)τ诓煌哪[瘤在功能上的不同在生物學(xué)上應(yīng)該是合理的。

本研究仍有一些不足，病例選擇均在同一所醫(yī)院，不能代表普通人群，另外，其他未納入研究類型基因也可能影響HCC的預(yù)后。因此需進(jìn)行大樣本，多中心研究，包括不同種族VEGF基因類型與HCC預(yù)后的關(guān)系。

總之，我們發(fā)現(xiàn)VEGF-2578C/A和VEGF-1154G/ A基因類型與肝癌患者的預(yù)后相關(guān)。這可能有助于對(duì)預(yù)測(cè)患者臨床結(jié)果。今后的進(jìn)一步研究需要證實(shí)這些結(jié)果的臨床意義。

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Application of polymorphisms of vascular endothelial growth factor in evaluating the prognosis of hepatocellular carcinoma patients after transcatheter arterial chemoembolization treatment

WANGLi-zhou，LI Xing，SONG Jie，JIANG Tian-peng，WU Xiao-ping，ZHOU Shi.Department of Radiology，Affiliated Hospital of Guiyang Medical College，Guiyang，Guizhou Province 550004，China

ZHOU Shi，E-mail：156722229@qq.com

ObjectiveThrough detecting the genotypes of vascular endothelial growth factor（VEGF）to investigate the correlation between the different VEGF genotypes and survival rate of patients with hepatocellular carcinoma（HCC）after receiving transcatheter arterial chemoembolization（TACE）.Methods A total of 156 patients with pathologically confirmed HCC，who were admitted to authors'hospital during the period from January 2008 to January 2009 and received TACE within 2 months after the disease was confirmed by pathology，were included in this study.The genotypes of VEGF-2578C/A，-1154G/A，-634C/ G，and-1498T/C were determined using a blood kit on a 384-well plat.The clinical data were collected，and the correlations between the genotypes and the patient's prognosis were analyzed.ResultsIn this study，a total of four genotypes were detected，including VEGF-2578C/A，VEGF-1154G/A，VEGF-634C/G and VEGF-1498T/C.The mean 5-year survival rate was 55.47%.Multivariate analysis revealed that only the tumor-nodemetastasis（TNM）stage，metastasis，and the VEGF-2578 AA and VEGF-1154 AA genotypes were independent prognostic factors.HCC of TNM stageⅢ-Ⅳwould greatly increase the risk of death in HCC patients（HR= 3.64，95%CI=1.67-6.79；HR=2.91，95%CI=1.30-6.27）.Moreover，the death risk in patients with the VEGF-2578 AA and VEGF-1154 AA genotypes was much higher than that in patients with the wild-type genotype（HR=3.65，95%CI=1.35-11.13；HR=7.13，95%CI=1.46-65.8）.ConclusionVEGF-2578C/A genotype and VEGF-1154G/A genotype are closely related to the prognosis of HCC patients after TACEtreatment，which may be helpful for predicting the clinical outcome of HCC patients after interventional treatment.（J Intervent Radiol，2015，24：396-399）

clinical outcome；polymorphism；hepatocellular carcinoma；vascular endothelial growth factor

R735.7

A

1008-794X（2015）-05-0396-04

2015-01-09）

（本文編輯：俞瑞綱）

10.3969/j.issn.1008-794X.2015.05.008

貴州省科技計(jì)劃課題（黔科合SY字【2012】：3145號(hào)）

550004貴陽(yáng)貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院影像科

周石E-mail：156722229@qq.com